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AIX – MARSEILLE UNIVERSITE
FACULTE DE PHARMACIE
ANNEE 2014-2015
Etude de stabilité des
préparations gélules à base de
DHEA
LICENCE PROFESSIONNELLE DES
INDUSTRIES CHIMIQUES
SPECIALITE PRODUITS DE SANTE ET COSMETIQUE
Par
Jean-Michel GAY
Tuteur : Franck VICHOT (Pharmacie des Rosiers)
Responsable de parcours : Mr Christophe SAUZET
2
A Monsieur le Professeur Philippe PICCERELLE, Pour m’avoir accueilli au sein de sa formation. A Monsieur le Docteur Christophe SAUZET, Pour avoir rendu ce travail possible. A Monsieur le Docteur Denis GALLICE, Pour votre aide et vos conseils. A Monsieur le Docteur Sébastien GALLICE, Pour avoir accepté de diriger ces travaux, votre patience et vos conseils, je vous adresse ma profonde gratitude. A Monsieur le Docteur Franck VICHOT, Pour avoir accepté de juger mon travail, Veuillez trouver ici mes plus vifs remerciements. A Madame le Docteur Aude CASIMIRI, Pour vos encouragements. A l’ensemble de l’équipe pédagogique de la Faculté de Pharmacie de Marseille. Pour votre aide dans mes recherches et travaux. Aux BLACK SHEEP, Laboratoire de chimie du Bataillon des Marins Pompiers de Marseille, A mes parents, Avec toute mon affection, Pour votre aide, vos encouragements, votre patience. Les mots sont peu de choses, mais je vous remercie.
3
A mon grand-père, Je sais que de là où tu es tu veilles sur moi et que cette étape de ma vie était chère à ton cœur. A ma famille, Pour votre présence, merci à vous tous. A Chloé et Mélanie, Merci pour votre soutien et votre amitié. A Keltouma, C’est enfin mon tour... Merci pour ton amitié. A mes amis, J’ai fini !
A toutes les personnes ayant contribué́ de près
ou de loin à ce travail, Merci, du fond du cœur.
« Si haute soit la montagne,
on y trouve un sentier »
4
« LA FACULTE N’ENTEND DONNER AUCUNE
APPROBATION, NI IMPROBATION AUX OPINIONS EMISES,
CES OPINIONS DOIVENT ETRE
CONSIDEREES COMME PROPRES A LEUR AUTEUR. »
5
Table des matières
Table des matières
INTRODUCTION
I. Présentation de l’entreprise
II. La DHEA
a. Présentation de la molécule
b. Historique
c. Indications
d. Pharmacocinétique
e. Contre-indications, précautions d’emploi et interactions.
f. Stabilité de la DHEA
III. Problématique et objectif
a. Problématique
b. Objectif
6
IV. Matériel et méthode
a. Matériel
b. Réactifs
c. Excipients
V. Préparation des échantillons
VI. Résultats de l’étude de stabilité
a. Gélules de DHEA dosées à 50 mg
b. Gélules de DHEA dosées à 25 mg
c. Gélules de DHEA dosées à 10 mg
VII. Analyse des résultats
a. Premiers résultats de l’étude de stabilité
Conclusion
Bibliographie
Liste des tableaux et figures
ANNEXE
7
Liste des abréviations
AFSSAPS : Agence Française de Sécurité Sanitaire des Produits de
Santé
ANSM : Agence Nationale de Sécurité du Médicaments et des
Produits de Santé
BPF : Bonnes Pratiques de Fabrication
BPP : Bonnes Pratiques de Préparation
CLHP/HPLC: Chromatographie Liquide Haute Performance
ICH : International Conference of Harmonisat
AMM : Autorisation de mise sur le marché
8
Introduction
Fontaine de jouvence, pilule miracle, antidote de l’âge, les slogans ne se font
pas rares dans les médias pour qualifier la déhydroépiandrostérone plus connue
sous le nom de DHEA. Cette molécule est le stéroïde le plus abondant de
l’organisme, mais en même temps, on ne lui connait aucun rôle physiologique.
Sa concentration plasmatique connaît un pic entre la deuxième et troisième
décennie pour ensuite diminuer inexorablement avec l’âge.
De cette particularité est née l’hypothèse que le rétablissement des taux
jeunes de DHEA pourrait aider à lutter contre le vieillissement et les maux qui
l’accompagnent.
Après une courte présentation de la Pharmacie des Rosiers, nous ferons un
rapide rappel sur la DHEA et son histoire, puis nous poserons la problématique
rencontrée ainsi que les objectifs de ce travail.
Ensuite, nous verrons les différents matériels et méthodes employés pour
effectuer l’étude de stabilité, ainsi que la préparation des échantillons.
Enfin, nous exposerons les résultats de l’étude que nous analyserons.
9
I. Présentation de l’entreprise
La pharmacie des Rosiers tout d’abord officine, développe une activité de sous-
traitance de préparation magistrale depuis 30 ans. Le préparatoire est situé au 1er
étage de la pharmacie. L’entreprise est reprise en Avril 2015 par Sébastien
GALLICE, qui succède à son père, Denis GALLICE.
La Pharmacie des Rosiers emploie une équipe de 46 préparateurs et pharmaciens
expérimentés dont les trois quart sont consacrés au préparatoire.
Les préparations magistrales regroupent les préparations réalisées dans les
pharmacies hospitalières et de ville, destinées à un ou plusieurs malades lorsqu'il
n'existe pas de médicament adapté ou que le médicament est indisponible.
A la suite de la publication du rapport de l'IGAS en janvier 2006 sur les préparations
pharmaceutiques à l'hôpital et à l'officine et en s'appuyant sur des travaux conduits
par le Ministère de la Santé, l’Agence s'est engagée dans la rédaction d'un texte
commun pour les préparations magistrales, hospitalières et officinales. Le projet de
Bonnes Pratiques de Préparation a été mis en enquête publique du 10 mai au 25 juin
2007 afin de recueillir l'avis des professionnels de santé concernés. la décision
d'application de ces Bonnes Pratiques de Préparation vient d'être publiée au Journal
Officiel (JO du 21/11/2007).
Les Bonnes Pratiques de Préparation constituent un texte de référence opposable,
destiné aux pharmaciens de ville et aux pharmacies intérieures des établissements
de santé, afin de garantir la qualité de leurs préparations pharmaceutiques.
10
II. La DHEA
II.a Présentation de la molécule
Une monographie de la DHEA figure à la Pharmacopée Française [1].
Nom chimique : 3β-hydroxyandrost-5-èn-17-one.
Dénomination commune internationale : Prastérone, Déhydroépiandrostérone
Formule brute : C19H28O2
Formule développée :
Figure 1 : Structure de la prastérone
Poids moléculaire : 288.4 g/mol
Caractères :
- Aspect : poudre fine, cristalline, blanche ou sensiblement blanche
- Solubilité : pratiquement insoluble dans l’eau, facilement soluble dans
l’éthanol à 96 pour cent et dans le chlorure de méthylène.
Principale impureté :
Nom chimique : androst-4-ène-3,17-dione
11
II.b Historique
C’est en 1931, que le Dr BUTERNANDT [2] (prix Nobel de chimie en 1939), isole
pour la première fois et sous sa forme libre, la DHEA. La forme sulfatée, principale
forme circulante dans le corps humain, est, elle, isolée en 1944.
Ce ne sera qu’au milieu des années 50 que les chercheurs Migeon et Plager [3],
isolent la DHEA sanguine et les études de Symington [4] attribue sa production à la
partie interne du cortex surrénalien. Les études réalisées par le Professeur Beaulieu
[5], apporte la preuve que la molécule est bien synthétisée par les glandes
surrénales, mais sous sa forme sulfatée.
La DHEA est déclarée comme l’hormone stéroïde la plus abondante de l’organisme
humain. Naturellement produite par celui-ci donc, elle atteint son point de
concentration maximum aux alentours de 25 ans avant de décroitre rapidement avec
l’âge ( 20% restants à 60 ans et 10% restants à 80 ans). D’où l’idée, plus que
séduisante, de compenser la diminution naturelle et physiologique inexorable en
hormone et donc de lutter activement contre le vieillissement en administrant aux
personnes un substitut synthétique.
Dans les années 70, de nombreuses études internationales laissent entrevoir les
effets bénéfiques de la DHEA sur les animaux (rat et souris surtout) avec de la DHEA
mélangée à la nourriture.
Kalimi et Regelson en 1990 [6], Thijssen et Nieuwenhuyse en 1999 [7] et Bellino et
al. En 1995 [8] démontrent que de hautes doses de DHEA auraient des vertus sur la
prolongation de la vie des animaux, la prévention de certains cancers et maladies à
virus, le traitement de certaines obésités d’origine génétique, la protection contre
l’athérosclérose.
Il va falloir attendre le milieu des années 1990 pour qu’un professeur de l’université
de San Diego, Californie aux Etats-Unis publie les premièrs résultats d’essais positifs
chez l’homme confirmant que la DHEA possède une action antivieillissement.
Parallèlement, la publicité pour l’emploi de la DHEA commença aux USA après une
publication réalisée par l’Ecole de Médecine de l’Université de San Diego [9].
C’est à partir de ce moment que la DHEA se retrouve dans de nombreux médias et
est présentée comme « l’Hormone de jeunesse ».
12
En novembre 2000, tournant décisif en France, Bernard Kouchner, alors ministre de
la santé, a demandé à l’AFSSAPS (nouvellement ANSM) de rassembler et d’étudier
l’ensemble des informations disponibles sur les effets bénéfiques et indésirables de
la DHEA, ainsi que son statut juridique. L’agence réunit donc le 3 juillet 2001, un
comité d’experts présidé par le Professeur Caulin, président de la commission
d’autorisation de la mise sur le marché. Au vu des résultats de l’analyse du groupe
d’experts [10], l’Afssaps considère l’utilisation de DHEA comme devant être
assujettie à la réglementation internationale du médicament.
Point problématique, encore de nos jours, la substance n’a toujours pas d’AMM en
France, mais peut être vendue en officine sous forme de préparation magistrale
grâce à un vide juridique.
II.c Indications
Les principales indications recensées dans la littérature scientifique sont liées au
vieillissement général notamment pour :
- le système cardiovasculaire :
Une étude de 2000 [11] a suivi 1167 hommes de 40 à 70 ans durant près de dix ans,
et à démontré que les hommes qui possédaient les taux les plus faibles (à la fois en
DHEA et en DHEA-S), avaient 60% de risque en plus de développer des maladies
cardiaques ischémiques.
Il semblerait y avoir un concensus concernant le fait que la prastérone n’ai aucune
efficacité sur la cardio-protection chez les femmes, mais que les hommes ayant de
faibles taux de DHEA ont plus de risque de développer des troubles cardiaques.
- le cerveau :
La prastérone est extrêmement abondante dans le cerveau humain. Une étude de
1996 [12] démontre l’effet direct de la DHEA sur la libération de l’acétylcholine dans
l’hippocampe, région crucial de la mémoire.
- les maladies chroniques inflammatoires :
Une étude portant sur les différents rôles de la DHEA dans la diminution des
maladies chroniques inflammatoires telles que la polyarthrite rhumatoïde, a démontré
que les patients atteints de la dite maladie possédaient un faible niveau de DHEA.
13
Celle ci joue un rôle majeur dans la prévention de l’inflammation. Il est donc
intéressant de penser que maintenir les niveaux initiaux de DHEA pourrait diminuer
les inflammations chroniques. N’oublions pas que l’inflammation a un rôle et non des
moindres dans de nombreuses pathologies liées au vieillissement, telle que la
maladie d’Alzheimer et certains cancers.
- l’insuline :
Un grand nombre de données scientifiques indiquent que la DHEA aurait un rôle à
jouer dans la régulation des niveaux d’insuline, de l’insulino-résistance et du niveau
de sucre sanguin. L’étude de 1995, réalisée en double aveugle sur 22 hommes âgés
en moyenne de 57 ans supplémentés de 100mg de DHEA durant un mois, montre
que le groupe supplémenté voit son niveau sérique d’insuline chuter de 10mU/ml et
sa glycémie chuter de 5 mg/ml alors que les membres du groupe témoin ne voient
aucun changement significatif. [13]
- l’ostéoporose :
Le taux de DHEA chez la femme de plus de 50 ans diminue de près de 60%. Une
étude de 1997 [14] a montré que la perte osseuse qui survient avec la ménopause
est en partie due au déclin rapide et important en DHEA.
II.d Pharmacocinétique
Le rapport ad hoc de l’AFSSAPS (ANSM) du 3 Juillet 2001 nous renseigne sur les
points suivants [15].
a. Absorption
Le DHEA est très peu soluble dans l’eau et donc son administration est rendue
difficile. Celle-ci dépend de la granulométrie des particules de DHEA. Celle-ci se
sulfoconjugue rapidement en DHEA-S après le premier passager hépatique et
intestinal.
b. Distribution
La molécule de DHEA pure se lie à 90% à l’albumine et à 3 à 8 % à la « Sex
Hormone Binding Globulin », tandis que la DHEA sulfurée se lie quasiment
totalement (97 – 99 %) à l’albumine.
14
c. Métabolisme
La sulfatation de la molécule de prastérone sur le groupement OH en position 3, est
réversible avec interconversion entre les deux formes. La forme sulfatée semble être
une forme de stockage de la forme simple. Le métabolisme de la DHEA est le même
que celui de sa forme sulfatée, que son origine soit endogène ou exogène.
d. Elimination
La demi-vie de la prasterone est d’environ 15-30 minutes. Après une administration
répétée et une interconversion entre la forme simple et la forme sulfatée, la demi-vie
observée devient d’une vingtaine d’heures.
II.e Contre-indications, précautions d’emploi et interactions.
Les effets à long terme d’une supplémentation en DHEA supérieure à 50mg par jour
sont inconnus, car les études, menées pour l’instant avec ce dosage, n’ont pas
dépassé un an.
Il existe un grand nombre de contre-indications et de précautions d’emploi à l’usage
de la DHEA.
Contre-indications :
- Grossesse et période d’allaitement,
- Du fait de son rôle de précurseur hormonal, et celle-ci pouvant se transformer
en œstrogène ou en testostérone, les personnes qui possèdent une
prédisposition familiale, aux cancers hormonodépendants (cancer du sein, des
testicules, de la prostate) doivent s’abstenir de prendre de la DHEA [16-20]
- Insuffisance rénale et hépatique.
Effets indésirables :
- Généralement bénins avec un dosage inférieur à 50mg
- Peut provoquer de l’acné et de l’hirsutisme pour des doses supérieures à 200
mg
15
- Durant plusieurs essais pour traiter du lupus, la prise de DHEA a fait chuter le
taux de bon cholestérol HDL des femmes participantes [21]. Un effet
semblable a été recensé sur des femmes âgées ayant pris 50 mg de DHEA
pendant une durée de 2 ans [22]
- Peut causer également des insuffisances hépatiques, de l’hypertension
artérielle, de la congestion nasale, de la fatigue de l’insomnie et des maux de
tête
- Peut augmenter les crises de manie et d’irritabilité chez les personnes
souffrants de troubles psychologiques (bipolarité par exemple)
Interactions :
- Peut interagir avec des médicaments bloquant les effets des œstrogènes
- La prise d’insuline peut diminuer l’efficacité de la DHEA
- Les corticostéroïdes peuvent empêcher ou réduire la production naturelle de
DHEA.
II.f Stabilité de la DHEA
Il n’existe qu’une « étude » portant sur la stabilité d’un produit (émulsion inverse) à
base de DHEA, sur une durée ne dépassant pas 3 mois dans un brevet déposé par
Galderma [23].
Les résultats publiés indiquent des stabilités pour les produits à T=0, T=1 mois, T=2
mois et T= 3 mois.
16
III. Problématique et objectif
III.a Problématique
Du fait de sa demi-vie faible, la DHEA est un androgène de choix contre le
vieillissement. Néanmoins, comme vu précédemment, il n’existe aucune étude réelle,
ni AMM. En l’absence de données de stabilité sur les gélules de DHEA, la durée
d’utilisation est fixée par l’ARS PACA à seulement 5 semaines.
III.b Objectif
Actuellement, les préparations magistrales à base de DHEA ont donc, une date de
péremption de 5 semaines. Il a été envisagé de prolonger celle-ci et donc de réaliser
une étude de stabilité afin de s’assurer de la stabilité de la prastérone au bout de 90
jours.
Il a été choisi de conserver les gélules dans leur pilulier fermé avec un bouchon en
polyéthylène.
L’objectif de ce travail est donc la mise en place d’un test rétrospectif de stabilité des
lots de gélules, différenciées par leur dosage, sur 90 jours.
Cette étude de stabilité va se dérouler sur trois mois, de J0, J15, J30, J45, J60, J75
à J90.
Pour cela, après validation de l’uniformité de masse et de teneur, les gélules sont
conditionnées, puis conservées pendant toute la durée de l’étude à température
ambiante (25¨C) et à l’abri de la lumière.
Les conditions ICH de conservation imposent une température et une hygrométrie
précises (25+2°C et 60+5% humidité) [24].
En l’absence de contrôle de l’hygrométrie sur la chambre climatique, nous partons
du principe que les gélules conformes à l’issue de l’étude de stabilité le seront à
fortiori dans les conditions recommandées de conservation [25].
17
A chacune des étapes, un échantillon de gélules sera prélevé et analysé. Chaque
analyse sera effectuée en deux étapes sur chaque dosage, une identification et un
dosage du principe actif.
Pour s’affranchir de l’incertitude concernant le remplissage des gélules, nous
raisonnerons sur la base de prises d’essai exactement pesées.
Figure 2 : Exemples de pilulier
18
IV. Matériel et méthode
IV. a Matériel
Le matériel utilisé pour étudier la stabilité de la DHEA est composé de :
- Spectromètre UV-1601 SHIMADZU
- Spectromètre IR-TF NICOLET iS10 THERMO SCIENTIFIC
- Smart™ iTX Accessory for the Nicolet™ iS™10 FT-IR Spectrometer THERMO
SCIENTIFIC
Figure 3 : Spectromètre IR-TF Thermo Scientific et son module ATR
- Spectromètre Raman : Système d’identification des produits chimiques
FirstDefender™ RM
Figure 4 : Spectromètre Raman
- Un appareil pour chromatographie liquide haute performance
19
Le matériel de laboratoire nécessaire pour la mise en œuvre de l’étude est le suivant
:
- une hotte aspirante CALRUS
- une balance Mettler Toledo PB303 S/PH
- une balance de précision Sartorius CP324 S
- un appareil d’uniformité de masse et enregistreur Mettler Toledo
- Micropipette Autoclavable Acura 835
- Micropipette OPTIPETTE
- du matériel de laboratoire : béchers, fioles, tubes à essais, entonnoir
- Logiciel OMNIC Specta
IV. b Réactifs
Tous les réactifs utilisés sont de qualité analytique ou pour chromatographie.
- Eau purifiée, COOPER
- Hélium BIP Air Products
- DHEA pot de 1kg, Laboratoire COOPER
- Lactose pot de 1 kg, COOPER
- Acétonitrile : flacon de 1000mL,
IV. c Excipient utilisé IV. C .1 Le Lactose Les principales caractéristiques du lactose sont les suivantes [26] :
• Dénomination commune internationale : Lactose Formule brute : C12H22O11 * H2O Formule développée :
Figure 5 : structure du lactose
20
Poids moléculaire : 360,32 g/mol Caractères :
• Aspect : poudre cristalline ou granulés à écoulement fluide, blancs ou sensiblement blancs.
• Solubilité : facilement soluble dans l’eau à température ambiante
21
V. Préparation des échantillons
D’après le Code de la Santé Publique, la réalisation des préparations doit se faire
dans un lieu dédié [27]. Un lot de 30 gélules de chaque dosage, conditionnées dans
leur pilulier, a été fabriqué dans le préparatoire de la Pharmacie des Rosiers selon
les Bonnes Pratiques de Préparation (BPP) [28]. Leur préparation se fait selon un
protocole indiquant les masses de poudres, à la fois le principe actif et l’excipient, à
utiliser en fonction du dosage des gélules et de la quantité à produire. La taille des
gélules est la plus faible possible. Afin de ne pas créer d’interférence sur les
méthodes d’analyse, il a été choisi de ne pas utiliser de marqueur d’homogénéité de
la poudre.
V.a Tests de conformité des gélules fabriquées.
Elles doivent répondre aux exigences de la Pharmacopée.
Deux essais sont réalisés :
- l’essai d’uniformité de masse, [29]
- l’essai d’uniformité de teneur. [30]
V.a.1 Uniformité de masse
La Pharmacopée européenne propose de peser individuellement 20 gélules prises
au hasard et de déterminer la masse moyenne. La masse individuelle de deux au
plus des 20 gélules peut s'écarter de la masse moyenne de 10 % (si la masse
moyenne est inferieure a 300 mg) ou de 7,5 % (si la masse moyenne est supérieure
ou égale a 300 mg), mais la masse d'aucune gélule ne peut s'écarter de plus du
double de ce pourcentage.
Le mode opératoire consiste à peser une gélule pleine puis, sans perdre de
fragments de l'enveloppe, à vider le contenu et à peser l'enveloppe. La masse du
contenu est calculée par différence. L'opération est répétée sur les 19 autres gélules.
22
Ce type de contrôle (du fait de la destruction inévitable d'une partie du lot fabriqué)
est difficilement réalisable en pratique pour un préparatoire étant donné les petites
quantités produites et la lourdeur du mode opératoire imposé par les précautions à
prendre lors de la manipulation des produits. Ainsi avons nous dû modifier cet essai
pour le rendre plus commode. L'« essai modifié » consiste à peser 20 gélules pleines
dès qu'elles sont fabriquées, à l'intérieur même de l'isolateur rigide, puis vérifier que
la masse de deux gélules au plus s'écarte des limites inscrites sur le protocole de
fabrication. Ces limites, fixées à ± 10 % de la masse théorique du contenu de la
gélule, sont calculées automatiquement par l'ordinateur auquel on a préalablement
intégré les masses moyennes des gélules vides. Aucune masse ne doit s'écarter de
plus du double de ce pourcentage.
Si l'essai d'uniformité de masse est non conforme, la série de gélules est détruite et
l'essai d'uniformité de teneur n'est pas réalisé. L'essai d'uniformité de masse est
réalisé sur toute série de gélules fabriquées.
Les différents lots de gélules ont tous passé avec succès l’essai d’uniformité de
masse.
V.a.2 Uniformité de teneur
Cet essai est basé sur la détermination de la teneur individuelle en principe actif des
gélules composant l'échantillon. Il permet de vérifier que les teneurs individuelles en
principe actif se situent bien dans les limites établies par rapport à la teneur moyenne
de l'échantillon.
Dix gélules sont prélevées au hasard et dosées individuellement. Au laboratoire,
deux méthodes peuvent être utilisées pour le dosage des gélules de DHEA : CLHP
ou titrimétrie.
Le lactose n’ayant pas été testé avec ces méthodes, l’essai d’uniformité de teneur a
été réalisé avec la méthode mise au point pour cette étude.
La préparation satisfait à l'essai si la teneur individuelle d'une seule gélule s'écarte
des limites de 85 à 115 % de la teneur moyenne tout en ne s'écartant pas des limites
de 75 à 125 % de la teneur moyenne.
23
Si la teneur individuelle de trois gélules au plus s'écarte des limites de 85 à 115 % de
la teneur moyenne, et si aucune teneur individuelle ne s'écarte des limites de 75 à
125 % de la teneur moyenne, la Pharmacopée préconise de prélever au hasard vingt
autres gélules et de les doser individuellement.
Aucune des gélules testées ne s’est écartée des bornes 85-115%.
V.b Validation des calculs préliminaires
Les tickets de pesée récapitulant les quantités de matières premières utilisées pour la
préparation des différentes séries de gélules ont permis de valider les calculs théoriques
de rapport entre le principe actif et l’excipient.
Les rapports suivants ont été extraits des fiches de fabrication :
DHEA / Lactose :
Gélules dosées à 50 mg (rapport faible) :1/2
Gélules dosées à 25 mg (rapport intermédiaire) :1/4
Gélules dosées à 10 mg (rapport fort) :1/10
24
VI. Résultats de l’étude de stabilité
Les résultats présentés correspondent aux trois premiers mois de l’étude.
VI. a Lactose (Excipient)
Identification : par spectrophotométrie d’absorption infrarouge
Figure 6: Spectre du Lactose
VI. b DHEA SCR fr
Identification : par spectrophotométrie d’absorption infrarouge
Figure 7: Spectre de la DHEA SCR fr
25
VI. c Gélules de DHEA dosées à 50 mg
Les résultats sont répertoriés dans le tableau 1 et les figures 10 et 11.
Identification : par spectrophotométrie d’absorption infrarouge
Figure 8: Spectre de l’échantillon de poudre extrait des gélules de DHEA dosées à
50 mg
Pourcentage de produit
J0 J15 J30 J45 J60 J75 J90
100 99, 7 101,1 99,5 98,3 97,9 97,5
Tableau 1 : résultats des dosages des échantillons de poudre extraits des gélules de
DHEA dosées à 50 mg.
Figure 9 : évolution de la concentration (en %) en DHEA des gélules à 50 mg
91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102
J0 J15 J30 J45 J60 J75 J90
Pourcentage de produit (%)
Pourcentage de produit %
Limite d'acceptation
26
Au 30ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé. Aucun pic
de dégradation n’a été observé sur les chromatogrammes. Il y a même une
augmentation du pourcentage de produit interne à la gélule.
Au 60ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé.
La variation de concentration la plus importante reste inferieure a 2%
Nous n’avons pas observé de pic de dégradation.
Au 90ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé. La perte est
inférieur à 3% total.
VI .d Gélules de DHEA dosées à 25mg
Les résultats sont répertoriés dans le tableau 2 et les figures 12 et 13.
Identification : par spectrophotométrie d’absorption infrarouge
Figure 10 : Spectre de l’échantillon de poudre extrait des gélules de DHEA dosées à 25
mg
Pourcentage
de produit
J0 J15 J30 J45 J60 J75 J90
100 100,5 99,1 98,8 98,3 97,4 96,5
Tableau 2 : résultats des dosages des échantillons de poudre extraits des gélules de
DHEA dosées à 25 mg.
27
Figure 11 : évolution de la concentration (en %) en DHEA des gélules à 25 mg
Au 30ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé.
La perte en principe actif reste inferieure a 1%. Nous n’avons pas observe
de pic de degradation.
Au 60ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé.
La perte en principe actif ne dépasse pas 2%. Aucun pic de dégradation n’a été
observe.
Au 90ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé. La perte
totale est inférieure à 4%.
92 93 94 95 96 97 98 99 100 101
J0 J15 J30 J45 J60 J75 J90
Pourcentage de produit (%)
Pourcentage de produit %
Limite d'acceptation
28
VI. e Gélules de DHEA dosées à 10 mg
Les résultats sont répertoriés dans le tableau 3 et les figures 14 et 15.
Identification : par spectrophotométrie d’absorption infrarouge
Figure 12 : Spectre de l’échantillon de poudre extrait des gélules de DHEA dosées à
10 mg
Pourcentage
de produit
J0 J15 J30 J45 J60 J75 J90
100 99,8 99,4 98,7 98,1 97,4 95,8
Tableau 3 : résultats des dosages des échantillons de poudre extraits des gélules de
DHEA dosées à 10 mg.
Figure 13 : évolution de la concentration (en %) en DHEA des gélules à 10 mg
92 93 94 95 96 97 98 99 100 101
J0 J15 J30 J45 J60 J75 J90
Pourcentage de produit (%)
Pourcentage de produit %
Limite d'acceptation
29
Au 30ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé. Moins de
1% de perte.
Au 45ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé. La perte
en principe actif n’atteint pas le 2%.
Au 90ème jour : Aucun changement d’aspect de la poudre n’a été décelé. Une nette
diminution de la teneur en DHEA est observée; cette diminution atteint presque les
5%, diminution la plus importante, mais reste homogène.
30
VII. Analyse des résultats
VII.a Premier résultats de l’étude de stabilité Dans le cadre de cette étude la définition retenue pour la stabilité est celle proposée
par l’ICH Q1A [31] :
« En général, “changement significatif” pour une molécule médicamenteuse est
définie comme :
1. Une variation de 5% par rapport à la dose initiale;
2. Toute dégradation de produit excédant ces critères d’acceptation ;
3. L’échec des critères d’acceptation pour l’apparence, les propriétés physiques et
fonctions tests comme la couleur le déphasage, la resuspension, …); cependant on
peut assister à certains changements de propriétés tels que l’adoucissement des
suppositoires ou la fonte des crèmes dans des conditions accélérées.
4. L’échec de respect des critères de pH;
or
5. L’échec de respect du critère d’acceptation de dissolution pour 12 unités».
Sur cette base, les gélules de DHEA seront considérées comme stable si la variation
de principe actif est inférieure à 5%.
Aucune altération des caractères de la poudre n’a été décelée sur les différents lots,
à J30, J60 comme à J90.
A J30 pour les gélules dosées à 50mg et à J15 pour les gélules à 25mg, nous
constatons une augmentation de la teneur en DHEA. Cela peut être du à une
évaporation ou une non séparation d’un produit de dégradation.
A J90, la concentration des gélules est supérieure à 96% et à l’exception des
gélules à 10mg, dont la teneur diminue de presque 5%.
Les teneurs limites définies par la pharmacopée n’ont donc été atteintes pour aucune
des gélules de DHEA.
31
Sur la base de ces données parcellaires, au moins un facteur semble influer sur la
stabilité des gélules :
- le dosage en principe actif: les gélules faiblement dosées se dégradent plus
rapidement ;
Ces données vont engager la pharmacie dans une réflexion sur la redéfinition de la
date d’expiration des gélules de DHEA. Pour confirmer ces résultats, et compte tenu
des différences de stabilité possible entre les formulations, il serait souhaitable de
réaliser un essai de conformité de teneur sur des lots de gélules préparées à
intervalle régulier (1 mois), afin de mesurer de manière approximative l’évolution de
la teneur en DHEA au cours du temps de la formulation préparée de manière
usuelle.
32
CONCLUSION
Le but de cette étude était de mettre au point une méthode stability-indicating de
dosage de la DHEA permettant la réalisation d’une étude de stabilité.
Trois lots de gélules font l’objet de l’étude (3 dosages : 50 ; 25 et 10 mg).
La stabilité a été définie comme correspondant à une perte de principe actif
inférieure à 5% et une quantité d’impuretés inférieure aux seuils définis.
Les premiers résultats de cette étude montrent une stabilité de toutes les gélules
de DHEA dosées à 50 mg, 25 mg et 10 mg conditionnées dans le lactose.
Les gélules avec une faible dosage en principe actif se dégradent plus rapidement
que celles avec une forte dosage.
De ce fait, la stabilité des gélules de DHEA dosées à 50, 25 et 10 mg dans le
lactose est avérée pendant 90 jours sur la base de ces premiers résultats.
Cette étude apporte les premiers éléments à une rationalisation du choix de la
date de péremption des gélules de DHEA fabriquées au sein du préparatoire.
33
BIBLIOGRAPHIE
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Sécurité Sanitaire des Produits de Santé. Bonnes Pratiques de Préparation.
Bulletin officiel, No 2007/7 bis, Fascicule special, 79 p
[29] Pharmacopée Européenne, 6.1, Essai d’uniformité de masse
[30] Pharmacopée Européenne, 6.1, Essai d’uniformité de teneur
[31] International Conference On Harmonisation Of Technical Requirements For Registration Of Pharmaceuticals For Human Use. ICH Harmonised Tripartite ICH Topic Q 1 A (R2) Stability Testing of new Drug Substances and Products : Note for guidance on stability testing : Note for guidance on stability testing : stability testing of new drug substances and products, 2003.
36
LISTE DES TABLEAUX ET FIGURES
Figure 1 : Structure de la prastérone
Figure 2 : Exemples de pilulier
Figure 3 : Spectromètre IR-TF Thermo Scientific et sn module ATR
Figure 4 : Spectromètre Raman
Figure 5 : Structure du lactose
Figure 6 : Spectre du lactose
Figure 7 : Spectre de la DHEA SCR fr
Figure 8 : Spectre de l’échantillon de poudre extrait des gélules de DHEA dosées à
50 mg
Figure 9 : Evolution de la concentration (en %) en DHEA des gélules dosées à 50 mg
Figure 10 : Spectre de l’échantillon de poudre extrait des gélules de DHEA dosées à
25 mg
Figure 11 : Evolution de la concentration (en %) en DHEA des gélules dosées à
25 mg
Figure 12 : Spectre de l’échantillon de poudre extrait des gélules de DHEA dosées à
10 mg
Figure 13 : Evolution de la concentration (en %) en DHEA des gélules dosées à
10 mg
Tableau 1 : Résultats des dosages des échantillons de poudre extraits des gélules
de DHEA dosées à 50 mg
Tableau 2 : Résultats des dosages des échantillons de poudre extraits des gélules
de DHEA dosées à 25 mg
Tableau 3 : Résultats des dosages des échantillons de poudre extraits des gélules
de DHEA dosées à 10 mg
37
ANNEXES
38
ANNEXE A Exemple de bon de fabrication
39
ANNEXE B Ticket de pesée
40
ANNEXE C Spectres des trois dosages
41
ANNEXE D Zoom des pics de DHEA
42
ANNEXE E Chromatogramme des échantillons
43
Résumé
La DHEA est un produit qui est de plus en plus prescrit, la principale raison restant la lutte
contre le vieillissement. Cependant la DHEA est encore une molécule peu connue et qui ne
possède pas d’étude clinique sérieuse ni de dossier d’autorisation de mise sur le marché
français. Malgré cela, un vide juridique autorise les préparatoires à l’intégrer dans des
préparations magistrales. Face à cette situation, de nombreux préparatoires se lancent et
créer des gélules de DHEA. En ce qui concerne la date limite d’utilisation, ce guide, ainsi que
l’ARS PACA, précisent que « la date limite d’utilisation des préparations terminées est fixée
à la suite d’études bibliographiques et/ou d’essais de stabilité. A défaut, la date limite
d’utilisation ne peut dépasser cinq semaines. Cette limite peut être réduite en fonction de la
stabilité de la préparation. » Ces différents éléments ont poussé la Pharmacie des Rosiers à
initier une étude de stabilité sur trois mois des gélules de DHEA, afin de pouvoir prolonger la
péremption de ses préparations. Un lot de 30 gélules fait l’objet de l’étude. La stabilité a été
définie comme correspondant à une perte de principe actif inférieure à 5% définis dans la
Pharmacopée Européenne. Les premiers résultats de cette étude montrent une bonne
stabilité relative de toutes les gélules de DHEA. Cette étude apporte les premiers éléments
à une rationalisation du choix de la date de péremption des gélules fabriquées au
préparatoire de la Pharmacie des Rosiers. Abstract
DHEA is a product that is increasingly prescribed, the main reason remaining the fight
against aging. However the DHEA is still a little-known molecule and has no serious clinical
study nor authorization to place on the French market. Despite this, a legal loophole allows
preparatory to integrate it into extemporaneous preparations. Faced with this situation, many
preparatory launch and create DHEA capsules. Regards the date limit for use, this guide, as
well as the ARS PACA, specify that "date completed preparations use limit is set following
bibliographic studies and/or stability testing. '' Failing that, the date usage limit may not
exceed five weeks. This limit may be reduced depending on the stability of the preparation.
"These elements have pushed the Pharmacie des Rosiers to initiate a study of stability on
three months of DHEA capsules, in order to prolong the shelf life of its preparations. A batch
of 30 capsules is the subject of the study. Stability was defined as an active principle loss
less than 5% defined in the European Pharmacopoeia. The first results of this study show
good relative stability in all DHEA capsules. This study provides the first elements to a
rationalization of the choice of the date of expiry of the capsules manufactured in the
preparatory of the Pharmacie des Rosiers.
MOTS CLES : Pharmacie – Préparations magistrales – Stabilité – DHEA – Gélule
