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DOSAGE PONDERAL DES ANTICORPS ANTI-RH Anne DELSALLE oct 2013 TACT
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2 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Dfinition Examen qui permet de mesurer la quantit danticorps anti-RH prsent dans un chantillon biologique et de lexprimer en poids (g/ml) ou encore en UI/ml. 1 g=5 U.I
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3 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Contexte 2 contextes LFB: dosage des anti-D sur les plasmas de dpart, produits intermdiaires et finis du process de fabrication des Ig anti-D (NATEAD) jusque 2005 respect des spcifications Description de la mthode la pharmacope Europenne chapitre 2.7.13 LBM : dosage des anti-RH(D,C,c,E,e) dans les plasmas/srums des femmes enceintes immunises valuation du risque ftal potentiel
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4 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Maladie hmolytique du Nouveau- N Transport actif des Ig de la circulation maternelle vers le ftus bnfique= transfert lenfant dune immunit passive Par contre, en cas dallo-immunisation maternelle Risque ftal domin par lapparition dune anmie hmolytique, parfois svre (Hb
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5 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 MHNN Anmies ftales svres par IFM sont causes 90% anti-RH1 8% anti-KEL1 et anti-RH4 2% Ac autres spcificits Avant lapplication en 2005, de la prvention antnatale systmatique 28SA par injection dIg anti-D, il persiste encore 750 cas dallo- immunisation anti-D par an en France (0,9/1000 naissances)
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6 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 MHNN Ig G site de traverse placentaire Mcanisme actif en place 15/17 SA (endocytose) Antignes RH matures ds 30/40 jours de vie Sous classes IgG1 et/ou IgG3
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7 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Rle des sous classes Ig IgG1IgG3 20 SA [anti-D] foetus [anti-D] maman 28-32 SA [anti-D] foetus =[anti-D] maman ANEMIE SEVERE+++ (dure d exposition lAC plus longue in utro puisque passage prcoce) Risque accru in utro BILIRUBINE +++ (destruction accrue des GR sensibiliss par IgG3 car affinit RFc IgG3>IgG1 Risque accru chez le NN
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8 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Suivi biologique Arrt du 19 avril 1985 Dcret du 14 fvrier 1992 Chez la femme enceinte immunise RAI dpistage et identification (Ac additionnel(s)) Titrage Dosage pondral si anti-RH Bonne corrlation entre le taux d Ac et le risque dhmolyse in utro chez un ftus incompatible Gnotypage RHD ftal sur plasma maternel
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9 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 2 mthodes de quantification TITRAGEDOSAGE PONDERAL Test Indirect l Antiglobuline en milieu salin 0,9% Manuelle tube Agglutination directe en Bromline- Polyvinyl Pyrrolidone (PVP) Auto-analyseur flux continu Dilutions de raison 2 par entrainementDilutions intermdiaires 2 sries de dilutions indpendantes Lecture macroscopiqueLecture D.O Titre= dernire dilution o lagglutination est encore visible 1 titre dcart = variation de la Q dAC du simple au double Titrage en avec prlvement prcdent Concentration: moyenne calcule partir de X dosages / une gamme talon Meilleure reproductibilit CV 5 max 20 % Q dAC fixe dpend de son affinit pour la cible Toutes spcificits Q dAc dose= Q totale dAc Anti-RH
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10 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Principe du dosage Les Ac sont quantifiables par lintermdiaire des complexes immuns Ag-Ac Lintensit dagglutination varie de faon proportionnelle avec la concentration de lAc lintrieur d une zone troite de concentrations dfinir la zone de linarit Calcul de lchantillon doser par comparaison un talon (Prparation internationale de rfrence du National Institute of Biological Standards and Control)
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11 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Conditions du dosage Loi daction de masse [Ag] [Ac] [Ag-Ac] Kq [Ag-Ac] = K [Ag-Ac] = K [Ac] [Ag] [Ac] [Ag] 0 [Ac totale ]= [Ac] +[Ac-Ag] K0 [Ac totale ]=[Ac-Ag] En excs dantignes, la quantit dAc dose [Ac-Ag] correspond la quantit totale dAc prsente dans lchantillon.
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12 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Conditions du dosage DO= a(Log C) + b
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13 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Conditions du dosage
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14 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 TACT 2013 EFS NORD DE FRANCE SITE DE LILLE
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15 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Interprtation des rsultats Rsultat= 2 valeurs dosage en 2 temps/1temps Interprtation : tablir le lien entre les caractristiques de lAc et le risque danmie ftale Spcificit, titre, concentration, volution, en fonction du terme de la grossesse Objectif: formuler un conseil adapt au suivi biologique de la grossesse
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16 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Interprtation des rsultats Dfinition de valeurs de concentration en Ac correspondant des seuils de risque selon spcificit (talon anti-D/ dosage anti-c) Risque= anmie svre Hb
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17 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Interprtation des rsultats CONCENTRATION (g/ml) INTERPRETATION ANTI-RH1 (,2,3) 0,01 < 0,3FAIBLE 0,3 < 0,7MODEREE 0,7 < 3ELEVEE 3TRES ELEVEE ANTI-RH4(,3) 0,01 < 0,8FAIBLE 0,8 < 1,5MODEREE 1,5 < 4ELEVEE 4 TRES ELEVEE ANTI- 0,01 < 0,8FAIBLE RH2, RH3, RH5 0,8 < 2MODEREE isols 2 < 3ELEVEE
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18 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Interprtation des rsultats Concentration faible ou modre poursuite de la surveillance biologique Concentration leve poursuite de la surveillance biologique + ncessit de prise en charge par un service dobsttrique spcialis dans lidentification des signes danmie ftale et dans la ralisation dactes thrapeutiques TIU
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19 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Relation titre/concentration Donnes issues de 53 patientes immunises diffrentes
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20 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Relation titre/concentration TITRE116 DP g/ml0,3 Ac de faible affinitAc de forte affinit Pas de corrlation troite entre titre et concentration A concentration quivalente, un Ac de haute affinit prsentera un risque plus important danmie svre quun Ac de faible affinit.
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21 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Relation titre/concentration Immunisation anti-RH1 Femmes immunises diffrentes n=28/classe de titre Rpartition des valeurs de dosage pondral en fonction du seuil critique 0,7 g/ml TITRE48163264128256 DP < 0,3 g/ml89,3%92%64,2%10,7%0% 0,3 DP < 0,7 g/ml10,7%8%21,5%50%25%7%3,5% DP 0,7 g/ml0% 14,3%39,3%75%89,3%92,8% Dosage pondral est indispensable pour les anti-RH1 de titre 16
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22 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Relation titre/concentration Donnes issues de 47 patientes immunises diffrentes Dosage pondral des anti-RH4 quel que soit leur titre
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23 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Interprtation des rsultats 2 temps 1 temps2temps >>> 1 temps2temps ancien taux dau moins 50% surveillance accrue en diminuant le dlai entre 2 dosages
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26 / EFS Nord de France - Anne DELSALLE - xx/10/2013 Evolution Anti-RH1(+2/+3) et anti-RH4(+3)
