Sérogroupage des Salmonella 1 Réalisation par Christiane JOFFIN

Sérogroupage des Salmonella

1

Réalisation par Christiane JOFFIN

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POURQUOI ?

Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen

de préciser l’identification d’une

Salmonella

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QUE RECHERCHE T ’ON ?

Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobilesAg Vi de la micro-capsule

1- Les antigènes des 1- Les antigènes des Salmonella (et des bactéries Salmonella (et des bactéries

Gram négatives)Gram négatives)

1- Les antigènes des 1- Les antigènes des Salmonella (et des bactéries Salmonella (et des bactéries

Gram négatives)Gram négatives)

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Voir dictionnaire des techniques

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Voir dictionnaire des techniques

2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

2- Le principe du 2- Le principe du sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

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COMMENT ?

Après l’identification biochimique du genre Salmonella

Avec une culture pure sur une gélose non sélective (Kligler par exemple) Par une identification des Ag O, H (et Vi) en utilisant des Ac connus par une technique d’agglutination directe sur lame.

Principe du sérogroupage Identifier :- d ’abord les Ag O de paroi,- puis les Ag H de flagelle- et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag

O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi.

Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat.

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Agglutination des Salmonella par suite

réaction Ag O/ Ac anti O

Agglutination des Salmonella par suite

d ’une réaction Ag H / Ac anti H

3- Les 3- Les réactifsréactifs pour le pour le sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

3- Les 3- Les réactifsréactifs pour le pour le sérogroupage des sérogroupage des

SalmonellaSalmonella

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Voir dictionnaire des techniques

Origine des Ac :

Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum

Prix des sérums : 30 € les 3 mL soit10 € par mL et 10 000 € par L(un lingot d’or (1 kg) = 40 000 €

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3-1- Les Ac anti Ag O• Des sérums O mélange (OMx)

Sérums (contenant un grand nombre d’Ac de sortes différentes) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG)

• Des sérums O monovalents

Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

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Sérum O mélange

Ag spécifiques des Ac du sérum

Groupes agglutinés

OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46

A,B,D,E,L

OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24

C,F,G,H

OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P

OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W

OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53

OMG 60,61,62,63,65,66,67 60,61,62,63,65,66,67

Les Ac anti Ag O monovalents• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si

agglutination avec le sérum OMA ?

• Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ?

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Ac anti 0 1, 2 pour le groupe AAc anti 0 4, 5 pour le groupe BAc anti 0 9 pour le groupe DAc anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E

Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti 0 6 7 8

3-2- Les Ac anti Ag H

• Des sérums H mélange – Sérum contenant un mélange d’Ac anti

Ag H

• Des sérums H monovalents – Sérum ne contenant qu’un seul type d’Ac

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3-3- Les Ac anti Ag Vi

• Une seule valence• Trois sérovars concernés

• Attention : d’autres Entérobactéries possèdent cet antigène (Klebsiella…)

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4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage

4- La technique du 4- La technique du sérogroupagesérogroupage

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Voir dictionnaire des techniques

4-1- Les étapes du sérogroupage

Premières étapes

1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella

2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

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Les étapes du sérogroupage (suite)

Etapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O

3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O– OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4,

5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46)– OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11,

13, 14, 20, 22, 23, 24)Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra recherher si la souche a l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi

4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

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Les étapes du sérogroupage (suite)

Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H

.5- Identifier SI POSSIBLE les Ag H parmi ceux possibles (en

fonction du résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe.

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1 2 3 4 5 6

Sérum OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v

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Anti H 1, 5

4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage

Pas d’agglutination avec l’eau physiologique :

Agglutination avec OMA :

Agglutination avec Anti O9 :

Agglutination avec Anti H1 et H5

Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés

les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L

les Salmonella appartiennent au groupe D

les Salmonella sont Salmonella Panama

La bactérie n’appartient pas au groupe B