En 14130 Dosage Vitamine C

NF EN 141302003-12

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Boutique AFNOR pour : SARL EDERNA le 27/10/2010 05:36 NF EN 14130 2003-12

© AFNOR 2003 AFNOR 2003 1er tirage 2003-12-F

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FA102646 ISSN 0335-3931

NF EN 14130Décembre 2003

Indice de classement : V 03-135

norme européenne

Éditée et diffusée par l’Association Française de Normalisation (AFNOR) — 11, avenue Francis de Pressensé — 93571 Saint-Denis La Plaine Cedex Tél. : + 33 (0)1 41 62 80 00 — Fax : + 33 (0)1 49 17 90 00 — www.afnor.fr

ICS : 67.050

Produits alimentairesDosage de la vitamine Cpar chromatographie liquidehaute performance

E : Foodstuffs — Determination of vitamin Cby high performance liquid chromatography

D : Lebensmittel — Bestimmung von Vitamin Cmit Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie

Norme française homologuéepar décision du Directeur Général d'AFNOR le 20 novembre 2003 pour prendre effetle 20 décembre 2003.

Correspondance La Norme européenne EN 14130:2003 a le statut d’une norme française.

Analyse Le présent document spécifie une méthode de chromatographie liquide à hauteperformance (CLHP) qui permet de doser la vitamine C dans les produits alimen-taires.

Descripteurs Thésaurus International Technique : alimentation humaine, produit alimentaire,méthode d’analyse, analyse chimique, dosage, vitamine C, méthode chromatogra-phique, chromatographie liquide haute performance.

Modifications

Corrections


Com géné méthodes analyse agroalimentaire AFNOR V03B

Membres de la commission de normalisation

Président : M FREMY — AFSSASecrétariat : AFNOR

MME BEN TAHAR LIMAGRAIN AGRO INDUSTRIE

M BERTHEAU INRA CTRE RECHERCHES VERSAILLES

M BITON CTCPA

M BLANC EXPERAGRO

MME BLANCHARD DGCCRF LABO INTERREGIONAL

M BLANFUNE SGS MULTILAB

M BOURGEOIS SSHA

M BOURGUIGNON DGCCRF

MME CARLIER CTSCCV

M CASTELIN BESTFOODS FRANCE SI

M CHAMBON SGS MULTILAB CTS

M CHORIN COFRAC

MR COLIRE COOPAGRI BRETAGNE

MME COME A COME

MLLE DA RIZ CTSCCV

MME DAVY LACTALIS R & D

MME DE GRANDIS AFNOR

M DECLERCQ DGCCRF LABO INTERREGIONAL

MME DELFAUT ATLA

M DESSALCES CNRS

MME DIGONNET AFNOR CERTIFICATION

MME DRAGACCI AFSSA

MME DRUEZ AFNOR

M DUHEM CNIEL

M FEINBERG INRA

M FREMY AFSSA

M GAVARD GAVARD ANALYSES CONSEILS

M GESLAIN ANIA

M GOVAERTS SSHA ISHA

M GUERIN AFSSA

M GUILLONNEAU AQUANAL SA

M HOMMET CTCPA

M JAMET DGCCRF LABO INTERREGIONAL

M KIEKEN BAYER CROPSCIENCE SA

MME KRYS AFSSA

MME LACOSTE ITERG — INSTITUT DES CORPS GRAS

MME LAFARGUE BIPEA


— 3 — NF EN 14130:2003

Avant-propos national

Références aux normes françaisesLa correspondance entre les normes mentionnées à l'article «Références normatives» et les normes françaisesidentiques est la suivante :

EN ISO 3696 : NF EN ISO 3696 (indice de classement : T 01-070)

MLLE LAHELLEC AFSSA

MME LANGEVIN CENTRE ANALYSES & RECHERCHE

MME LE GOFF QUALTECH

MME LEBLANC LABORATOIRE ONIC

MME LELIEVRE AFSSA

M LIENART ROQUETTE FRERES

M LOMBARD AFSSA

M MARCHIONI UFR SCIENCES PHARMACEUTIQUES

M MERLE DGCCRF LABO INTERREGIONAL

M MEUNIER NUTRINOV

M MORETAIN AFSSA LERMVD

MME MORRONI OCCES

M NICOL AFNOR

MME NORMAND AFNOR

DR PELTRE ESPCI/ECOLE SUP PHYS CHIMIE IND

M PUECH DION GENERALE ALIMENTATION

M QUINSAC CETIOM

M RAFFI LRMO LARQUA

MME ROBERT LIMAGRAIN AGRO INDUSTRIE

M SYMONDS LABORATOIRE LARA

M TA DANONE VITAPOLE

MLLE THOMAS AFNOR

M TRUCHOT ERIC TRUCHOT — TREXA

MME VENANT INRA CTRE RECHERCHES VERSAILLES

M ZHANG GEVES



NORME EUROPÉENNEEUROPÄISCHE NORMEUROPEAN STANDARD

EN 14130

Juin 2003

La présente norme européenne a été adoptée par le CEN le 21 avril 2003.

Les membres du CEN sont tenus de se soumettre au Règlement Intérieur du CEN/CENELEC qui définit lesconditions dans lesquelles doit être attribué, sans modification, le statut de norme nationale à la normeeuropéenne.

Les listes mises à jour et les références bibliographiques relatives à ces normes nationales peuvent être obtenuesauprès du Secrétariat Central ou auprès des membres du CEN.

La présente norme européenne existe en trois versions officielles (allemand, anglais, français). Une version faitedans une autre langue par traduction sous la responsabilité d'un membre du CEN dans sa langue nationale, etnotifiée au Secrétariat Central, a le même statut que les versions officielles.

Les membres du CEN sont les organismes nationaux de normalisation des pays suivants : Allemagne, Autriche,Belgique, Danemark, Espagne, Finlande, France, Grèce, Hongrie, Irlande, Islande, Italie, Luxembourg, Malte,Norvège, Pays-Bas, Portugal, République Tchèque, Royaume-Uni, Slovaquie, Suède et Suisse.

CENCOMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION

Europäisches Komitee für NormungEuropean Committee for Standardization

Secrétariat Central : rue de Stassart 36, B-1050 Bruxelles

© CEN 2003 Tous droits d’exploitation sous quelque forme et de quelque manière que ce soit réservés dans le mondeentier aux membres nationaux du CEN.

Réf. n° EN 14130:2003 F

ICS : 67.050

Version française

Produits alimentaires — Dosage de la vitamine Cpar chromatographie liquide haute performance

Lebensmittel — Bestimmung von Vitamin Cmit Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie

Foodstuffs — Determination of vitamin Cby high performance liquid chromatography


Page 2EN 14130:2003

Avant-propos ...................................................................................................................................................... 3

1 Domaine d'application ...................................................................................................................... 4

2 Références normatives .................................................................................................................... 4

3 Principe .............................................................................................................................................. 4

4 Réactifs .............................................................................................................................................. 4

5 Appareillage ...................................................................................................................................... 6

6 Mode opératoire ................................................................................................................................ 6

7 Calcul ................................................................................................................................................. 8

8 Fidélité ............................................................................................................................................... 8

9 Rapport d’essai ................................................................................................................................. 9

Annexe A (informative) Exemple de chromatogramme .............................................................................. 10

Annexe B (informative) Données relatives à la fidélité ............................................................................... 11

Bibliographie .................................................................................................................................................... 12

SommairePage


Page 3EN 14130:2003

Avant-propos

Le présent document EN 14130:2003 a été élaboré par le Comité Technique CEN/TC 275 «Analyse des produitsalimentaires — Méthodes horizontales», dont le secrétariat est tenu par DIN.Cette Norme européenne devra recevoir le statut de norme nationale, soit par publication d'un texte identique, soitpar entérinement, au plus tard en décembre 2003, et toutes les normes nationales en contradiction devront êtreretirées au plus tard en décembre 2003.Les annexes A et B sont informatives.

AVERTISSEMENT L’utilisation de la présente norme internationale peut impliquer l’utilisation deproduits et la mise en œuvre de modes opératoires et d’appareillages à caractère dangereux. La présentenorme n’a pas pour but d’aborder tous les problèmes de sécurité liés à leur utilisation. Il incombe àl’utilisateur de la présente norme d’établir, avant de l’utiliser, des pratiques d’hygiène et de sécurité et dedéterminer l’applicabilité des restrictions réglementaires.Selon le Règlement Intérieur du CEN/CENELEC, les instituts de normalisation nationaux des pays suivants sonttenus de mettre cette Norme européenne en application : Allemagne, Autriche, Belgique, Danemark, Espagne,Finlande, France, Grèce, Hongrie, Irlande, Islande, Italie, Luxembourg, Malte, Norvège, Pays-Bas, Portugal,République Tchèque, Royaume-Uni, Slovaquie, Suède et Suisse.


Page 4EN 14130:2003

1 Domaine d'applicationLa présente Norme européenne spécifie une méthode de chromatographie liquide à haute performance (CLHP)qui permet de doser la vitamine C dans les produits alimentaires. La vitamine C correspond à la somme de l’acideL(+)-ascorbique et de l’acide L(+)-déshydroascorbique.

2 Références normativesCette Norme européenne comporte par référence datée ou non datée des dispositions d'autres publications. Cesréférences normatives sont citées aux endroits appropriés dans le texte et les publications sont énuméréesci-après. Pour les références datées, les amendements ou révisions ultérieurs de l'une quelconque de ces publi-cations ne s'appliquent à cette Norme européenne que s'ils y ont été incorporés par amendement ou révision.Pour les références non datées, la dernière édition de la publication à laquelle il est fait référence s'applique.

EN ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai (ISO 3696:1987).

3 PrincipeLa vitamine C est extraite de l’échantillon à analyser en utilisant une solution d’acide métaphosphorique. Unesolution réductrice est utilisée pour transformer l’acide L(+)-déshydroascorbique en acide L(+)-ascorbique. Lateneur totale en acide L(+)-ascorbique est déterminée par CLHP à l’aide d’une détection UV à 265 nm [1], [2].

4 Réactifs

4.1 GénéralitésPour l’analyse, utiliser exclusivement, sauf spécification contraire, des réactifs de qualité analytique reconnue etde l’eau de qualité 1 au moins conformément à l’EN ISO 3696, ou de l’eau bidistillée.

4.2 Produits chimiques et solutions

4.2.1 Acide métaphosphorique, ((HPO3)n).

4.2.2 Phosphate trisodique, fraction massique, w (Na3PO412H2O) 98,0 %.

4.2.3 di-hydrogénophosphate de potassium, w (KH2PO4) 99,0 %.

4.2.4 L-cystéine ou tout autre agent réducteur approprié, w (C3H7NO2S) 99,0 %.

4.2.5 Bromure de N-cétyl–N,N,N–triméthylammonium, w (C19H42BrN) 99,0 %.

4.2.6 Méthanol (qualité CLHP), w (CH3OH) 99,0 %.

4.2.7 Solution d’acide métaphosphorique, concentration en masse q ((HPO3)n) = 200 g/l.

Dans une fiole jaugée de 1 l, dissoudre 200 g d’acide métaphosphorique (4.2.1) avec de l’eau jusqu’au trait dejauge. Conservée à + 4 °C, cette solution reste stable pendant un mois.

4.2.8 Solution d’acide métaphosphorique, q ((HPO3)n) = 20 g/l.

Prélever à la pipette 50 ml de la solution métaphosphorique (4.2.7) et les verser dans une fiole jaugée de 500 ml.Diluer avec de l’eau jusqu’au trait de jauge. Renouveler la solution chaque jour avant analyse.

4.2.9 Solution de phosphate trisodique, q (Na3PO412H2O) = 200 g/l.

Dans une fiole jaugée de 1 l, dissoudre 200 g de phosphate trisodique (4.2.2) avec de l’eau. Compléter avec del’eau jusqu’au trait de jauge.


Page 5EN 14130:2003

4.2.10 Solution de L-cystéine, q (C3H7NO2S) = 40 g/l.

Dans une fiole jaugée de 500 ml, dissoudre 20 g de cystéine (4.2.4) avec de l’eau. Compléter avec de l’eaujusqu’au trait de jauge. Renouveler la solution chaque jour avant analyse.

4.2.11 Phase mobile de CLHP

Dans un bécher, dissoudre 13,6 g de di-hydrogénophosphate de potassium (4.2.3) dans 900 ml d’eau. Filtrer àtravers un filtre de 0,45 m (solution A).Dans un autre bécher, dissoudre 1,82 g de bromure de N-cétyl-N,N,N-triméthylammonium (4.2.5) dans 100 ml deméthanol (4.2.6). Mélanger et filtrer à l’aide d’un filtre de 0,45 m (solution B). Mélanger les 900 ml de solution Aavec les 100 ml de solution B. Si nécessaire, dégazer la solution avant usage.

4.2.12 Solution d’amidon (facultative), q (amidon soluble) = 1 g/100 ml.

4.2.13 Solution d’iode (facultative), c (l2) = 0,05 mol/l.

4.2.14 Acide sulfurique dilué, c (H2SO4) = 0,1 mol/l.

4.3 Substances étalons

4.3.1 Acide ascorbique, acide L(+)-ascorbique, w (C6H8O6) 99,7 %.

(R)-5-[(S)-1,2-dihydroxyéthyl]-3,4-dihydroxy-5-H-furane-2-one.

4.3.2 Acide érythorbique (isoascorbique), acide D(-)-ascorbique, w (C6H8O6) 99,0 %.

(R)-5-[(R)-1,2-dihydroxyéthyl]-3,4-dihydroxy-5-H-furane-2-one.

4.4 Solutions mères

4.4.1 Solution mère d’acide ascorbique, q (C6H8O6) 1 mg/ml.

Dissoudre une quantité d’acide ascorbique (4.3.1) pesée avec exactitude, par exemple environ 100 mg à 0,1 mgprès, dans un volume déterminé, par exemple 100 ml, de solution d’acide métaphosphorique (4.2.8). Renouvelerla solution chaque jour avant analyse.La stabilité de la solution mère peut être améliorée par l’ajout de L-cystéine.

4.4.2 Solution mère d’acide érythorbique, q (C6H8O6) 1 mg/ml.

Dissoudre une quantité d’acide érythorbique (4.3.2) pesée avec exactitude, par exemple environ 100 mg à 0,1 mgprès, dans un volume déterminé, par exemple 100 ml, de solution d’acide métaphosphorique (4.2.8). Renouvelerla solution chaque jour avant analyse.

4.4.3 Essai de pureté (facultatif)

Dans une fiole conique, peser avec exactitude environ 150 mg d’acide ascorbique étalon et dissoudre en ajoutant10 ml d’acide sulfurique dilué (4.2.14) et 80 ml d'eau exempte de dioxyde de carbone. Ajouter de l'amidon ou dela solution d'amidon (4.2.12), puis titrer avec une solution d’iode (4.2.13) jusqu'à obtention d’une colorationpermanente. 1 ml de solution d’iode correspond à 8,81 mg d'acide ascorbique.Calculer la pureté de la substance étalon, wst, en pourcentage d’après l'équation (1) :

... (1)

où :V1 est le volume de solution d’iode utilisé, exprimé en millilitres (ml) ; m est la masse de l'échantillon, exprimée en milligrammes (ml) ;8,81 est le coefficient de conversion ;100 est le coefficient de conversion pour ramener le résultat en pourcentage.

wstV1 8,81 100

m-----------------------------------------=


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4.5 Solutions d'étalonnage

4.5.1 Solutions d'étalonnage d'acide ascorbique, q (C6H8O6) = de 5 g/ml à 50 g/ml.

Prélever à la pipette 0,5 ml à 5 ml de la solution mère d'acide ascorbique (4.4.1) et verser dans une fiole jaugéede 100 ml, puis diluer avec de l’acide métaphosphorique (4.2.8) jusqu’au trait de jauge. Renouveler la solutionchaque jour avant analyse.

4.5.2 Solution d'étalonnage d’acide érythorbique (facultative), q (C6H8O6) 10 g/ml

Prélever à la pipette 1 ml de la solution mère d'acide érythorbique (4.4.2), verser dans une fiole jaugée de 10 mlet diluer avec de la solution d’acide métaphosphorique (4.2.8) jusqu’au trait de jauge. Il convient que la solutionétalon ait une concentration en acide érythorbique comprise entre 5 g/ml et 20 g/ml. Renouveler la solutionchaque jour avant analyse.

5 Appareillage

5.1 GénéralitésMatériel courant de laboratoire, verrerie ainsi que les éléments suivants :

5.2 Spectromètre UV, permettant de mesurer l’absorbance aux longueurs d’ondes définies.

5.3 Système de chromatographie liquide à haute performance, comprenant une pompe, un injecteurd’échantillon, un détecteur UV réglé à 265 nm et un dispositif d’évaluation tel qu’un intégrateur.

5.4 Colonne pour CLHP

5.4.1 Généralités

Il est possible d’utiliser des particules ou des colonnes de dimensions différentes de celles indiquées dans laprésente norme européenne. Les paramètres de séparation doivent alors être adaptés à ces matériaux afin degarantir l’obtention de résultats équivalents. Le critère de performance des colonnes analytiques appropriées estla résolution, sur la ligne de base, de l'acide L-ascorbique et de l'acide érythorbique [3].

5.4.2 Colonne analytique

Lichrospher® 100 RP 18 1) endcapped, taille des particules : 5 m, diamètre : 4,0 mm et longueur 250 mm.

5.5 Dispositif de filtrageMembrane filtrante ayant, par exemple, une grosseur de pores de 0,2 µm ou de 0,45 m. Le fait de filtrer la phasemobile et la solution de l’échantillon pour essai à travers une membrane filtrante avant utilisation ou injection,permet d'augmenter la durée de vie des colonnes.

6 Mode opératoire

6.1 GénéralitésIl convient de réaliser les solutions étalons et les solutions d’échantillon aussi rapidement que possible et de lesmaintenir à une température inférieure à 25 °C pendant l'analyse. Elles ne doivent pas être analysées au delàde 8 heures.

1) La colonne Lichrospher® 100 RP 18 endcapped est un exemple de produit approprié disponible dans lecommerce. Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs de la présentenorme européenne et ne saurait constituer un engagement du CEN à l’égard de ce produit. Des produitséquivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux mêmes résultats.


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6.2 Préparation de l’échantillon pour essai

Homogénéiser l’échantillon pour essai. Broyer les matières grossières au moyen d’un moulin approprié et denouveau mélanger. Procéder à l'analyse immédiatement après homogénéisation. La préparation de l’échantillonpour essai pour les fruits et légumes crus doit être réalisée avec l’extraction (voir 6.3.1).

6.3 Préparation de la solution d’échantillon pour essai

6.3.1 Extraction

Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser, au mg près, une quantité adéquate d’échantillon, par exemple 3 g, si lateneur en vitamine C est d’environ 50 mg/100 g. Ajouter 80 ml de solution d’acide métaphosphorique (4.2.8) etagiter. Diluer jusqu’au trait de jauge avec de l’acide métaphosphorique, agiter et filtrer. Ceci est la solution d’extraitde l’échantillon.Dans le cas des fruits et des légumes crus, découper une quantité adéquate d’échantillon à l’aide d’un couteau,mélanger et peser, au mg près, une prise appropriée de 2 g à 10 g, par exemple, d’échantillon, directement dansun bécher de 100 ml contenant de l’acide métaphosphorique (4.2.8). Homogénéiser et transvaser quantitative-ment dans une fiole jaugée de 100 ml. Agiter et filtrer. Ceci est la solution d’extrait de l’échantillon.

NOTE La stabilité de la solution d’acide ascorbique peut être améliorée, par exemple en ajoutant à la solution d’acidemétaphosphorique 125 ml de solution de cystéine (4.2.10) ou de dithiothreitol (DTTA) ou encore d’acide phosphoriquediéthylène triamine (DPTA). Cependant, étant donné que ces stabilisants sont susceptibles d’avoir une incidence sur lachromatographie, ils n’ont pas été utilisés dans le cadre de l’essai interlaboratoires.

6.3.2 Étape de réduction

Dans un bécher de 50 ml, verser immédiatement 20 ml de la solution d’extrait de l’échantillon (6.3.1). Ajouter10 ml de solution de L-cystéine (4.2.10). Remuer à l’aide d’un agitateur magnétique et ajuster le pH à une valeurcomprise entre 7,0 et 7,2 par l’ajout de solution de phosphate trisodique (4.2.9), puis remuer pendant 5 minexactement. Ensuite ramener le pH à une valeur comprise entre 2,5 et 2,8 par l’ajout de solution d’acidemétaphosphorique (4.2.7). Transférer quantitativement dans une fiole jaugée de 50 ml en rinçant à l’eaul’électrode, le barreau magnétique et le bécher. Compléter au trait de jauge avec de l’eau. Filtrer à l’aide d’unemembrane filtrante (5.5). Ce filtrat est utilisé pour la chromatographie.Si l’échantillon contient des agents épaississants ou solidifiants, il est utile de les faire précipiter afin d’écarter toutrisque d’obstruction de la colonne. Dans ce cas, ajouter 1 ml de méthanol (4.2.6) à 4 ml de la solution d’échantillonobtenue après réduction. Filtrer à travers une membrane filtrante (5.5). Ce filtrat est utilisé pour lachromatographie.

6.4 Identification

Identifier l’acide L-ascorbique en comparant les temps de rétention des différents pics visibles sur les chromato-grammes obtenus avec la solution d’échantillon pour essai et avec la solution d’essai étalon. L’identification despics peut aussi être réalisée en ajoutant l’étalon à la solution d’échantillon pour essai.La séparation et la quantification se sont révélées satisfaisantes lorsque les conditions expérimentales suivantesont été respectées (voir également Figure A.1). Les conditions données ci-après ont été utilisées lors de l’essaiinterlaboratoires :

Phase stationnaire : Lichrospher 100 RP 18 endcapped, 5 m, 250 mm 4,0 mmPhase mobile : Solution A + solution B (4.2.11)Débit : 0,7 ml/minVolume d’injection : 30 lDétection : UV à 265 nm

Ce mode opératoire peut également être utilisé pour doser l’acide érythorbique qui n’a pas été inclus en tant quevitamine C.

NOTE Il est possible d’utiliser d’autres conditions chromatographiques, à savoir une phase mobile constituée de 10 %d’acétonitrile et de 90 % d’eau contenant 13,6 g/l de di-hydrogénophosphate de potassium et 2 g/l de cétrimide, unecolonne de type C8 avec une taille de particules de 10 m, de 250 mm 4,6 mm, avec un débit de (1,0 0,1) ml/min.


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6.5 Dosage

Selon le système, injecter des volumes appropriés (au plus 50 l) de solution étalon et de solution d’échantillonpour essai dans le système de CLHP. Pour réaliser un dosage par étalonnage externe, intégrer les aires de picsou les hauteurs de pics et comparer les résultats avec les valeurs correspondantes obtenues pour l’étalon. Uneautre solution consiste à utiliser une courbe d’étalonnage, auquel cas il faut en vérifier la linéarité.

7 CalculPour le calcul, utiliser une courbe d’étalonnage ou les programmes correspondants de l'intégrateur, ou bien appli-quer la méthode simplifiée suivante :Calculer la fraction massique, w, de l’acide ascorbique en mg/100 g présent dans l’échantillon à l’aide del’équation (2) :

... (2)

où :As est l’aire du pic ou la hauteur du pic pour l’acide L-ascorbique, obtenue avec la solution d’échantillon

pour essai (6.3.2), exprimée en unités de surface ou de hauteur ;Ast est l'aire du pic ou la hauteur du pic pour l’acide L-ascorbique, obtenue avec la solution d’étalonnage

(4.5.1), exprimée en unités de surface ou de hauteur ;q est la concentration en acide L-ascorbique de la solution étalon, exprimée en microgrammes par

millilitre (g/ml) ;m est la masse de l’échantillon, exprimée en grammes (g) ;V est le volume total de la solution d’échantillon définie en 6.3.1 avant l’étape de réduction, exprimé en

millilitres (ml) ;F est le facteur de dilution de l’étape de réduction (en l’occurrence 2,5) ;1 000 est le coefficient de conversion des microgrammes en milligrammes ;100 est le coefficient utilisé pour calculer la teneur en mg par 100 g.Consigner les résultats obtenus pour la vitamine C en mg/100g.Dans le cas d’une étape de précipitation (6.3.2), multiplier les résultats de l’équation (2) par 5/4.

8 Fidélité

8.1 GénéralitésLes données relatives à la fidélité pour le dosage de la vitamine C ont été établies en 1997 lors d’un essaiinterlaboratoires conduit conformément à l’ISO 5725, par Arella et al. [2], [4]. Les données obtenues à partir decet essai peuvent ne pas être applicables à des gammes de concentration d’analyte et à des matricesd’échantillon différentes de celles spécifiées à l’annexe B.

8.2 Répétabilité

La différence absolue entre deux résultats d’essai individuels obtenus sur un matériau identique soumis à l’essaipar un même opérateur utilisant le même appareillage pendant le plus court intervalle de temps possible,n’excèdera la limite de répétabilité r que dans 5 % des cas au plus.

wAs q V F 100

Ast m 1 000----------------------------------------------------=


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Les valeurs obtenues pour la vitamine C totale sont les suivantes :

8.3 Reproductibilité

La différence absolue entre deux résultats d’essai individuels obtenus sur un matériau identique soumis à l’essaidans deux laboratoires différents n’excèdera la limite de reproductibilité R que dans 5 % des cas au plus.Les valeurs obtenues pour la vitamine C totale sont les suivantes :

9 Rapport d’essaiLe rapport d'essai doit au moins indiquer les informations suivantes :— toutes les informations nécessaires à l'identification complète de l’échantillon ;— une référence à la présente Norme européenne ou à la méthode utilisée ;— le type de mode opératoire d'échantillonnage utilisé et la date (si ces informations sont connues) ;— la date de réception de l’échantillon ;— la date de l’essai ;— les résultats ainsi que les unités dans lesquelles ils sont exprimés ;— toute observation digne d’intérêt faite au cours de l’essai ;— toutes les opérations qui ne sont pas spécifiées dans la méthode ou qui sont considérées comme facultatives,

ayant pu avoir une incidence sur les résultats.

Jus d’orange = 54,6 mg/100 g r = 6,4

Soupe liquide = 35,6 mg/100 g r = 3,7

Lait en poudre = 100,3 mg/100 g r = 17,9

Soupe lyophilisée = 169,3 mg/100 g r = 42,0

Céréales pour petit déjeuner = 102,6 mg/100 g r = 28,7

Aliment pour bébé aux fruits = 47,1 mg/100 g r = 7,1

Jus d’orange = 54,6 mg/100 g R = 30,3

Soupe liquide = 35,6 mg/100 g R = 21,7

Lait en poudre = 100,3 mg/100 g R = 32,2

Soupe lyophilisée = 169,3 mg/100 g R = 74,3

Céréales pour petit déjeuner = 102,6 mg/100 g R = 56,2

Aliment pour bébé aux fruits = 47,1 mg/100 g R = 23,9

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Annexe A(informative)

Exemple de chromatogramme

Init numérotation des tableaux d’annexe [A]!!!Init numérotation des figures d’annexe [A]!!!Init numérotation des équations d’annexe [C]!!!

Légende

a) Acide L-ascorbique

d) Temps

Figure A.1 — Exemple de dosage par CLHP de l'acide ascorbique dans du jus d'orange

Conditions opératoires :

Phase stationnaire : Lichrospher® 100 RP 18 endcapped, 5 m, 250 mm 4,0 mmPhase mobile : Solution A + solution B (conformément à 4.2.11)Débit : 0,7 ml/minVolume d’injection : 30 lDétection : UV à 265 nmAcide L-ascorbique : tret = 11,953 min


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Annexe B(informative)

Données relatives à la fidélité

Init numérotation des tableaux d’annexe [B]!!!Init numérotation des figures d’annexe [B]!!!Init numérotation des équations d’annexe [D]!!!

Le tableau B.1 présente les paramètres de fidélité qui ont été définis lors d’une étude conjointe [2], [4]. Au coursde cet essai interlaboratoires, des informations complémentaires ont été obtenues en supprimant l’étape deréduction.

NOTE Après que les essais interlaboratoires mentionnés ont été réalisés, l’ISO 5725 :1986 a été remplacée par lesISO 5725-1, ISO 5725-2, ISO 5725-3, ISO 5725-4 et ISO 5725-6 (toutes publiées en 1994) et par l’ISO 5725-5:1998.

Tableau B.1 — Données de fidélité pour la vitamine C totale

Échantillon a) 1 2 3 4 5 6

Année de l'essai interlaboratoires 1997 1997 1997 1997 1997 1997

Nombre de laboratoires 15,0 % 15 ,0% 015 ,0% 015 ,0% 015 ,0 15 ,0%

Nombre de laboratoires retenusaprès élimination des valeurs aberrantes

14 ,0% 15 %,0 14 ,0%0 014 ,0% 014 ,0% 14 %,0

Nombre de résultats retenus 28 ,0% 30 ,0% 028 %,0 028,0 % 028,0 % 28,0 %

Valeur moyenne, (mg/100 g) 54,6 % 35,6 % 100,3 % 169,3 % 102,6 % 47,1 %

Écart-type de répétabilité Sr (mg/100 g) 02,3 % 01,3 % 006,3 % 014,8 % 010,2 % 02,5 %

Écart-type relatif de répétabilité 04,2 % 03,6 % 006,3 % 008,8 % 009,9 % 05,3 %

Valeur de répétabilité (2,8 Sr) (mg/100 g) 06,4 % 03,7 % 017,9 % 042,0 % 028,7 % 07,1 %

Écart-type de reproductibilité SR (mg/100 g) 10,7 % 07,7 % 011,4 % 026,2 % 019,8 % 08,5 %

Écart-type relatif de reproductibilité 19,7 % 21,6 % 011,4 % 015,5 % 019,3 % 18,0 %

Valeur de reproductibilité (2,8 SR) (mg/100 g) 30,3 % 21,7 % 032,2 % 074,3 % 056,2 % 23,9 %

a) 1 jus d’orange,2 soupe liquide, 3 lait en poudre,4 soupe lyophilisée,5 céréales pour petit-déjeuner, 6 aliment pour bébé.

x


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Bibliographie

[1] Dennison D.B., Brawley T.G., Hunter G.L.K., (1981), J. Agric. Food Chem., 29,925-927.[2] Arella F., Deborde J.L., Bourguignon J.B., Hasselmann C., (1997), Ann. Fals. Exp. Chim., 90,

N° 940:217-233.[3] Coustard J. M., Sudraud G., (1981), Journal of chromatography, 219, 338-342.[4] ISO 5725:1994, Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure.

Documents

En 14130 Dosage Vitamine C