Quelle procédure diagnostique pour quelle leishmaniose · Leishmaniose cutanée Diagnostic...

Quelle procédure diagnostiquepour quelle leishmaniose ?

Pierre MartyParasitologie-Mycologie

Centre Hospitalier Universitaire de NiceFaculté de Médecine de Nice

Université de Nice - Sophia Antipolis et Inserm U 895

Société de Pathologie Exotique Paris, 19 novembre 2008

Leishmaniose tégumentaireou

Leishmaniose viscérale

Leishmanioses tégumentaires

L. major, Tunisie L. aethiopica, Ethiopie

Leishmanioses tégumentaires

L. infantumLigurie, Italie

L. majorKairouan, Tunisie

Leishmanioses tégumentaires

L. infantumrégion de Nice

Leishmaniose cutanéeDiagnostic

méthodes classiquesBiopsie

ouAspiration

Examen microscopique-Histopathologie (sur coupes)

-Lames colorées au May-Grünwald Giemsa(apposition, grattage ou frottis d’aspiration)

Culture sur milieu Nicolle-Novy-McNeal ou deSchneider pour identification (zymodème)

Biopsie cutanée: nombreuses formes amastigotesMGG x 400

Biopsie cutanée: nombreuses formes amastigotesMGG x 1000

Biopsie cutanée: nombreuses formes promastigotes

Culture sur NNN en 5 jours

Leishmaniose cutanéeDiagnostic

méthodes moderneDiagnostic moléculaire

PCR sur biopsie, grattage ou aspirationéchantillon, frais, fixé ou congelé

Plus sensibleIdentification plus rapide mais plus coûteux

SérodiagnosticWestern blot +++

Diagnostic moléculaire de laleishmaniose cutanée (1)

-Méthodes PCR

-Particulièrement utiles pour les faiblescharges parasitaires

-Spécificité de 100%

-Sensibilité améliorée de 20 à 70% parrapport aux techniques parasitologiquesconventionnelles

Reithinger and Dujardin, J. Clin. Microbiol., 2007, 45:21-25

Diagnostic moléculaire de laleishmaniose cutanée (2)

-Comparaison microscopie, culture etPCR sur 155 lésions suspectes enIran

-Spécificité de 100% des 3 techniques

-Sensibilité de 79,3% de la microscopie-Sensibilité de 86,2 % de la culture-Sensibilité de 98,8% de la PCR

Shahbazi et al, Parasitol. Res., 2008, 103:1159-62

AAAAAA BBBBBBBB CCT

21 kDa

14 kDa

18 kDa

31 kDa

23 kDa

34 kDa

A: lésions évolutives

B: lésions guéries

C: pas de leishmaniose

T: leishmanioseviscérale (L. infantum)

Western blot et leishmaniose cutanée

Le Fichoux et al, Poster, WorldLeish 2, 2001, Hersonissos, Greece

Leishmanioses tégumentairesProcédure diagnostique

Lésion suspecte

Prise desang

Western blot

Wbnégatif

Wbpositif

Microscopie

Prélèvement cutanéSTOP

Culture

Négative → PCR Positive = pas de PCR

Leishmanioses viscérales

Leishmanioses viscéralesClinique:

Fièvre, Pâleur, Splénomégalie

Signes biologiques d’orientation:

Tricytopénie

Syndrome inflammatoire(VS accélérée, hyperprotidémie, hypergammaglobulinémie polyclonale)

SEROLOGIE: forte présomption

ImmunoFluorescenceIndirecte = test de référencefaux négatifs chez les patients très immunodéprimésfaux positifs dans les pathologies auto-immunes(combiné avec WB +++)

Leishmanioses viscérales

DIAGNOSTIC DE CERTITUDE

VISUALISATION DES FORMES AMASTIGOTES

- prélèvement de moelle osseuse: gold standard- ponction splénique chez les anglo-saxons- intérêt du sang périphérique chez les immunodéprimés(après concentration du sang)

TUBE CITRATE POUR REALISER FROTTIS ETCULTURE AU LABORATOIRE

Leishmanioses viscéralesDIAGNOSTIC DE CERTITUDE

SANG PERIPHERIQUE +++

-Leucocytocentrifugation-Culture

-PCR diagnostic (possible sur sérum)-PCR quantitative suivi thérapeutique

Leishmanioses viscéralesProcédure diagnostique

Clinique évocatrice

Prise desang

Tube secsérologie

Tube Citrate de Na

Leucocytocentrifugation (LCC)

+Culture

Tube EDTAPCR

Si sérologiepositive et

LCC négative

Merci de votre attention !