Au laboratoire de parasitologie !

La technique de filtrationpour le dépistage de la dirofilariose

Dre Brigitte Guay, dmv, M.Sc.Professeur

Collège Laflèche de Trois-Rivières

Introduction

• Pourquoi faire un Difil-Test ?– Pour aider au diagnostic de la

dirofilariose– Pour faire du dépistage– Pour vérifier le bon fonctionnement du

programme de prévention contre le ver du cœur

TECHNIQUE DE FILTRATION

• Technique encore à privilégier au Québec en clinique vétérinaire pour le dépistage du ver du cœur.

• La difficulté de cette technique réside dans la capacité du technicien à reconnaître correctement un microfilaire de Dirofilaria immitis.

• Limites de la technique:– Ne détecte pas les infections amicrofilarémiques,

aussi appelées infections occultes.– Limite humaine : la sensibilité diminue après l’examen

de plus de 10 lames de suite.

Filtration du sang pour la recherche de microfilaires (Difil-Test™) : la

technique en images1. MatérielÉchantillon sanguin dans un tube Vacutainer

Solution lysante

lames lamelles

Colorant

Béchers ou verres de carton

Boîte de filtresSeringue 10 ml Support pour filtreAiguille 20G

Pince

2. La préparation de l’échantillon2.1 Préparer la seringue

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– Bien visser l’aiguille à la seringue

2. La préparation de l’échantillon2.2 Homogénéiser l’échantillon sanguin

– Bien mélanger l’échantillon en basculant le tube à quelques reprises

– Immédiatement avant le prélèvement avec la seringue et aiguille

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Tube avec anticoagulant (EDTA). Notez le bouchon couleur lavande.

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2. La préparation de l’échantillon2.3 Prélever l’échantillon sanguin (1 ml)

– Rétablir la pression dans le tube si nécessaire (ou, injecter 1 ml d’air)

– Insérer l’aiguille au niveau de la zone centrale du bouchon

– Tirer sur le piston

1 ml

2. La préparation de l’échantillon2.4 Essuyer l’embout de la seringue

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Compresse de gaze, KimWipe ou morceau d’essuie-tout

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On tire sur le piston pour aspirer la solution lysante (NE PAS POUSSER LE PISTON)

2. La préparation de l’échantillon2.5 Prélever la solution lysante (~ 9 ml)

7. Centrifuger

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2. La préparation de l’échantillon2.6 Brasser le tout pour bien lyser les cellules sanguines

D’abord, ajouter de l’air (~ 1 ml)

Basculer de 180° plusieurs fois (la bulle va d’un bout à l’autre de la seringue)

Le filtre est pris avec une pince

3. L’installation du filtre

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Le support a 3 parties

1

2

3

Papier bleu séparateurDisque de papier bulle pour maintenir les filtres en place

• Insérer le filtre (surface luisante sur le dessus)• Placer le joint d’étanchéité sur le filtre• Bien visser

3. L’installation du filtre (suite)

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• Visser la seringue au support à filtre• Pousser le piston afin de filtrer

l’échantillon• Le filtrat est rejeté dans un évier ou un

bécher

4. Filtrer l’échantillon

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Bien vérifier au départ qu’il n’y a pas de fuites aux endroits indiqués par les flèches noires.

5. Rincer avec de l’eau du robinet

Séparer d’abord la seringue et le support à filtre

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Aspirer l’eau en tirant le piston

Reconnecter la seringue et pousser le piston

Recommencer l’étape 5 pour enlever le surplus de liquide, en poussant 2-3 ml d’air (facultatif).

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6. Transférer le filtre sur la lame

Séparer d’abord la seringue et le support à filtre

Enlever le joint de caoutchouc

À l’aide de la pince, glisser le filtre, SANS LE RETOURNER, pour le transférer sur la lame

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7. Colorer et placer la lamelle

a) Ajouter une goutte de colorant

b) Placer la lamelle

c) S’assurer d’un bon contact lame-lamelle (le colorant s’étale sur toute la surface) d) Laisser agir 30 sec

Essuyer le dessous de la lame si nécessaire

8. Parcourir la lamelle (filtre) au microscope

La lame est prête à être examinée au microscope, au grandissement total de 100X.

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