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Evolution dynamique de la séquence génétique HA1 du virus de la grippe de type A/H3N2 : comparaison entre des souches provenant d'une population ouverte et d'une population confinée Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles UMR-S 707 INSERM UPMC - Université de Corse- Université de REIMS

Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

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Evolution dynamique de la séquence génétique HA1 du virus de la grippe de type A/H3N2 : comparaison entre des souches provenant d'une population ouverte et d'une population confinée. Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles UMR-S 707 INSERM UPMC - Université de Corse-Université de REIMS. - PowerPoint PPT Presentation

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Page 1: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Evolution dynamique de la séquence génétique HA1 du virus de la grippe de type A/H3N2 : comparaison entre des souches

provenant d'une population ouverte et d'une population confinée

Alessandra THIBAULT FALCHIRéseau Sentinelles

UMR-S 707 INSERM UPMC - Université de Corse-Université de REIMS

Page 2: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

La grippe: une maladie infectieuse contagieuse

A B C

Virus à ARN

les oiseaux et certains mammifères dont l'Homme.

Page 3: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Multiplicité des virus grippaux humains :les types et les sous-types

Type B Type C

Les types et les Les types et les sous-sous-typestypes

H1N1 H2N2 H3N2 H5N1 – H9N2 – H7N7

Type A

Page 4: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Structure des virus grippauxGlycoprotéines de surface:

Hémagglutinine HA (permet l’infection des cellules)

Neuraminidase NA (permet la libération des particules virales néo-synthétisées)

Génome:Segmenté ARN (8 segments)

Glycoprotéines de surface:

Hémagglutinine HA (permet l’infection des cellules)

Neuraminidase NA (permet la libération des particules virales néo-synthétisées)

Génome:Segmenté ARN (8 segments)

H1N1 H2N2 H3N2 H5N1 – H9N2 – H7N7

Type A

Page 5: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

L ’HEMAGGLUTININE :

15 sous-types chez influenza A (3 pour l ’homme)

Elément clef de l ’infection virale: fixation du virus sur l'acide sialique terminal des cellules de l'épithélium cilié de l'arbre respiratoire 

Elle est très immunogène induisant la production d'anticorps dont certains peuvent être neutralisants.

Elle favorise également la fusion des membranes virales et cellulaires au cours de la phase de pénétration du virus.

Support de la variabilité antigénique

Page 6: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

LA NEURAMINIDASE

9 sous-types décrits chez Influenza A (2 pour l ’homme)

Permet la libération des particules virales néo-synthétisées

Deuxième cible des anticorps neutralisants

Second support de la variabilité antigénique

Page 7: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

En dehors de épisodes exceptionnels (pandémies), chaque hiver le virus

échappe par un mécanisme de dérive (glissement) antigénique

Page 8: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Dérive antigénique: apparition des mutations ponctuelles

Les erreurs de l’ ARN polymérase virale non corrigées

La sélection des nouveaux variants échappant au système immunitaire (aux anticorps neutralisants!)

Chaque année, il y a une épidémieLes épidémies ont des profils différentsCar elles sont dues à des virus différents

Page 9: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Représentation graphique: Dérive antigénique

Tronc: séquence temporelle des nouveaux variants viraux

Branches: longueur proportionnelle à la fitness des variants

Gene HA-sous-type H3N2

Adapted from Nelson et al., 2006 with permission.

Page 10: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Dérive antigénique

Pas de détection pendant une période épidémique Lavenu et al., Epidemiol Infect. 2005 (France)

Nelson et al., PLOS Pathogen 2007 (USA)Nelson et al., PLOS Pathogen 2008 (USA)

Périodicité de 3 ansSmith et al., 2005

Page 11: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Nelson et al., 2006; Nelson et al., 2007

Introduction par migration des souches des régions voisines

Phénomènes de recombinaisons entre souches (coinfection)

stochastique

Evolution virus influenza

Diversité génétique

Gene HA-sous-type H3N2

Page 12: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

DERIVE ANTIGENIQUE

Evolution dynamique du virus Influenza

MIGRATIONS RECOMBINAISONS

Page 13: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

POPULATION A FORTE

DEMOGRAPHIENON CONFINÉE

DYNAMIQUEEVOLUTIVE

VIRUS INFLUENZA

POPULATION A FAIBLE

DEMOGRAPHIEET CONFINÉE

?

Page 14: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

POPULATION A FORTE

DEMOGRAPHIENON

CONFINÉE

DYNAMIQUEVIRUS

INFLUENZA

POPULATION A FAIBLE

DEMOGRAPHIEET CONFINÉE

CHAMPAGNE ARDENNES

CORSE

Page 15: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

ETUDE MOLECULAIRE: isolement et identification des souches virales (Influenza virus) dans

la population corse pendant la saison épidémique hivernale

ETUDE PHYLOGENETIQUE: étude génétique spatio-temporelle des virus influenza humains isolés

en Corse. Comparaisons avec les mêmes types de virus isolés dans des régions « ouvertes »

Objectifs

Page 16: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

Saison épidémique

63,4

5,9

30,7

0

10

20

30

40

50

60

70

Type

A

B

NEG

0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

40 43 46 49 52 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33

semaine

Inci

den

ce (

case

s/10

0000

in

hab

itan

ts)

134 prélèvements

95% H3N2

2006-2007

ETUDE MOLECULAIRE

Corse

France C

Page 17: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

1 agcaaaagca ggggatacaa aatgaacact caaatcctgg tattcgccct tgtggcagtc 61 atccacacaa atgcagacaa aatttgcctt ggacatcatg tatcatcaaa tggcaccaag 121 gtaaacacac tcactgagag aggagtagaa gttgtcaatg caacagaaac agtggagcgg 181 acaaacatcc caaaaatttg ctcaaaaggg aaaagaaccg ttgatcttgc caaatgcgga 241 ctactgggga ccattaccgg accacctcaa tgtgaccaat ttctagaatt ttcagctgat 301 ttaataatcg agaggcggga cggaaatgat gtttgttacc cggggaaatt tgtgaatgga 361 gaggcattgc ggcaaatcct cagaaaatca ggtgggatta acaaagaaac aatgggattc 421 acatacagtg gaataagaac caatggaaca actagtgcgt gtagaagatc aggatcttca 481 ttctatgcag aaatgaagtg gctcctgtca gatacagaca atgctgcttt cccacaaatg 541 acgaaatcat acaaaaacac aaggagagaa ccagctctga tagtctgggg aatccatcat 601 tcaggatcaa ccaccgagca gaccaaacta tatggaagtg gaaataaact ggtaacagtc 661 ggaagttcca aatatcatca gtcttttgtg ccgagtccag gaacacgacc acaagtaaat 721 ggccagtccg gacgaattga ttttcactgg ttgatactgg attccaatga cacagttact 781 tttagtttca atggggcttt catagctcca gatcgtgcta gcttcttgaa gggaaagtcc 841 atgggaatcc aaagcgatgt gcaggttgat gccaattgcg aaggggaatg ctaccacagt 901 ggagggacca taacaagcag tttgcccttc caaaacatca acagcagggc agttggcaag 961 tgtccaagat atgtaaaaca ggaaagtcta ttattggcaa cagggatgaa gaatgttccc 1021 gaacttccca aaaaaagaag aaaaagaggc ctgtttggcg ccatagcggg gtttattgaa 1081 aatggttggg aaggtctagt cgacggatgg tactgtttca ggcatcagaa tgcacaagga 1141 gaaggaactg cagcagacta caaaagtacc cagtcggcaa ttgatcagat aaccggaaaa 1201 ttaaatagac tcattgagaa aactaatcag caatttgagc taatagataa tgaattcact 1261 gaggtagaaa agcagattgg caatgtaatt aactggacca gagactccat cacagaagta 1321 tggtcttaca atgctgaact tctcgtggca atggaaaatc agcacactat tgatctagct 1381 gattcagaga tgaacaaatt gtatgagcga gtgaggaaac aattgaggga aaatgctgaa 1441 gaagatggca ctggttgttt tgagattttc cacaaatgtg atgatgattg tatggctagt 1501 ataaggaaca atacttatga tcacagcaaa tacagagaag aagcaattca aaatagaata 1561 caaattgacc cagtcaaatt gagtggtggc tacaaagatg tgatactttg gtttagcttc 1621 ggggcgtcat gctttttact tcttgccatt gcaatgggcc ttgtcttcat atgtgtgaag 1681 tatggaaaca tgcggtgcac tatttgtata taagtttgga aaaaacaccc ttgtttctac 1741 t

Hémagglutinine (HA)

ETUDE PHYLOGENETIQUE

42 séquences du gène HA sous-type H3N2 isolées en Corse et

14 séquences du gène HA sous-type H3N2 isolées en Champagne Ardennes

0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

40 43 46 49 52 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33

semaine

Inci

den

ce (

case

s/10

0000

in

hab

itan

ts)

2006-2007

Page 18: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

0,00

0,01

0,01

0,02

0,02

0,03

0,03

0,04

50 100

150

200

250

300

350

400

450

500

550

600

650

700

750

800

841

bp

Pi

DIVERSITE NUCLEOTIDIQUE

Corse

Champagne Ardennes

Pi= 11.60 x 10-3

Pi=4.15 x 10-3

RESULTATS

Page 19: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

A/Wisconsin/67/2005 G G C D T S K R R S H L N K V D L A S I P S R K D L R I E N

Amino Acid position 50 72 76 122 128 138 140 141 142 149 156 157 170 173 186 188 194 196 219 223 227 228 229 238 241 251 255 267 280 312

Epitopes A Ba, Ab,c,d A Ab, Bb,d B D D B b,d B B b,c,d Ba Da Dc, D c Da D C Ca

A/Nepal/921/2006 E N G Q S E V

A/Corsica/1/2007 , , , , , , K , , Q , , E , , , S , , , , , , , , V , ,

A/Corsica/2/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/3/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , , L , , , , , , , , ,

A/Corsica/4/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , F , , , , , , , , , ,

A/Corsica/9/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , , , , , , , I , , , ,

A/Corsica/12/2007 , , , , , , , G , Q S , E , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/14/2007 , , , , , , , , , Q S , , , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/17/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/20/2007 , , , , , , , G , Q S , E , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/21/2007 , , , , , , , G , Q S , E , , , , , , , , , , , , V , ,

A/Corsica/23/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/27/2007 , , , , , , , , , Q , , , , , , , , , , , , , , , , D ,

A/Corsica/28/2007 , R , , , , , , , Q , , , , , , , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/30/2007 , , , , , , , G , Q , , E , , P , , , , , , , , , , , ,

A/Corsica/36/2007 , , , , , , , , , Q , , E , , , , , , , , , , , , , D ,

A/Corsica/41/2007 , , , A , , , G , Q S , E , , , , , , , , , , , , , , T

A/Brisbane/10/2007 E N A I G V

A/ChampagneArdenne/1/2007 , , N , A , . G . . S . E G , , , , , , , N , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/2/2007 , , N , A , . G . . S . E G , , , , , , , , , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/3/2007 , , N , A , . G G . S . E G , , , , , , , , , , S , , ,

A/ChampagneArdenne/4/2007 , , N , A , . G . . S . E G , , , , , , , , , , S , , ,

A/ChampagneArdenne/5/2007 E , , N , A I . . . . . . . G , , , , , , , N , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/6/2007 E , , N , A I . . . . . . . G , , , , , , , , , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/7/2007 , , N , A , . . . . . . . G , , , , , , , , , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/8/2007 E , , N , A I . . . . . . . G , , , , , , , , , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/9/2007 , , N A A , . G . . S . E G N , , , , , , . , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/10/2007 E , , N , A I . . . . . . . G , , , , , , , , , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/11/2007 , , N , A , . . . . . K . G , , , , , T , , , , , , , ,

A/ChampagneArdenne/12/2007 E , N , A , G . . . S . E G , , , , , , K , S , , , , ,

A/ChampagneArdenne/13/2007 , , N A A , . . . . S . E G , , , , , , , , S , , , , ,

A/ChampagneArdenne/14/2007 , , N , A , . G . . S . E G , , , , , , . , S , , , , ,

RESULTATS

Page 20: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

A/ChampagneArdenne/7/2007 A/ChampagneArdenne/6/2007

A/ChampagneArdenne/8/2007

A/ChampagneArdenne/10/2007

A/Brisbane/10/2007 A/ChampagneArdenne/11/2007

A/Brisbane/9/2006

A/Hiroshima/52/2005

A/ChampagneArdenne/13/2007

A/ChampagneArdenne/2/2007 A/ChampagneArdenne/14/2007

A/ChampagneArdenne/4/2007

A/ChampagneArdenne/1/2007 A/ChampagneArdenne/12/2007

A/Corsica/5/2007

A/Corsica/4/2007

A/Corsica/36/2007 A/Corsica/27/2007

A/Corsica/40/2007

A/Corsica/42/2007

A/Corsica/14/2007

A/Corsica/30/2007 A/Corsica/25/2007

A/Corsica/24/2007

A/Corsica/29/2007

A/Corsica/41/2007 A/Nepal/921/2006

A/Corsica/12/2007 A/Corsica/1/2007

A/Corsica/34/2007

A/Corsica/16/2007 A/Corsica/17/2007

A/Corsica/3/2007

A/Corsica/26/2007

A/Corsica/31/2007 A/Corsica/23/2007

A/Corsica/7/2007

A/Corsica/6/2007

A/Corsica/2/2007 A/Corsica/8/2007

A/Corsica/10/2007

A/Corsica/19/2007

A/Corsica/11/2007

A/Corsica/22/2007 A/Corsica/18/2007

A/Wisconsin/67/2005 A/California/7/2004

A/Fuijan/411/20020.002

Virus vaccinal 2006-2007 et 2007-2008

Virus vaccinal

2008-2009

RESULTATS

Page 21: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

2007

2006

Corse 2007+A/Wisconsin/67/2005

2005

CY022871 - A/ Germany /AF1018/2007

EU204962 - A/Kenya/AF5718/2007

CY022936 - A/ India /AF1082/2007

CY026707 - A/Colorado/UR06 - 0454/2007

EU199283 - A/ NorthCarolina /03/2007

CY026771 - A/Washington/UR06 - 0252/2007

CY026259 - A/Illinois/UR06 - 0555/2007

CY026747 - A/Illinois/UR06 - 0528/2007

CY027867 - A/Virginia/UR06 - 0580/2007

EU100700 - A/ NewYork /25/2006

CY027123 - A/Oregon/UR06 - 0272/2007

CY027195 - A/Vermont/UR06 - 0469/2007

CY027579 - A/ California /UR06 - 0463/2007

EU199364 - A/ SouthDakota /02/2007

EU199256 - A/Colorado/06/2006

CY022934 - A/USA/AF1080/2007

EU199260 - A/Missouri/01/2007

CY022937 - A/USA/AF1083/2007

CY022858 - A/ Germany /AF1004/2007

CY026251 - A/Colorado/UR06 - 0558/2007

EU199259 - A/Georgia/02/2007

EU199258 - A/Colorado/04/2007

EU204965 - A/Kenya/AF5622/2006

EU199273 - A/Wisconsin/03/2007

CY022883 - A/USA/AF1029/2007

CY022874 - A/ Germany /AF1021/2007

CY022926(A/ Hungary /AF1072/2007

CY022875 - A/ Germany /AF1010/2007

EU204966 - A/Kenya/AF5625/2006

CY022878 - A/USA/AF1024/2007

CY022933 - A/ Hungary /AF1079/2007

CY022872(A/ Germany /AF1019/2007

CY022927 - A/ Hungary /AF1073/2007

EU100697 - A/ NewYork /22/2006

CY022920 - A/Honduras/AF1066/2006

AB270996 - A/Nagasaki/N126/2006

CY022919 - A/Honduras/AF1065/2006

CY022921 - A/Honduras/AF1067/2006

CY022922 - A/Honduras/AF1068/2006

EU124178 - A/Tahiti/3/2006

EF554795 - A/ human /Ohio/2006

EF467797 - A/Thessaloniki/85/2006

EU124075 - A/ Waikato /58/2006

CY008043 - A/Canterbury/24/2005

CY020061 - A/ NewYork /923/2006

CY020069 - A/ NewYork /923/2006

DQ983765 - A/Istanbul/CTF - 15/2006

AB270994 - A/Nagasaki/N76/2006

AB270995 - A/Nagasaki/N113/2006

EU155130 - A/HongKong/2268/2006

EU199363 - A/Vermont/01/2007

EU263585 - A/ Corsica /27/2007

EU263594 - A/ Corsica /36/2007

EU263588 - A/ Corsica /30/2007

EU263599 - A/ Corsica /41/2007

EU263559 - A/ Corsica /1/2007

DQ865947 - A/Wisconsin/67/2005

EU263560 - A/ Corsica /2/2007

EU263567 - A/ Corsica /9/2007

EU263570 - A/ Corsica /12/2007

EU263572 - A/ Corsica /14/2007

EU263579 - A/ Corsica /21/2007

EU263567 - A/ Corsica /9/2007

EU263561 - A/ Corsica /3/2007

EU263562 - A/ Corsica /4/2007

EU263586 - A/ Corsica /28/2007

CY015988 - Australia/65/2005

EF566230 - A/Perth/1/2005

CY026093 - A/ Austria /207248/2005

CY026094 - A/ Austria /207265/2005

EF566231 - A/ LyonChu /01375/2005

DQ883606 - A/ Norway /70/2005

EF566222 - A/Brisbane/5/2005

DQ265718 - A/Colorado/360/2005

DQ983761 - A/Istanbul/CTF - 130/2006

EF462550 - A/Oklahoma/373/2005

EU204963 - A/Kenya/AF5626/2006

EU204964 - A/Kenya/AF5627/2006

DQ98376 - (A/Istanbul/CTF - 4/2006

DQ983767 - A/Istanbul/CTF - 33/2006)

EF69256 - (A/Trieste/31/2005

EF566239 - A/Brisbane/6/2005

CY007955 - A/Canterbury/16/2005

CY016012 - A/ W - Australia /70/2005

DQ865965 - A/ Otago /02/2005

CY008059 - A/Canterbury/67/2005

CY019029 - A/Queensland/56/2005)

DQ883601 - A/ Norway /623/2005

94

86

68

100

72

74

70

70

80

82

62

96

100

7896

70

86

92

90

80

58

76

84

0.002

CY022871 - A/ Germany /AF1018/2007

EU204962 - A/Kenya/AF5718/2007

CY022936 - A/ India /AF1082/2007

CY026707 - A/Colorado/UR06 - 0454/2007

EU199283 - A/ NorthCarolina /03/2007

CY026771 - A/Washington/UR06 - 0252/2007

CY026259 - A/Illinois/UR06 - 0555/2007

CY026747 - A/Illinois/UR06 - 0528/2007

CY027867 - A/Virginia/UR06 - 0580/2007

EU100700 - A/ NewYork /25/2006

CY027123 - A/Oregon/UR06 - 0272/2007

CY027195 - A/Vermont/UR06 - 0469/2007

CY027579 - A/ California /UR06 - 0463/2007

EU199364 - A/ SouthDakota /02/2007

EU199256 - A/Colorado/06/2006

CY022934 - A/USA/AF1080/2007

EU199260 - A/Missouri/01/2007

CY022937 - A/USA/AF1083/2007

CY022858 - A/ Germany /AF1004/2007

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CY022921-A/Honduras/AF1067/2006

CY022922-A/Honduras/AF1068/2006

EU124178-A/Tahiti/3/2006

EF554795-A/human/Ohio/2006

EF467797-A/Thessaloniki/85/2006

EU124075-A/Waikato/58/2006

CY008043-A/Canterbury/24/2005

CY020061-A/NewYork/923/2006

CY020069-A/NewYork/923/2006

DQ983765-A/Istanbul/CTF-15/2006

AB270994-A/Nagasaki/N76/2006

AB270995-A/Nagasaki/N113/2006

EU155130-A/HongKong/2268/2006

EU199363-A/Vermont/01/2007

EU263585-A/Corsica/27/2007

EU263594-A/Corsica/36/2007

EU263588-A/Corsica/30/2007

EU263599- A/Corsica/41/2007

EU263559-A/Corsica/1/2007

DQ865947-A/Wisconsin/67/2005

EU263560-A/Corsica/2/2007

EU263567-A/Corsica/9/2007

EU263570-A/Corsica/12/2007

EU263572-A/Corsica/14/2007

EU263579-A/Corsica/21/2007

EU263567-A/Corsica/9/2007

EU263561-A/Corsica/3/2007

EU263562-A/Corsica/4/2007

EU263586-A/Corsica/28/2007

CY015988-Australia/65/2005

EF566230-A/Perth/1/2005

CY026093-A/Austria/207248/2005

CY026094-A/Austria/207265/2005

EF566231-A/LyonChu/01375/2005

DQ883606-A/Norway/70/2005

EF566222-A/Brisbane/5/2005

DQ265718-A/Colorado/360/2005

DQ983761-A/Istanbul/CTF-130/2006

EF462550-A/Oklahoma/373/2005

EU204963-A/Kenya/AF5626/2006

EU204964-A/Kenya/AF5627/2006

DQ98376-(A/Istanbul/CTF-4/2006

DQ983767-A/Istanbul/CTF-33/2006)

EF69256-(A/Trieste/31/2005

EF566239-A/Brisbane/6/2005

CY007955-A/Canterbury/16/2005

CY016012-A/W-Australia/70/2005

DQ865965-A/Otago/02/2005

CY008059-A/Canterbury/67/2005

CY019029-A/Queensland/56/2005)

DQ883601-A/Norway/623/2005

94

86

68

100

72

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70

70

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70

86

92

90

80

58

76

84

0.002

RESULTATS

Page 22: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

CONCLUSIONSDiversité génétique

Processus stochastique

Champagne Ardennes

Effet fondateur

Sélection naturelle

Corse

Dérive antigénique

Page 23: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

PERSPECTIVES

Refaire les mêmes analyses avec les souches

isolées en Corse pendant la campagne 2007-2008 et 2008-2009

Page 24: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

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ABNEG

% 58,8 25,8 15,4

A B NEG

H3N2=42% H1N1=46%

Saison épidémique 2007-200885 prélèvementsCorse

France C

ETUDE MOLECULAIRE

Page 25: Alessandra THIBAULT FALCHI Réseau Sentinelles

MERCI