Culture Champignon Au Congo

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  • BASE Biotechnol. Agron. Soc. Environ.201014(3),417-422

    EssaisdeculturedequelqueschampignonslignicolescomestiblesdelargiondeKinshasa(R.D.Congo)surdiverssubstratslignocellulosiques

    SimonDibalukaMpulusu(1),FlicienLukokiLuyeye(1),AndrDeKesel(2),JrmeDegreef(2)

    (1)UniversitdeKinshasa.FacultdesSciences.DpartementdeBiologie.B.P.190.KinshasaXI(R.D.Congo).(2)JardinbotaniquenationaldeBelgique.DomainedeBouchout.B-1860Meise(Belgique).E-mail:[email protected].

    Reule29juillet2009,acceptle5janvier2010.

    NeufsouchesdechampignonslignicolescomestiblesisolessurmilieuglosettestessursubstratsdesemisbasedegrainsdemasetdesciuredeboisetsursubstratsdefructificationbasedesciuredeboisetdetigesdeCyperus papyrus,ontdonndesrsultatsencourageants.Lerendementmoyenensporophoreslepluslev,prsde22%enpoidsfrais,atobtenuavecunesouchelocaledePleurotus flabellatussurtigesdeC. papyrus.Unrendementmoyende19%atenregistravecLentinus squarrosulussurunsubstratbasedesciuredebois.IlsagitdespremiresdonnesmthodologiquespubliessurlaculturedesoucheslocalesdechampignonscomestiblespourlAfriquecentrale.Mots cls.Culture,champignonscomestibles,produitsforestiersnonligneux,substrat lignocellulosique,Afriquecentrale,R.D.Congo.

    Cultivation tests for some edible lignicolous mushrooms in the Kinshasa region (D.R. Congo) on different lignocellulosic substrates. Ninestrainsofediblelignicolousmushroomsisolatedonagarmediumandtestedonspawnsubstratesofcorngrainsandsawdust,andonfruitingsubstratesofsawdustandstemsofCyperus papyrus,gavesatisfactoryresults.Thehighestaverageyieldinsporophores,of22%freshweight,wasobtainedwithalocalstrainofPleurotus flabellatusonC. papyrusstems.Anaverageyieldof19%wasrecordedwithLentinus squarrosulusonsawdustsubstrates.Thisconstitutes thefirstpublicationofmethodologicaldataonthecultivationoflocalstrainsofediblemushroomsforcentralAfrica.Keywords.Cultivation,ediblefungi,non-woodyforestproducts,lignocellulosicsubstrate,centralAfrica,D.R.Congo.

    1. IntRoDuCtIon

    En Afrique centrale, les champignons constituentdesproduits forestiersnon ligneuxdune importancecapitale, tant du point de vue nutritionnelquconomique (Ndoye et al., 2007). Nanmoins, lasaisonnalit dans lapparition des sporophores estun facteur limitant pour leur disponibilit, souventalatoireetconcentresurquelquessemainesparan,principalementensaisondespluies.Dslors,lamiseenculturedeschampignonsservletreuneactivitrentable pour les paysans africains. En priode descheresse,ellepermeteneffetdefournirdesproduitsfrais tout en transformant des dchets agricoles enprotinesalimentairesdehautequalit.

    Bien que plus de 300 espces de champignonscomestibles aient t recenses enAfrique tropicale(Zoberi,1978 ;Rammelooetal.,1993 ;Boa,2006),

    trspeuontpufairelobjetdunemiseenculture.Eneffet,beaucoupdespcesdechampignonsafricainssedveloppent exclusivement en association spcifiqueavec des vgtaux en formant des ectomycorrhizes,alors que dautres sont infodes des termites.Ces espces forment des relations symbiotiquesactuellementencorenonreproductiblesenlaboratoire,rendantainsiimpossibleleurmiseenculture(Cailleux,1963;Changetal.,1978;1982;Oei,1993;2003).Notre choix sest donc orient vers des espcessaprotrophes lignicoles (Heim et al., 1965 ;Quimio,1982;Quimioetal.,1982;Vilelaetal.,1982;Oei,2005;DeKeseletal.,2008;EyiNdongetal.,2008),leplusgnralementcultivablessurdesdchetsdorigineagricoleouagro-industriellelargementdisponiblesenAfrique.linstardequelqueschercheursquiontpudomestiquerdessoucheslocales(DeKeseletal.,2002;2008;EyiNdongetal.,2008),nousavonsdlibrment

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    optpourcetypedematriel,contrairementlaplupartdesessaisdecultureinitisenAfriquetropicaledepuisplus de 20 ans et qui concernaient gnralement dessouchesimportes,souventcouteusesetinadaptesauclimatquatorial.

    LeprotocoledemiseencultureprsentsinspiredestechniquesprconisesparOei(1993,2003)misesenoeuvredurantplusdedixannespartirdesoucheslocales de champignons lignicoles comestibles. Ilpermetdevaloriserdiffrentsdchetslignocellulosiqueset prsente lavantage de pouvoir tre transpos enmilieupaysansansgrosinvestissementfinancier.

    lexceptiondelapublicationdesrsultatsdessaisconcluantsdeproductiondesclrotesdeLentinustuber-regium(Fr.)Fr.[=Pleurotus tuber-regium(Rumph.exFr.)Singer](Dibalukaetal.,1992)etdunessailimitaux cultures mycliennes (Mosibono et al., 1991),cetarticleconstituelapremirenotemthodologiquerelativelaproductiondechampignonscomestiblespartirdesoucheslocalesenAfriquecentrale.

    2. MatRIel et MthoDes

    Une tape prliminaire a consist inventorier,auprsdespopulations locales, lesespces lignicolescomestibleslesplusapprcies.Lechoixdesespces cultiver sest bas sur les rsultats dune enquteethnomycologiquemenesur lesiteduLacdeMaValle (S 04255,24 E 15200,16 ; altitude450m) non loin deKinshasa (Dibaluka, 2005). LesspcimensderfrencercoltslorsdenotretravailonttdposslHerbierduJardinbotaniquenationaldeBelgique(BR).

    Les tapes de la culture des champignons misesenuvredanslecadredenotretudesontdtaillesci-aprs.

    2.1. Prparation de milieux gloss et obtention de la culture pure (starter)

    Lisolement est ralis surmilieuglosPDA (filtratdecuissondans1ldeaudminralisede200gpatatedouce+20gagar-agar+20gdextrose,port1l)ouSDA (filtrat de cuisson dans 1 l deau dminralisede18gsonderiz+18gagar-agar+18gdextrose,port 1 l). Le milieu est chauff pendant environ15minjusqudissolutiondesingrdientsetobtentiondunmlangehomognequiestrpartidanslestubes essai. Ces derniers sont bouchs avec un tampondouate coiff dun morceau de papier aluminiumavant dtre striliss (120 C, 15-20 min, pression1 atm).Aprs strilisation, les tubes sont placs enposition incline afin de maximiser la surface decontactdumilieudecultureaprsrefroidissement.Lasporulation est obtenue en plaant dans le goulot du

    tubeessaicontenantlemilieudeculture,unmorceaudechapeauduchampignonfixunrubanParafilm,facehymnialedirigeverslemilieudeculture.Aprs12 h, lemorceau de chapeau est enlev et le tube essaiestrebouchenconditionsaseptiquesau-dessusde la flamme dune lampe alcool. Le tube inoculestplacdansun incubateurMillipore (32 C,48h)afindacclrerlagerminationdesspores,puisincub(~25C,10j).Laculturepureoustarterestensuiteconserveaufrigidaire(4C).

    2.2. Culture de semis

    La culture de semis consiste favoriser ledveloppement dumyclium sur un substrat adquatetstrile.Leproduitobtenulissuedecetteoprationest appel blanc-mre ou blanc de semis etserautilisultrieurementpourensemencer(larder)lesubstratdefructification.

    Prparation du substrat de semis. Deux types desubstratsdesemisonttprpars: grainsdemas:trempage(24h),cuisson(25min), gouttageetessorageausoleil,ajustementdupH7 avecdelachauxteinte(~1%),rpartitiondumilieu (~300g)dansdesbocauxhermtiquementferms par un tampon douate et un couvercle viss, strilisation(120C,1h,1atm), sciure de bois : tamisage (600 g), trempage dans leaudecuissondegrainsdecrales(1l)enrichie avecdusondebl(200g)etdusaccharose(10g), ajustement du pH 7 avec de la chaux teinte (~ 10 g), mlange du milieu dans des sachets en plastiquethermorsistantsoudesbocaux,arationdu milieu laide dune baguette mtallique, stri- lisation(120C,1h,1atm).

    Inoculation et incubation.Linoculationdu substratde semis avec du myclium de la culture pure surmilieuglosestralisedansdesconditionsdestricteasepsie,deprfrencedansuneboitedinoculationolematrieldeprlvementetdetransfertdelinoculumest strilis grce laflammedune lampe alcool.Lincubationdesgrainsdemas(27-29C,15jours)etdelasciuredebois(30jours)estraliselobscurit,dansunearmoireferme.

    2.3. Culture de fructification

    Prparation du substrat de production. Deuxsubstrats de culture ont t utiliss dans des sacs enplastique: sciuredeboisdeMilicia excelsa(Welw.)C.C.Berg (Moraceae) (kambala), Entandrophragma spp. (Meliaceae) (lifaki), Oxystigma oxyphyllum (Harms) J.Lonard (Leguminosae) (tola rouge)

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    etTerminalia superbaEngl.&Diels.(Combretaceae) (limba) en mlange, additionne de diffrents ingrdients(tableau 1).Lasciurefraicheestmise tremperpuisfermentersousbchependantdeux semainesunmois,enveillantlamlangerunefois parsemaine.Leremplissageetlajoutdesingrdients sontraliss,lademande,dansdessacsenplastique thermorsistantsetdoubls(19x28cmet24x38cm recevantrespectivement500get1000gdesubstrat) puisstriliss(120C,1h30,1atm), tigesdeCyperus papyrus L.(Cyperaceae)coupes enmorceaux de 20 cm, trempes (24 h), essores (1 h) puis lies en bottes (~ 12 cm d) avec du fil denylon.Lesbottessontimmergesdansdeleau bouillanteenrichiede1%sucre,1%chauxteinte et10%sondebl,puisgouttes.Lessachetsen plastiquethermorsistantsdoublssontremplispuis striliss(120C,1h30,1atm).

    lardage du substrat de production. Lensemen-cement ou lardage est ralis en conditionsaseptiquesdansuneboitedinoculation,raisonde3%deblancdesemisparrapport lamassedesubstrat.Les sachets sont ensuite ferms hermtiquement laidedebouchonsenmousseetdunanneauenPVC(3cmdehauteur,2,53cmdediamtre).

    Incubation des cultures.Lincubationalieudansunearmoirelobscurittotale(28C,3-4semaines).Uneuniformisationdesconditionsdincubationestassureparundplacementalatoiredessachetsdeculturelintrieur de larmoire une deux fois par semaine.Lincubation est maintenue jusqu envahissementtotal du substrat de production par le myclium etapparitiondespremiersprimordia.

    Induction de la fructification. Les sachets sontdplacs dans des abris-serres dont les murs sontconfectionns laide de nattes et dans lesquelsrgnent une lumire tamise, une humidit leve etdestempraturesmodres(23-28Cenjourne).Ilyalieudviterlerayonnementsolairedirecttoutenpermettantunebonnecirculationdelair,notammentparlemaintiendunespacedarationentrelesmurset le toit. Le contrle de lhumidit relative et de la

    temprature est ralis laide dun hygromtreet dun thermomtre. Larrosage du sol, jonch demorceauxdebriques, raisonde23 foispar jour,permetdegarderuntauxdhumiditlevdanslabri.Uncontrledesmoisissuresestassurenpulvrisantle milieu laide de chaux teinte en solution dansde leau. La destruction systmatique par le feu dessachetsprsentantdeslarvesdinsectespermetdviteruneinfestationmassivedelachampignonnire.

    3. Rsultats et DIsCussIon

    3.1. Inventaire

    Dix espces de champignons lignicoles comestiblesont t inventories dans la rgion de Kinshasa(tableau 2). Elles appartiennent toutes au cortgeclassiquedesespcessaprotrophes,abondantesdanslesous-boisdelafortdensedAfriquecentrale.

    3.2. Mise en culture

    Production de la culture mre. lexception desAuricularia,touteslessouchesmisesenculturepartirde sporesont pouss endans48h aprs inoculationsur PDA. Lutilisation du SDA permet de ramenerla dure dincubation des spores dauriculaires desvaleursprochesdesautresespces.

    Daprs nos essais prliminaires, le milieu SDAamliorerait galement la vitesse de croissancemyclienneparrapportauPDAetce,quellequesoitlespcemise en culture.Ce sont lesLentinus et lesPleurotus qui enregistrent les vitesses de croissancemycliennelesplusleves,delordrede0,80,9cmparjoursurmilieuSDA.

    Production de blanc de semis. Les souchesutilisespourlaproductiondeblancdesemisonttslectionnes sur base de leur vitesse de croissancemyclienne. Les temps dincubation varient de 10 35 jours (tableau 3).Lesubstratconstitudegrainsdemasapermislaconservation4Cdumycliumpendant2 3mois avecmaintiende savigueur.Unrsultatsimilaireatobtenusursciuredeboispendantplusdetroismoistempratureambiante(~25C).

    Production des sporophores. Le blanc de semisde neuf souches slectionnes a t test sur troissubstrats : deux constitus principalement de sciurede bois (S1 et S2) et un base de tiges deCyperuspapyrus(Cp).

    La vitesse denvahissement des substrats par lemycliumdesdiffrentesespcestaitassezuniformeetvoisinede0,5cmparjour.UnediffrencenotoireananmoinstobserveavecMarasmiellusinoderma

    tableau 1.Proportions(%)danslacompositiondusubstratdeproduction(teneurmoyenneeneaudes ingrdients55-65%)Proportions (%) in the composition of production substrate (mean water content of ingredients 55-65 %).

    substrat sciure son son saccharose Chaux de bois de bl de riz teinte

    S1 87,5 10 1 1,5S2 82,5 15 1 1,5

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    (Berk.)SingersurC. papyrus(Cp)avecunevitessedecroissancemyclienneprochede1,5cmparjour.

    Lapparitiondespremierssporophoresestobserve3-4 semaines [Pleurotus (Figure 1), Lentinus]

    4-5 semaines [Auricularia (Figure 2)] aprslinoculationdessubstratsdefructification.

    Les rendements moyens en sporophores (n =6 rptitions) ont t calculs pour quatre de ces

    tableau 2. Inventaire des champignons lignicoles comestibles de la rgion de Kinshasa (noms vernaculaires en langueKikongo) Inventory of edible lignicolous mushrooms in the Kinshasa region (vernacular names in Kikongo language).

    espce spcimen nom vernaculaire

    Auricularia auricula-judae(Fr.)Qul. Dibaluka84 KileboAuricularia delicata (E.M.Fries)Hennings Dibaluka85 KileboAuricularia corneaEhrenb. Dibaluka83 KileboMarasmiellus inoderma (Berk.)Singer Dibaluka70&244 -Lentinus squarrosulusMont. Dibaluka71&248 NsambankeketeLentinus brunneofloccosusPegler Dibaluka63 -Nothopanus hygrophanus(Mont.)Singer Dibaluka239 -Pleurotus flabellatus(Berk.etBr.)Sacc. Dibaluka76 BulunduPleurotus cystidiosusO.K.Miller Dibaluka108 BulunduSchizophyllum communeFr. Dibaluka252 Bunsambi

    tableau 3. Comportementdediffrentessouchesdechampignonssurlessubstratsdesemis Reaction of different mushroom strains on the seedbed substrates.

    espce spcimen souche temps dincubation sur grains de mas sur sciure de bois

    Auricularia cornea Dibaluka83 A.2255 21jours 30-35joursAuricularia delicata Dibaluka85 AF.5115 15-18jours -Marasmiellus inoderma Dibaluka 70 C.1745 15-18jours 21-30joursLentinus brunneofloccosus Dibaluka63 LB.1745 15-18jours -Lentinus squarrosulus Dibaluka71 LS.2255 18-21jours 28-30joursNothopanus hygrophanus Dibaluka239 NT.1745 18-21jours -Pleurotus flabellatus Dibaluka76 L.2054 15-18jours 30-32joursPleurotus cystidiosus Dibaluka108 P.2054 15-18jours 28-30joursSchizophyllum commune Dibaluka252 SCH.2965 10-15jours -

    Figure 1.Pleurotus cystidiosus (soucheP.2054)sursciurede bois (S1) Pleurotus cystidiosus (strain P.2054) on sawdust (S1).

    Figure 2. Auricularia cornea(soucheA.2255)surtigesdeCyperus papyrus(Cp)Auriculariacornea (strain A.2255) on stems of Cyperuspapyrus(Cp).

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    souches. Pour trois des espces, nous constatons(tableau 4) que la production des sporophores estnettementplusimportantesurlesubstratCpquesurS1etS2.

    Sur le substratCp, quelle que soit lespcemiseenculture,lesrendementsensporophoresavoisinent1520%.LasouchedeLentinus squarrosulusMont.testena,parcontre,pasfructifisurcemilieu.

    Des testsprliminaires,dont les rsultatsnesontpas repris dans le tableau 4, ont montr galementque la souche de Marasmiellus inoderma (C.1745)pouvait crotre indiffremment sur sciure de bois etsur tiges de papyrus, alors que les fructifications deLentinus brunneofloccosusPegleretdeSchizophyllum commune Fr. taient limites au substrat Cp avecdes rendements de lordre de 10% seulement. Lesrendementsobtenusaveccessouchesdoiventencoretrevalidsetferontlobjetdepublicationsultrieures.

    4. ConClusIon

    Les rsultats que nous avons obtenus sontencourageants car ils dmontrent que la culture desouches locales de champignons comestibles estpossibledans la rgiondeKinshasao les substratsde production sont diversifis et disponibles ensuffisance.

    En Afrique centrale, la culture de champignonsdevrait trouver sa place dans un systme agricolede type intgr qui permettrait de valoriser, commesubstrat de culture, les dchets lignocellulosiques

    produits auniveaude la ferme.Aprs la rcoltedessporophores, le substrat puis pourrait tre recyclcomme nourriture pour le petit levage ou commecompostpourlesjardinsvillageois.

    Laculturedechampignonsestnanmoinssujettedenombreusescontrainteset,mmesilaconstructiondunecabanedefructificationetlafabricationduneboite dinoculation en constituent les principauxinvestissements,laproductionstabledunproduitdequalitestlacldelarentabilitdecetteactivit.

    Dans le cadre de notre tude, les rendements ensporophores obtenus partir de souches locales depleurotes,delentinsetdauriculairesavoisinent1520%etpeuventtreconsidrscommetrssatisfaisants(Oei, 2003). Les rsultats des tests prliminairesralissavecMarasmiellus inodermarejoignentceuxenregistrsparDeKeseletal.(2008)etDeKeseletal. (2002,utGerronemabeninensisnom. inval.)quiontobtenuunrendementde1020%surdesraflesde palmier huile (Elaeis guineensis), soit peineinfrieurceluidePleurotus cystidiosusO.K.Mills.l.CesauteursobserventnanmoinsquelenvahissementdesraflesparM. inodermaestbeaucoupplusrapidequeparPleurotus spp.,un rsultat confirmparnosobservations(croissancede1,5cmparjourettempsdincubationinfrieur,voirtableau 3).Lavitessedecroissancemycliennenestcependantpasenrapportdirect avec le rendement ou lefficacit biologique :M. inoderma semble en effet moins efficace quePleurotus spp. en ce qui concerne la transformationde son substrat en sporophores. Contrairement auxPleurotus spp. dont la production est homogne,certains sporophores deM. inoderma sont de petitetailleetpeucharnusetnesontgnralementpasprisencomptedanslescalculsderendement.Mmesilaphasefinaledelaculturedecetteespcencessitedesamliorations en termes dobtention de sporophoresdeplusgrandetaille,defacilitationdelarcolteetdemaximisationdelaproduction,M. inodermaconstitueune espce prometteuse pour la culture low-tech enAfrique tropicale. linstardes techniquesutilisesau Ghana, o des dchets animaux (de poissonnotamment) sont ajouts au substratde culturepourobtenir des sporophores de pleurotes plus charnuset plus consistants (Atikpo, 2008), la possibilitdenrichissement du substrat de fructification deM. inodermadevraittretudie.

    Nos efforts doiventmaintenant sorienter vers lemaintienenculturedessouchesquiontdonndebonsrsultats.lchelle locale, lesprincipauxobstacles la culture des champignons proviennent de ladifficult assurer des conditions de strilit totaledumatrieldinoculationetviterledveloppementde moisissures. La mise en place dune filire deproductionetdedistributiondeblancdesemissainpartirduneunitquipedunlaboratoiredevraittre

    tableau 4. Rendementmoyen (n = 6) en sporophores enfonctiondusubstratMean yield (n = 6) in sporophores according to substrate.

    espces souches substrats Rmoy e.t.*

    Pleurotus P.2054 S1 9,73,4cystidiosus Cp 17,93,0Pleurotus L.2054 S1 17,75,0flabellatus S2 10,42,1 Cp 21,82,8Auricularia A.2255 S2 11,01,7cornea Cp 15,75,8Lentinus LS.2255 S1 19,11,9squarrosulus Cp -

    *:Pourcentagedepoidsfraiscart-typedesporophoresenfonctiondupoidsfraisdesubstrat Percentage offresh weight standard deviation of sporophores related to fresh weight of substrate;Cp:tigesdeCyperus papyrus stems of Cyperuspapyrus;S1:87,5%sciuredebois sawdust,10%sondebl wheat bran,1%saccharose saccharose,1,5%chauxteinteslaked lime;S2:82,5%sciuredebois sawdust,15%sonderiz rice bran,1%saccharose saccharose,1,5%chauxteinteslaked lime.

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    envisage, si on souhaite promouvoir la culture deschampignonsenmilieururalenR.D.Congo.

    Remerciements

    Nous tenons remercier vivement les responsables de laCooprationTechniqueBelge(CTB)pouravoirmisnotredisposition les moyens financiers qui nous ont permis demener ces recherches.Nos remerciements vont galementauxhabitantsdesvillagesavoisinant lesiteduLacdeMaValle, ainsi quaux travailleurs et au reprsentant de laConfrencepiscopaleNationaleduCongo,pournousavoiraccueillis et avoir partag avec nous leurs connaissancesmycologiques.

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