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Franck BOURGADE, Marion BERARD, Institut Pasteur Paris
Christine MEDAILLE, Laboratoire Vébiotel Arcueil
Armelle SENECHAL, Laboratoire de Contrôle Sanitaire CDTA Orléans
Stéphanie SERRE, Laboratoire Diagnostic CRL France
MISE EN PLACE D'UN PROGRAMME SANITAIREEN ANIMALERIE
ETDIAGNOSTICS DES MICROORGANISMES
INTERFÉRENTS EN RECHERCHE BIOMEDICALE
La Recherche de Parasites chez La Recherche de Parasites chez les rongeurs de laboratoireles rongeurs de laboratoire
Armelle SENECHAL
Responsable du service des Contrôles Sanitaires au CDTA d’Orléans.
Définitions
• Parasites : organisme animal ou végétal qui vit aux dépens d'un autre (appelé hôte), lui portant ou non préjudice sans le détruire
• Commensaux : être vivant qui vit et se nourrit auprès des autres sans leur nuire
Pourquoi faire les analyses?
• Bien être animal• Santé du personnel• Interférence avec la
Recherche• Indicateur de rupture de
barrière
Sur qui faire les analyses parasitologiques ?
• De préférence sur des animaux jeunes• Sur des animaux immunodéficients ou non• Sur des sentinelles ou des animaux issus de
l’élevage
Les recommandations FELASA :- Ectoparasites- Cestodes- Nematodes- Trichomonas- Spironucleus sp- Giardia muris- Amoebae (Entamoeba sp)- Mais aussi Coccidia, Encephalitozoon cuniculi,
Klossiella, Toxoplasma gondii
Myobia musculini et Radfordia sp• Taille : 300-450µ/150-300µ de long• Localisation: essentiellement au niveau de la tête
(entre les oreilles, autour des paupières)
Myocoptes musculini• Taille : 200-300µ de long sur 130µ de large• Localisation: essentiellement au niveau caudale
♀ ♂
Observation sous loupe
Matériel : - Une loupe- Une pince
Méthode :- Ecarter les poils à la base dela queue et entre les oreilles
Observation sous loupe
Limite de la méthode :- Difficulté à mettre en œuvre sur des animaux
vigiles
Faux positifs/faux négatifs:- Présence abondante de pellicules- Très peu d’individus
Les helminthes ou vers : classification
Helminthes = vers
Vers ronds Vers plats Vers annelés
AnnélidesPlathelminthesNémathelminthes
Ex: le lombricCestodesNématodes
• Syphacia spTaille :♀ : 240-400µ sur 3,4-5,8µ♂ : 125 sur 1,1-1,6µŒufs : 134x36µ
Les Nématodes :Oxyures
Les Cestodes :Tænias
• Hymenolepis nana• Hymenolepis dimutaTaille :25-40mm de long sur 1mmœufs: 30-56x 44-62µ
Les Flagellés• Trichomonas sp :Taille des TrophozoitesT.muris : : 10-14 sur 16-26µT.weynioni : 4-16 sur 2,5-6µT.microti : 4 à 9µ de long
Les Flagellés• (Chilomastix sp :)Taille :
Trophozoites : 6-24µm de long par 3-10µ de large Kystes : 6.5-10µ
Comment les chercher ?
• 1) Scotch anal
• 2) Observation directe du contenu intestinal
• 3) Technique de Flottaison à partir de fèces
• 4) Histologie
Comment les chercher ?Pourquoi différentes techniques?Quelles méthodes pour qui ?
TrophozoitesAdultes
KystesOeufs
Scotch test
• Méthode :- Appliquer le scotch en région périanale en
soulevant la queue de l’animal et en appuyant fermement
- Placer le scotch sur la lame- Observer au microscope
Scotch test
Limite de la méthode :- Valable plutôt pour Syphacia sp en raison
du cycle du parasite.
Faux positifs / faux négatifs : - Débris- Mauvaise application du scotch
Observation directePrincipe:
Observer des prélèvements à plusieurs grossissements pour y repérer les différents
éléments parasitaires qui les composent
Observation directe
• Matériel:- Boite de Pétri- Eau physiologique
stérile- Loupe- Microscope- Lame et lamelle- Pipettes
Observation directe
• Méthode :- Prélever le caecum et les intestins- Vider le contenu dans une boite de Pétri contenant
de l’eau Physiologique- Observer sous loupe pour voir les helminthes- Prélever quelques gouttes de la suspension et
mettre sur lame- Apposer une lamelle- Observer au microscope x20 ou x40
Observation directeLimite de la méthode :- Échantillon d'un échantillon, d'un échantillon...- Difficulté de la lecture au sein du contenu
intestinalFaux positifs / faux négatifs:- Confusion avec les débris présents- Nombre de champs observés
Technique de Flottaison
Principe:On utilise la différence de densité de 2
éléments pour permettre au moins dense des deux de flotter en surface.
Technique de flottaison• Matériel:- Mortier et pilon- Milieu
d’enrichissement- Colorant- Lame et lamelle- Microscope- Pipette- Tube- Passoire maille 1mm
Technique de flottaison
• Les solutions d’enrichissement :
- Nitrate de sodium : bon résultat pour Nématodes mais déforme très rapidement les éléments parasitaires
- Sulfate de magnésium : peu coûteux mais tendance àformer des cristaux
- Solution Seather (ou sucré): facile à faire, peu coûteuse mais risque de moisissure
- Sulfate de zinc : bonne concentration des kystes, mais remontée de débris importante
Technique de flottaison• Méthode :- Diluer les fèces dans un bécher par ajout d'une solution de
flottaison jusqu'à obtenir une suspension homogène.- Filtrer la suspension à l'aide d'une passoire et rincer le tamis à
l'aide de la solution de flottaison. Le faire 3 fois de suite.- Verser la suspension obtenue dans un tube à essais en formant
un ménisque convexe.- Déposer une lamelle sur le tube en contact avec la solution- Laisser le montage 15min- La déposer ensuite sur une lame et observer au microscope.
Technique de flottaison
Limite de la méthode :- Cycle parasitaire- Bonne préparation des solutions
Faux positifs / Faux négatifs : - Altération des œufs et des kystes
HistologiePrincipe :
A partir de coupes d'organes, puis coloration, visualisation des éléments
parasitaires figés
• Technique lourde nécessitant un important appareillage (inclusion, coupe, coloration, lecture)
• Temps de réalisation long• Difficulté de la lecture
Histologie
Exemple de résultats sur 2 ans
Syphacia obvelata13,4%
Chilomastix muris16,6%
Entamoeba muris18,7%
Spironucleus muris4,9%
Giardia muris0,2%
Trichomonas sp32,9%
Myobia musculi1,0%
Aspiculuris tetraptera
9,1%
Myocoptes musculinus
2,2%
Radfordia sp1,0%
Franck BOURGADE, Marion BERARD, Institut Pasteur Paris
Christine MEDAILLE, Laboratoire Vébiotel Arcueil
Armelle SENECHAL, Laboratoire de Contrôle Sanitaire CDTA Orléans
Stéphanie SERRE, Laboratoire Diagnostic CRL France
Mardi 13 octobre 2009, à toulouse
MISE EN PLACE D'UN PROGRAMME SANITAIREEN ANIMALERIE
ETDIAGNOSTICS DES MICROORGANISMES
INTERFÉRENTS EN RECHERCHE BIOMEDICALE
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