COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES ET PRODUITS ILLICITES · 2.8.18. Dosage de l’aflatoxine B1 dans les drogues végétales 2.8.21. Essai des acides aristolochiques dans les drogues végétales

Laboratoire SCL de Strasbourg-Illkirch - vendredi 14 octobre 2011

COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES ET PRODUITS ILLICITES

Pr. A. NICOLASDirecteur des Laboratoires et des Contrôles

[email protected]

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Laboratoire SCL de Strasbourg Illkirch : vendredi 14 octobre 2011 - Pr Alain NICOLAS

AFSSAPS/ANSM - COMPÉTENCES

� « TOUS » LES PRODUITS DE SANTÉ

• Matières premières et médicaments chimiques et biologiques

• Plantes et produits à base de plantes

• Produits cosmétiques

• Dispositifs médicaux

• Produits de tatouage

� Produits illicites et/ou contrefaisants

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Site de Saint-Denis (61 agents)DIRECTION – PHARMACOPÉE - LABORATOIRESProduits sanguins (MDS, PSL) ; Tissus ; Cellules ; PTA ; Médicaments issus des Biotechnologies ; Protéines ; Allergènes ; Médicaments et MP

Chimiques ; Plantes et compléments alimentaires ; Homéopathie ; Lait maternel

PARIS

LYON

MONTPELLIER

AFSSAPS AFSSAPS -- LA DLCLA DLC

Site de Lyon (52 agents)LABORATOIRES

Vaccins ; Sérum ; Sécurité virale

Site de Montpellier -Vendargues(97 agents)

LABORATOIRES Médicaments chimiques ; Produits de thérapie génique ; Cosmétiques ;Dispositifs médicaux ; Produits

frontières ; Biocides

143/147, bd Anatole France93 285 SAINT-DENIS CEDEX

635, rue de la Garenne34 740 VENDARGUES

321, avenue Jean Jaurès69 007 LYON

213 agents213 agents

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PRODUITS ILLICITES - RÔLE DE L’AFSSAPS

� Deux Directions impliquées• La DIE : Département de Veille Sanitaire (DVS)

Inspecteurs impliqués dans :• Procédure spécifique pour le traitement des cas de

contrefaçon

• Plan d’action contre la vente des produits de santé sur Internet

• Opérations déclenchées par autorités judiciaires, douanières, policières (Pangea IV, 20-27 septembre 2011).

• La DLC , par ses contrôles en laboratoire : physico-chimie (Montpellier-Vendargues), plantes (Saint-Denis)

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RISQUES DES PRODUITS Á BASE DE PLANTES

� Substitution ou contamination d’une espèce végétale par une autre espèce toxique• Imprécision des noms vernaculaires relativement à la

nomenclature scientifique (genre, espèce, auteur)

• Confusion entres dénominations voisines (médecines traditionnelles non occidentales)

� Contaminations chimiques• Minéraux: métaux toxiques, arsenic…• Pesticides• Solvants résiduels (cas des extraits secs)• Substances actives de synthèse à visée médicamenteus e

� Toxines consécutives à une contamination• Endotoxines • Mycotoxines: aflatoxines, ochratoxines

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MÉTHODES ANALYTIQUES DE LA Ph. Eur.

� 2.4.27. Métaux lourds dans les drogues végétales et dans les huiles grasses

� 2.8.13. Résidus de pesticides

� 2.8.18. Dosage de l’aflatoxine B1 dans les drogues végétales

� 2.8.21. Essai des acides aristolochiques dans les drogues végétales

� 2.8.22. Dosage de l’ochratoxine A dans les drogues végétales

� 2.8.23. Examen microscopique des drogues végétales

� 5.1.8. Qualité microbiologique des médicaments à base de plantes pour usage oral

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ERREUR D’IDENTIFICATION

Jordan S.A. Cunningham D.G., Marles R.J.

Toxicology and applied pharmacology, 2010, 243, 198-2 16

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SIMILARITÉ PHONÉTIQUE DES DÉNOMINATIONS CHINOISES

Jordan S.A. Cunningham D.G., Marles R.J.Toxicology and applied pharmacology, 2010, 243, 198-2 16

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IDENTIFICATION : APPROCHES MODERNES

� Développement de méthodes CLHP/UHPLC basées sur leprofil chromatographique couplées à l’utilisation des plans d’expériences et des méthodes chimiométriques

Tistaert C., Dejaegher B., Van der Heyden Y.Chromatographic separation techniques and data handli ngmethods for herbal fingerprints : a review.Analytica chimica acta, 2011, 690, 148-161

� Approche génomique : méthodes de biologie moléculai re en routine (« DNA printing »)

Sucher. N.J.,Carles M.C.,

Genome based approaches to the authentification of med icinalplants. Planta Med., 2008, 74, 603-623

Authentification de 400 plantes

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FALSIFICATION INVOLONTAIRE : ARISTOLOCHES

� 1992 : nombreux cas d’insuffisance rénale terminale suite à la consommation de produits à visée amaigrissante (Belgique, France, Europe) contenantdeux plantes chinoises Magnolia officinalis et Stephania tetrandra

� Substitution accidentelle entre deux plantes par confusion car noms chinois voisins

ARISTOLOCHIA FANGCHI ( Guang fangji )

STEPHANIA TETRANDRA ( Han fangji )

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FALSIFICATION INVOLONTAIRE : ARISTOLOCHES

� Depuis 2005Travaux de la Pharmacopée européenne sur les plantes utilisées en Médecine Traditionnelle Chinoise (MTC)

� Élaboration de la monographie RACINE DESTEPHANIA 01/2011 :2478

Essai : absence d’acide aristolochique

(procédé A, CCM)

� Élaboration d’un essai de recherche des acides aristolochiques dans les drogues végétales

(Ph. Eur., 2.8.21)

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ESSAI DES ACIDES ARISTOLOCHIQUES DANS LES DROGUES VÉGETALES (2.8.21)

� PROCÉDÉ A : ESSAI DE DÉPISTAGE DES ACIDES ARISTOLOCHIQUES

Chromatographie sur couche mince (2.2.27)

� PROCÉDÉ B : ESSAI LIMITE DE L’ACIDE ARISTOLOCHIQUE I

Chromatographie liquide (2.2.29)

UV à 390 nm, Teneur max : 2 ppm

� PROCÉDÉ C : ESSAI DE CONFIRMATION DE L’ACIDE ARISTOLOCHIQUE I

Chromatographie liquide (2.2.29) couplée à la spectrométrie de masse (2.2.43).

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FALSIFICATION PAR SUBSTANCES ACTIVES DE SYNTHÈSE

� Un des risques les plus importants

� Addition de substances actives non déclarées ou de leurs analogues pour éviter leur détection

� Beaucoup de familles chimiques concernées en fonction de l’objectif recherché

• Aide au sommeil : addition de benzodiazépines (estazolam, clonazepam)

• Aide à la perte de poids : sibutramine, fenfluramin e

• Dysfonction érectile : sildénafil, tadalafil, varde nafilet leurs analogues

• « Body building » : stéroïdes androgéniques

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FALSIFICATION PAR COMPOSÉS SYNTHÉTIQUES

Petroczi A. et coll., Food and Chem. Toxicol., 2011, 49, 393-402

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OMCL NÉERLANDAIS (www.rivm.nl)

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OMCL NÉERLANDAIS (www.rivm.nl)

2002-2004 (n = 122) : compléments alimentaires autori sés 105 contiennent éphédrine, caféine, synéphrine

2005-2007 (n = 90) : 62 % éphédrine, 25 % sibutrami ne

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CONTRÔLE DES PRODUITS ILLICITES/AFSSAPS

� Méthodes chromatographiques de screeningIdentification des substances actives / recherche d e contaminants / falsifications

• CLHP/DAD/SM � Substances actives non volatiles � Identification par m/z et fragmentation

• CG/SM � Substances actives volatiles � Bibliothèques de spectres disponibles

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CONTRÔLE DES PRODUITS ILLICITES/AFSSAPS

� Développement de méthodes analytiques sur les familles à risque

• Antirétroviraux, antipaludéens, antituberculeux

• Corticoïdes

• Substances à visée amaigrissante (UPLC/DAD)

• Substances pour le traitement de la dysfonction érectile : sildenafil, tadalafil, vardenafil…

• Stéroïdes anabolisants

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MÉDIGUIDE / OFFRE ANALYTIQUE DLC

• Méthode de screening par CLHP/DAD/SM pour la recherche de substances actives

• Méthode de screening par CG/SM pour la recherche de substances actives• Recherche d’inhibiteurs de la PDE5 (sildenafil, tadalafil, vardenafil) par

CLHP/DAD/SM• Recherche et dosage de 34 substances à visée amaigrissante par

UPLC/DAD • Recherche et dosage de corticoïdes dans les produits cosmétiques par

CLHP/UV • Recherche et dosage d’hydroquinone et de ses esters dans les produits

cosmétiques par CLHP/UV• Recherche et dosage de guggulstérones dans les compléments alimentaires

par CLHP/UV• Identification de HGH par analyse directe et après hydrolyse trypsique

(MALDI-TOF)

Recherche de substances actives dans des produits i llicites àvisée thérapeutique, cosmétique et complément alimen taire

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SÉPARATION DE 34 COMPOSÉS Á VISÉE AMAIGRISSANTE

UPLC Waters AcquityColonne BEH C18 100x2,1 mmDébit : 0,35 ml/minGradient : tampon phosphate pH 3,8 / acétonitrileEnregistrement : maxplot

Echantillons analysésmédicaments, compléments alimentaires, poudres café

Eléments de validation- Sélectivité- LOQ estimée 0,1 µg/ml- Linéarité [LOQ-20 µg/ml]- Répétabilité : CV < 3,0%

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GUGGULSTÉRONES

� Le guggul est la gommo-oléorésine sécrétée par l’espèce Commiphora mukul (Hook. ex Stocks ).C’est aussi le nom commun de la plante (arbuste épineux de l’Inde)

� Le « guggulipide » est le produit standardisé résultant de l’extraction de la gommo-oléorésine par l’acétat e d’éthyle. Activité hypolipémiante et hypocholestérolémiante lié e à deux stéroïdes : les guggulstérones qui agiraient e n stimulant la fonction thyroïdienne.

� Il existe deux isomères géométriques : les E- et Z-guggulstérones (pas moins de 1,0 pour cent dans le guggul)

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DOSAGE DE GUGGULSTÉRONES (1)

� Choix du solvant d’extraction• Acétate d’éthyle compte tenu des modalités d’obtention

du guggulipide et de la solubilité des guggulstérones dans ce solvant.

• Méthanol peut servir de solvant mouillant des poudres si nécessaire.

• Acétonitrile selon USP NF 34 Dietary supplement, monographie Guggul

� Extraction DLC Prise d’essai : 250-400 mgAcétonitrile : 1,5 mLUS : 30 minCentrifugationRépétition 2 foisVolume final : 5,0 mL

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� Système chromatographique• Colonne de gel de silice octadécylsilylé pour

chromatographie (Symmetry C18):

75 mm x 4,6 mm, 3,5 µm

• Température : 30°C

• Phase mobile :

• 0 – 15 min : acétonitrile, eau (45 :55 V/V)

• 18 min : acétonitrile, eau (85 :15 V/V)

• Débit : 1 mL/min

• Injection : 5 µL

• Détection : 242 nm V

• Etalons : guggulstérone Z et E

• Gamme : 0,25 à 6,0 µg/mL pour chaque isomère

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�Etalons Z et E guggulstérones

tR forme E : 8,8 min t R forme Z : 13,0 min

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COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES MISSION IMPOSSIBLE ?

A. PETROCZI et coll.Food and ChemicalToxicology2011, 49, 393-402

Mission impossible ? Regulatory and enforcement issues to ensure safety of dietarysupplements

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Répartition des contaminants dans les aliments diét étiques, compléments alimentaires et aliments fortifiés noti fiés dans les alertes RASFF (Rapid Alert System for Food and Feed) dans l’UE

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Contaminants trouvés dans les compléments alimentaire s

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COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES ET SIBUTRAMINE

X-ray powder diffractometry and LC studies of sibutram ine ans itsanalogues content in herbal dietary supplements

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COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES ET SIBUTRAMINE

23 échantillons sur 25 (92 %) contiennent de la sib utramine (SIB) ou son dérivé N-monodéméthylé (DSIB) (OMCL polonais)

15 mg : dose journalière max autorisée (retirée du marché en France)

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NUTRIVIGILANCE ANSES/AFSSAPS

� Bilan 01/09/2009 au 31/08/2010• 60 000 compléments alimentaires disponibles

sur le marché• 123 signalements

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COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES : Á l’INTERFACE PHARMA/NUTRITION

EUSSEN S.R.M.B. et collFunctional foods and dietary supplements : products at th e interface between pharma and nutritionEur. J. Pharmacology, 2011, sous presse, online

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DLC/SCL : UN PARTENARIAT Á DÉVELOPPER

�PISTES Á ETUDIER

• Répertoire partagé des méthodes analytiques et des équipements disponibles

• Fichier des matières premières /produits analysés

• Partage de l’information : saisines

• Stratégie partagée d’analyse d’échantillons : éviter l es doublons, analyses complémentaires, reconnaissance mutuelle des résultats (même référentiel qualité ?)

• Communication concertée

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RÉFÉRENCES (1)

Jordan S.A. Cunningham D.G., Marles R.J.Assessment of herbal medicinal products : challenges and opportunities to increase the knowledge base for safety assessment.Toxicology and applied pharmacology, 2010, 243, 198-216

Sahoo N, Manchikanti P., Dey S.Herbal drugs : standards and regulationFitoterapia, 2010, 81, 462-471

A. Petrucci , G. Taylor , D. P. NaughtonMission impossible? Regulatory and enforcement issues to ensuresafety of dietary supplementsFood and Chemical Toxicology 49 (2011) 393-402

Shaw T. ChenRegulation of research : Is it a drug trial or a supplement trial?Fitoterapia, 82 (2011) 14-16

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RÉFÉRENCES (2)

K. Stypulkowska, A. Blazewicz, J. Maurin, K. Sarna, Z. Fijalek

X-ray powder duffractometry and liquid chromatography studies ofsibutramine and its analogues content in herbal dietary supplementsJ. Pharm. Biomed. Anal. 56 (2011) 969-975

Andrea B. Champagne, Katrina V. Emmel

Rapid screening test for adulteration in raw materials of dietary supplementsVibrational Spectroscopy 55 (2011) 216-223

Simone R.B.M. Eussen, Hans Verhagen, Olaf H. Klungel, Johan Garssen, Henk van Loveren, Henk J. van Kranen, Cathy J.M. Rompelberg

Functional foods and dietary supplements : products at the interface betweenpharma and nutritionEur. J. Pharmacol. (2011) available on line

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RÉFÉRENCES

Pr Marie C. Favrot, Marie-Hélène Loulergue, Anne-Marie Fi llet, Martin Tribout

Dispositif national de vigilance sur les compléments alimentaires

Bilan de la phase pilote et propositions pour la mise en place du dispositif national de nutrivigilance : octobre 2010ansesDirection Santé Alimentation – Cellule de Nutrivigilancewww.anses.fr

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AVERTISSEMENT

• Lien d’intérêt : personnel salarié de l’Afssaps (opérateur de l’Etat) sans lien d’intérêt avec des entreprises privées.

• La présente intervention s’inscrit dans un strict respect d’indépendance et d’impartialité de l’Afssaps vis-à-vis des autres intervenants.

• Toute utilisation du matériel présenté, doit être soumise à l'approbation préalable de l’Afssaps.

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REMERCIEMENTS

Unité Physico-chimie (site de Saint-Denis)

O. GARINOT : [email protected]

R. SOUSSAIN : [email protected]

Documents

COMPLÉMENTS ALIMENTAIRES ET PRODUITS ILLICITES · 2.8.18. Dosage de l’aflatoxine B1 dans les drogues végétales 2.8.21. Essai des acides aristolochiques dans les drogues végétales