Revue Fran~aise de Transfusion et Immuno-h6matologie Tome XXVIII. - - N ° 4. - - 1985 301

A CTUALITE

Ddformabilit6 des drythrocytes d6congel6s

apport d'une nouvelle solution protectrice

par D. Laustriat *, D. Koutsouris **, J. Schwartz-Bloeh *, I. Duwig *, S. Goll *, O. Kane *, M.-L. North *

* Centre R6gional de Transfusion Sanguine de Strasbourg.

** Laboratoire de Biophysique Appliqude, U.E.R. Biomddicale des Saints-P0res, PARIS et Laboratoire de Biophysique U.E.R. M4dieale, BOBIGNY.

INTRODUCTION

A u cours de ces derni6res ann~es, l '4volution des param6tres biochimiques, physicochimiques [1, 2], morphologiques [2, 3, 4],

u l t ras t ruc turaux [5] et rhdologiques [3, 4, 5, 6, 7] ainsi que la survie post-transfusionnelle des h6maties [7, 8, 9, 10] a dtd largement 6tudi6e dans le sang conservd ~t + 4 ° C. Diff6rents milieux de conservation du sang ~t l 'dtat liquide ont ainsi 6t6 6tudi6s jusqu% prdsent. Par contre, nous n 'avons trouv4 aucune 6tude de l '6volution des propridtds rhdologiques et physicochimiques des hdmaties apr~s cong61ation et d6congdlation.

Manucrit re~u le 18-2-1985. -- Accept6 le 8-7-1985.

302 L A U S T R I A T D. et coll.

R6cemment , au Centre de Transfus ion Sanguine de S t rasbourg , KANE et al. [11] ont mis au point une nouvelle solution pro tec t r i ce p e r m e t t a n t une conserva t ion prolong6e des h6mat ies d6congel6es, dans le bu t d 'une ut i l isat ion rat ionnel le d 'un p rodu i t ra re et coflteux, sans nuire h ses qualit6s. Leur 6rude a por t6 sur l '6volution des p a r a m 6 t r e s biochimiques . Nous nous s o m m e s int6ress6s aux propr i6t6s rh6ologiques des h6mat ies d6congel6es et conserv6es h -k 4 ° C dans cet te nouvelle solut ion pro tec t r i ce et nous avons tent6 de les corr61er avec les pr inc ipaux pa ram6t r e s b iochimiques rense ignant sur la qualit6 fonct ionnel le du globule rouge.

Nous avons 6galement suivi l '~volution de ces pa ram~t re s biochi- miques et rh6ologiques sur les 6rythrocytes conserv6s en eau physio- logique apr6s d6cong61ation, pou r connat t re plus pr6cis6ment l'6volu- t ion rh6ologique et fonct ionnel le des h6mat ies sans aucun conser- vateur .

Pa rmi les pa r am6 t r e s rh6ologiques, la d6formabil i t6 6ry throcyta i re est une propr i6t6 de la cellule dont l ' impor t ance phys iopa thologique est ma in t enan t bien admise en ra ison de ses impl icat ions au n iveau de la microc i rcu la t ion [12, 13].

Plusieurs m6thodes p e r m e t t e n t de l ' explorer : mic rop ipe t t es [14], ek tacy tom~t re [15], microf i l t ra t ion [163, cent r i fugat ion [18], fi l tra- t ion [18, 19]. Les m6thodes de f i l t rat ion, s imples et peu coflteuses, sont les plus r6pandues [19, 20, 21, 22], mais l ' in te rpr6 ta t ion de leurs r6sul tats est d61icate car ils d6pendent de fac teurs non li6s h la rh6ologie de l 'h6mat ie isol6e : h6matocr i te , co lmatage des f i l t res pa r des agr6gats et des leucocytes, s6dimentat ion. La fi l trabili t6 ne peu t donc ~tre reli~e h la d6formabil i t6 que si la m6thode utilis~e est caract6r is t ique du c o m p o r t e m e n t rh6ologique de l 'h6matie consid6r6e isol6ment. C'est le cas de la m6thode de mesu re du d6bit initial de f i l t ra t ion [23, 24] qui a 6t6 d6velopp6e r 6 c e m m e n t et que nous avons utilis6e.

MATERIEL ET M E T H O D E S

Preparat ion des ~chant i l lons

Notre 6tude a port~ sur 10 unit6s de 400 h 450 ml de sang prove- nan t de sujets sains, pr61ev6es en poche plas t ique (PVC) con tenan t 63 ml de CPD (ci t ra te phospha te dextrose).

Apr~s 24 heures h -k 4 ° C, les poches ont 6t6 centr ifug6es h 2 500 g, 10 minutes , dans une centr i fugeuse r6frig6r6e (Sorvall). Puis le p l a s m a et le buffy-coat ont 6t6 d6cant6s et les culots globulaires congel6s selon la technique de KRIJNEN [25].

DEFORM.4BILITE DES ERYTHROCYTES DECONGELES 303

Apr~s la ddcongdlation (selon la technique habituelle dans notre Centre) [11], chaque culot globulaire a 6t6 partag6 en deux parties : l 'une est rest6e en eau physiologique (c'est-h-dire dans la derni6re eau de lavage), l 'autre a 6t6 raise en suspension dans la solution protectr ice. L 'ensemble a 6t6 conserv6 ~ + 4 ° C pendant 15 jours h par t i r du jour de la ddcong61ation. J0 d6signe le jour de d6cong61a- tion, J1 le premier jour apr6s d6cong61ation, etc.

La so lut ion protectr ice

La solution protectr ice, appel~e ESOC, a 6t6 mise au point par KANE et al. [11] (Tabl. I).

TAaLEAU I Composi t ion de la solution protectr ice ESOC.

Ad6nlne 0,085 g

Glucose 5 g

Saccharose 47,9 g

Na H 2 P04, H20 0,75 g

No 2 HP04, 2H20 4 g

NoCI 2,5 g

Eou d ls t i l l ~e qsp 1000 el

pH = 7,40 OsmolorltE = 320 mOsm

Mesure de la d6formabil i t6 6rythrocytaire

Les mesures de fil tration ont 6t6 faites avec l 'Hdmorhdombtre MK 1 [23, 24] dont le principe est bas6 sur la m6thode de mesure du d6bit initial de filtration. Le volume filtr6 est de 60 txl; la suspension est ajust6e h u n hdmatocri te de 8 % dans un t ampon phosphate PBS, selon le protocole ddcrit par HANSS [23]. Les mesures sont faites h 25 °. Les filtres utilisds sont des membranes Nucl6pore, de 13 m m de diambtre, 11 ~x d'6paisseur ; les pores ont un diam6tre de 5 ~. Les rdsultats sont exprim6s sous forme d 'un indice de rigidit6, IR :

t , - - tb 100 I R - - × - -

tb H

304 LAUSTRIAT D. et coll.

t, = temps de passage de la suspension globulaire ;

tb = temps de passage du t a m p o n ;

H = h6matocri te, en %.

Cet indice est inddpendant de la conductance hydraul ique du filtre (le m~me filtre dtant utilis6 pour mesurer t~ et tb). Des contr61es ont rnontrd que IR est inddpendant de H (pour des valeurs de H inf~rieures h 10 %) [23, 26]. I1 est donc caract6rist ique des propridt6s rhdologiques moyennes des hdmaties considdrdes. I1 peut ~tre reli6 la r6sistance ~ l 'dcoulement d 'un globule isol6 ~ travers un pore [26, 27, 28]. La precision des mesures de IR est actuellernent de l 'ordre de 7 % pour le m~me dchantillon. Nous avons aussi exprim6 nos r6sultats en variat ion relative de l 'indice, 2~ IR, par rappor t ~ sa valeur le jour de congdlation (IRe) :

IRi - - IRo IR %, au jou r i = × 100

Mesure des param~tres b ioch imiques

IRe

Ont d t d 4tudids in vitro :

- - I'ATP int radrythrocytai re ;

- - le 2,3 DPG intra6rythrocytaire .

Ces dosages ont 6 t 6 faits par mdthode enzymatique (coffret Boeh- ringer) et lus au spec t rophotom6tre Beckmann mod61e 25 h 340 nm [29, 30].

Etude des prot4ines m e m b r a n a i r e s

Elle a d t6 faite par 61ectrophor6se sur gel de polyacrylamide en pr6sence de SDS (doddcyl sulfate de sodium) apr6s solubilisation des s t romas globulaires dans le d6tergent selon la technique usuelle d4crite par LAEMMLI [31].

Protoco le

Nous avons 6tudi6 tous ces param6tres avant congdlation (ce seront nos valeurs de r6fdrence) et nous avons suivi leur 6volution sur les 15 jours suivant la d4cong61ation, avec et sans milieu de conservation.

Tests s tat is t iques

L'analyse statistique fait appel au test t de Student pour sdries appari6es et ~ l 'analyse de la rdgression lin6aire.

DEFORMABILITE DES ERYTHROCYTES DECONGELES 305

R E S U L T A T S

D 6 f o r m a b i l i t 6

Le j o u r d u pr61~vement , la v a l e u r m o y e n n e de 1 ' indice de r ig id i t6 ,

IR , es t de 10 -+- 0,8 ( m o y e n n e -+ 1 6ca r t - type ) ;

Apr~s 24 h e u r e s , j u s t e a v a n t cong61at ion, o n r e t r o u v e I R = 9,4 + 0,7.

Le t a b l e a u I I r 6 s u m e les v a l e u r s m o y e n n e s d e I R e t de 1'6cart- t y p e p e n d a n t les 15 j o u r s s u i v a n t la d 6 c o n # l a t i o n , d a n s la s o l u t i o n de c o n s e r v a t i o n ESOC et s ans s o l u t i o n de c o n s e r v a t i o n (en e a u p h y s i o l o g i q u e ) .

La f i g u r e 1 m o n t r e les v a r i a t i o n s r e l a t i v e s de IR, e n A I R %, en f o n c t i o n d u t e m p s . La zone des v a l e u r s n o r m a l e s de I R a d m i s e d a n s

A ~ z

1 5 0

1 O0

50

Fro. 1. - - Variation relative de IR en fonction du temps.

IR - - IRe A IR %

IRe • ESOC 0 eau physiologique

zone de normalit6

x 100

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TABLEAU I I

Evolution de IR dans I'ESOC et dans l'eau physiologique. (valeur moyenne pour n = 10).

Dons I'ESOC :

Jo J1 J2 J3 J4 J5 J7

8,1 8,6 10,5 g,8 10,2 9,5 8,8

o 0~7 1,3 2,1 1,6 1,4 1,2 1,4

J9 Jll J15

10,7 10 ,1 11,~

2,6 1,2 2,2

Dons l 'eau phYslologlclue :

JO Jl J2 J3 J4 J5 J7 Jg J11 J15

119'6 9,0 8,4 8,7 10,6 10,3 i 16,5 32,6 34,8 41,1

a 2,2 2,3 1,4 1,1 1,8 1,7 12,5 25,4 26,7 16,8

la l i t t6rature [23, 32, 33] et retrouvde dans notre 6tude se situe entre 8 et 12 (zone pointillde de la figure).

Nous voyons que pour les 6chantillons conserv6s en ESOC, IR

reste dans la zone des valeurs normales. En eau physiologique, IR, par t i r de Js, augmente rapidement .

ATP et 2,3-DPG intra6rythrocytaires

Les valeurs sont exprim6es en micromoles par g ramme d'h6mo- globine (Tab1. I I I et IV). Nous avons report6 sur la figure 2 la varia-

TABLEAU I I I

Valeurs moyennes de I'ATP (~mol /g Hb) (avant congdlation : 4,17 + 0,69).

Dans I'ESOC :

J0 J1 J2 J3 J4 J5 J7

ATP 3,57 3,75 4,28 4,43 4,01 4,10 4,79

0,37 0,55 0,41 0,45 0,72 0,57 0,39

J9 dl| J15

4,01 4,56 3,40

0,69 0,23 0,66

Dans l 'eau physio loglque ;

J0 Jl J2 J3 J4 J5 J7 J9 Jll J15

ATP 3,56 3,23 3,29 2,89 2,26 2,18 1,58 0,93 0,79 0,31

0,43 0,33 0,37 0,67 0,51 0,29 0,29 0,21 0,16 0,09

DEFORMAB1LITE DES ERYTHROCYTES DECONGELES 307

+ 10

- 1 0 0

- 3 0

-80

- 1 0 0 '

TABLEAU IV

Valeurs moyennes du 2,3 DPG (~mol/g Hb) (avant congdlation : 15,83 _+ 2,92).

Dons I'ESOC :

Jo Jl J2 J3 J4 J5 J7 J9 JIl J15

2,3 DPG I0,99 I0,38 ll,31 10,88 9,53 8,87 7,82 6,83 5,59 3,8

cr 1,51 1,87 2,25 3,10 2,51 2,07 2,27 2,65 2,15 1,60

Dans 1'eau physiologloue :

Jo Jl J2 J3' J4 J5 J7 J9 I J l l [ J15

2,3 DPG 11,04 7,79 7,17 4,42 2,27 1,80 0,50 non dosable

cr 1,52 1,37 2,50 1,57 0,51 0,41 0,41 non dosable

, A M P ~K

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6 2,3-DPG %

7 15

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I EAU PHYSIOLOGIQUE J

I A A T P Z

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v

v v

v

v

x7 - 100

- 3 0

- 5 0

- 8 0

- 1 0 0

A 2 , 3 DPG Z

7 15

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r-t El

D

EIEi D

FIGURE 2. V a r i a t i o n re la t ive de I 'ATP i n t r a 6 r y t h r o c y t a i r e et d u 2,3-DPG i n t r a 6 r y t h r o c y t a i r e

en f o n c t i o n d u t e m p s , en E S OC (co lonne de g a u c h e ) e t en e a u p h y s i o l o g i q u e ( co lonne de dro i te ) .

- zone de n o r m a l i t 6 .

308 L A U S T R 1 A T D. et colt.

t i o n r e l a t i v e de ces p a r a m ~ t r e s , en p o u r c e n t a g e , t o u j o u r s en f o n c t i o n d u t e m p s , p a r r a p p o r t h l e u r v a l e u r a v a n t cong61at ion.

On c o n s t a t e que les v a l e u r s d 'ATP r e s t e n t s t a b l e s en ESOC. En e a u p h y s i o l o g i q u e , I 'ATP d i m i n u e p r o g r e s s i v e m e n t e t s o r t de la zone des v a l e u r s n o r m a l e s ~t J4" Le 2,3-DPG c h u t e d a n s les deux mi l i eux , b i e n p l u s r a p i d e m e n t en e a u p h y s i o l o g i q u e q u ' e n ESOC.

Prot6ines membranaires

Que ce so i t en ESOC o u en e a u p h y s i o l o g i q u e , on ne n o t e a u c u n e m o d i f i c a t i o n des b a n d e s 6 1 e c t r o p h o r d t i q u e s s u r les t r a c6s r6a l i s6s

Jo, J9 et Jl~.

ESOC eau physiol.

T Jo J~9 J15 Jo J9 "J15 ~l~lr ~;¢" ~ ' ~ ~ bande I

bande 2

bande 3 bande 4,1 bande 4,2

bande 5

bande 6

bande 7

FIGURE 3.

Electrophor~se des l~rot6ines membranaires.

DISCUSSION

Di f fd r en t s a u t e u r s o n t m o n t r 6 u n e a u g m e n t a t i o n de l a v i s cos i t 6 d u sang a u c o u r s de sa c o n s e r v a t i o n ~ l ' d t a t l i q u i d e ~ + 4 ° C [3, 4,

DEFORMAB1LITE DES E R Y T H R O C Y T E S DECONGELES 309

5, 34, 35], plus marqu6e pour le sang tota l que pour les h6mat ies remises en suspension. Elle n ' es t cependan t pas le ref le t d 'une varia- t ion de la viscosit6 p l a sma t ique mais celui d'une modif ica t ion des propr i6t6s rh6ologiques du globule rouge [35, 36].

De n o m b r e u x t ravaux ont 6tudi6 ces modif ica t ions , soi t par mesu re de la viscosit6 sur des suspensions globulaires [3, 4, 7, 35, 36], soit pa r ek tacy tomdt r ie [37], soit pa r la m es u re de la f i l trabil i t6 [6, 7, 38, 39, 40, 41, 42]. Nous avons suivi l '6volution de la d6formabil i t6 du globule rouge d6conge16 pa r la m6thode de m e s u r e du d6bit initial de f i l t ra t ion qui est, c o m m e nous l 'avons signal6, d 'ut i l isat ion ais6e et peu cofiteuse.

Actuel lement , le sang ddcongel6 se pr6sente sous f o r m e de culots en suspens ion dans de l 'eau physiologique (ou dans de l 'eau physio- logique glucos6e et t amponn6e , selon les Centres de Trans fus ion ) ; leur ddlai d 'ut i l isat ion est limit6 h 24 heures [43].

Nos tdsul ta ts m o n t r e n t que la solution ESOC conserve ~ l 'hdmat ie ses propri6tds rh6ologiques et une concen t ra t ion no rma le d'ATP jusqu ' au 15 e jour. La chute de la concen t ra t ion du 2,3-DPG est sans consdquence physiologique car sa rdcupdra t ion in vivo est rapide. Ceci est vrai quand on t ransfuse quelques unit6s de sang, c 'est moins stir en cas de t rans fus ion mass ive ou chez les insuff isants respira- toires [44]. KANE et al. [ 11 ] pr6conisent ndanmoins un d61ai de pdremp- t ion de 9 jours , cer ta ins sangs ayant pr6sent6 apr~s 12 jours de conserva t ion des valeurs l imites sur le p lan biochimique.

En l ' absence de mil ieu de conserva t ion (en eau physiologique), on volt une augmenta t ion rapide de rigidit6 du globule rouge apr6s Js, para l l~ lement h une chute de la concen t ra t ion d'ATP. Le 2,3-DPG chute b r u t a l e m e n t d~s J0.

La ddformabil i t6 6rythrocytai re , dans no t r e m6thode de fi l tration, refl6te dans une p ropor t ion var iable les propr i6 tds viscodlast iques de la m e m b r a n e e t / ou du contenu cellulaire [45]. Nous n 'avons trouvd, ni en ESOC, ni en eau physiologique, de modif ica t ions qualita- t ives des prot6ines m e m b r a n a i r e s qui jouen t un r61e dans la visco- 61asticitd de la m e m b r a n e [46, 47, 48]. Nous avons donc essays de corrdler la d iminut ion de la filtrabilitd, d 'une p a r t h la chute de I'ATP, ce qui a 6t6 d6crit p a r diff~rents au teu r s [6, 7, 37, 38], d ' au t r e pa r t h celle du 2-3-DPG. Avec le 2,3-DPG il n 'exis te aucune corr61ation. Par cont re ,avec I'ATP, nous avons t rouv6 une corr61ation moyenne (r = 0,54) mais s t a t i s t iquement tr6s significative (p ~ 0,001) quand on p r end l ' ensemble des valeurs h pa r t i r de J0. Cette corr61ation est su r tou t 6vidente h pa r t i r du jour o~t I 'ATP n ' e s t plus qu 'h 85 % (J3) de sa va leur de d6par t (r = - - 0,88 ; p < 0,001). En fait, cet te corr6- lat ion ent re fi l trabil i t6 et concent ra t ion en ATP res te controvers6e dans la l i t t6ra ture (49, 50).

310 L A U S T R 1 A T D. et coll.

KANE et al. ont compar6 darts leur dtude [11] l 'dvolution des param~tres biochimiques des hdmaties conservdes, apr6s ddcongd- lation :

- - en ESOC,

- - en SAG-Mannitol et en PAGS-Sorbitol, destinds ~ la conservat ion du sang en milieu liquide. Les rdsultats obtenus dans ces deux milieux sont mddiocres, ils ne semblent pas adaptds ~t la conservat ion du sang ddcongel6.

CONCLUSION

Beaucoup de travaux ont dtd consacr6s /i l '6tude des param~tres biochirniques du sang conserv6, tant en milieu liquide que conge16 ; la possibilit6, actuellement, de les comp16ter par une 6tude rhdolo- gique, appor te des renseignernents suppldrnentaires sur la qualit6 fonctionnelle des hdmaties qui doivent 6tre ddforrnables pour assurer efficacernent leur r61e de t r anspor teur de l'oxyg~ne dans la micro- circulation.

L'6volution des param6tres biochimiques et des propridtds rhdolo- giques des hdrnaties ddcongeldes et conservdes en ESOC h + 4 ° C prouve le maintien de leur qualit6 fonctionnelle durant 15 jours. Le ddlai de pdrempt ion de 9 jours prdconisd par KANE et al. [11] perrnet, en prat ique transfusionnelle courante, de rdpondre h t o u s l e s cas de t ransfusion diffdrde : si le sang ddcongeld n 'est pas utilis6 sur place et doit voyager, s'il n 'a pas 6t6 transfus6 au rnalade fi qui il 6tait destind, s'il a dt6 prdpar6 en vue d 'une op6ration qui est reportde, on peut encore l 'utiliser s'il a 6t6 conserv6 h + 4 ° C.

Des travaux cornpldrnentaires sont en cours, comparan t l 'dvolution des hdmaties ddconge16es et conservdes en ESOC h celle des hdrnaties conserv6es en milieu liquide en SAG-Mannitol et en ADSOL.

RESUME

Rdcemment, KANE et al. (Centre de Transfusion Sanguine de Strasbourg) ont rnis au point une nouvelle solution protectrice, I 'ESOC, permet tan t une conservat ion prolongde des hdrnaties ddcon- geldes. Nous avons suivi pendant 15 jours l '6volution de la ddforma- bilit6 des drythrocytes d~congel6s et conservds, d 'une par t darts cette solution, d 'autre par t en eau physiologique, sans aucune solution de conservation. Nous avons tentd de corrdler cette dvolution rhdologique avec celle de I'ATP intradrythrocytaire , du 2,3-DPG intradrythrocytai re et des protdines rnembranaires.

D E F O R M A B 1 L I T E DES E R Y T H R O C Y T E S D E C O N G E L E S 311

En ESOC, la ddformabil i t6, mesurde pa r f i l t ra t ion sur hdmorh6o- m6t re et expr imde sous fo rme d 'un indice de rigidit6, IR, res te darts des valeurs no rma les pendan t les 15 jours . II en est de m~me pour I'ATP in t radrythrocyta i re .

En eau physiologique, la ddformabi l i t6 d iminue n e t t e m e n t et IR sort des valeurs no rma les apr6s le 5 ¢ jour . L'ATP est inf6rieur aux valeurs normales d6s le 3 e jour .

Le 2,3-DPG diminue dans les deux milieux.

Les 61ectrophor6ses des prot6ines m em brana i r e s , r6alis6es sur gel SDS-polyacrylamide, ne m o n t r e n t de var ia t ion ni en ESOC ni en eau physiologique pendan t les 15 jours .

Nous n 'avons observ6 de parall61isme en t re d6formabil i t6 et ATP in t ra6ry throcy ta i re que pou r des valeurs de I R sup6rieures ~t la normale . Nous n 'avons pas t rouv6 de corr61ation entre d6formabil i t6 et 2,3-DPG.

Nous pouvons 6galement conclure de ce t ravai l que I 'ESOC p e r m e t une bonne conserva t ion des h6mat ies d6congel6es et off re ainsi la possibil i t6 de r6pondre h tous les cas de t ransfus ion diff6r6e et d 'exp6dit ion de sang d6congel6.

SUMMARY

Recently, KANE et al. (Centre de Transfus ion Sanguine, St rasbourg) designed an original p reserva t ive med ium, called ESOC, allowing a pro longed s torage of thawed RBC.

We s tudied on 15 days the evolut ion of thawed RBC deformabi l i ty , while RBC where kep t preserved, on the one hand in this ESOC solution, on the o ther hand in physiologic water , w i thou t any preser- vative med ium. We t r ied to corre la te this rheological evolut ion wi th cellular ATP, cel lular 2,3-DPG and m e m b r a n e p ro te ins evolution. Deformabi l i ty was m eas u red by f i l terabi l i ty wi th an H e m o r h e o m e t r e . The resul ts are given as a r igidity index, IR.

In ESOC, IR and cellular ATP stay in n o r m a l values dur ing the 15 days.

In physiologic water , deformabi l i ty decreases s t rongly and IR is out of n o r m a l values a f te r the fif th day. Cellular ATP decreases out of no rma l values as soon as the th i rd day.

2,3-DPG decreases in bo th media .

M e m b r a n e pro te ins e lec t rophores is does not show any difference nei ther in ESOC nor in physiological water , all f i f teen days long.

312 LAUSTRIAT D. et coll.

W e on ly o b s e r v e d p a r a l l e l i s m b e t w e e n d e f o r m a b i l i t y a n d c e l l u l a r ATP a n d I R w a s h i g h e r t h a n n o r m a l va lues . W e f o u n d no c o r r e l a t i o n b e t w e e n d e f o r m a b i l i t y a n d 2,3-DPG.

W e a l so can conc lue , w i t h th i s s t u d y , t h a t ESOC a l l o w s a g o o d p r e s e r v a t i o n of t h a w e d RBC a n d b y t h i s w a y c o m p l i e s w i t h t h e n e e d s fo r d e l a y e d t r a n s f u s i o n in c u r r e n t p r a c t i c e .

Docteur Dominique L A U S T R I A T ,

Labora to i re d ' Immunoch imie des Protdines Centre de Transfus ion Sanguine,

10, rue Spie lmann, 67085 STRASBOURG Cedex.

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