18
EXAMEN BACTERIOLOGIQUE DES SELLES (COPROCULTURE CLASSIQUE) Elaboré par : ALIMOU Sofia BEKAR Oumaima BOUSSAADANE Sara DIDAH Fayza Encadré par: Mme.HSAINE Samira

ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

EXAMEN BACTERIOLOGIQUE DES SELLES (COPROCULTURE CLASSIQUE)

Elaboré par : ALIMOU Sofia

BEKAR Oumaima

BOUSSAADANE Sara

DIDAH Fayza

Encadré par: Mme.HSAINE Samira

Page 2: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

PLAN INTRODUCTION QUAND PRESCRIRE EBS? DIHAREES INFECTIEUX PRELEVEMENT & TRANSPORT QUE RECHERCHER DANS EBS? COPROCULTURE CLASSIQUE:

-EXAMEN MACRO ET MICROSCOPIQUE

-MILIEU DE CULTURE

-IDENTIFICATION & INTERPRETATION CONCLUSION

Page 3: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

INTRODUCTION

L'examen bactériologique des selles se fait par coproculture, c'est-à-dire par ensemencement des selles sur des milieux de culture appropriés. Le but est de rechercher et d’identifier parmi une flore commensale très abondante soit des bactéries habituellement absentes et réputées pour leur pouvoir pathogène, soit une espèce bactérienne anormalement prédominante

Page 4: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Quand prescrire EBS?

Diagnostic diarrhée: Diarrhée infectieuse bactérienne ?

• Diarrhée aiguë• Diarrhée chronique si patient immunodéprimé

TIAC Toxi-Infection Alimentaire Collective Prévention risque infectieux:

Sujets à risque ( immunodéprimé, en réanimation, oncohématologie )

Contexte réglementaire (cuisiniers p.ex) Intérêt épidémiologique:

Entourage patient Réanimation néonatale

Page 5: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

DIARRHEES INFECTIEUSES

Selon L’O.M.S, Une diarrhée : émission d’au moins 3 selles/j de consistance

anormale

• Aiguë < 14 j

• Persistante > 14j

• Chronique > 4 semaines TIAC Toxi-Infection Alimentaire Collective

définie par l'apparition d'au moins deux cas groupés similaires d'une symptomatologie, en général gastro-intestinale, dont on peut rapporter la cause à une même origine alimentaire

Page 6: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Prélèvement et transport

Recueil dès l’émission

Volume noix dans conteneur hermétique

propre à usage unique

Choisir échantillon mucopurulent ou sanglant

Acheminement rapide au laboratoire (<2h)

Conservation: maximum une nuit à +4°C, au-

delà milieu transport

Ecouvillonnage rectal: nouveau-né, petit enfant

Biopsies rectales = coproculture

Page 7: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Que rechercher dans EBS? (3)

Coproculture classique:Salmonella Shigella Campylobacter Yersinia enterocolitica

Page 8: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Coproculture classique Examen macroscopique

Noter consistance: Selles moulées refusées Présence de glaires, de pus et de sang: choix de ces zones

Examen microscopique Etat frais:

• Mobilité caractéristique / levures/ hématies/Parasites• Peu informatif (manque de sensibilité)

Colorations • Bleu de méthylène: leucocytes

• Présence leucocytes diarrhée à germes invasifs ex: Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter

• Absence leucocytes diarrhée à germes entérotoxinogènes ex: V. cholerae, C. difficile

• Gram

Page 9: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

COPROCULTURE CLASSIQUE Examen microscopique

Coloration de Gram :

1) Flore normale: majorité BGN Présence qqs BGP Apprécier déséquilibre flore

2) Morphologie caractéristique

Page 10: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Mise en culture Milieu sélectif pour les entérobactéries BCP/ Mac Conkey Milieux pour recherche Salmonella , Shigella .

• Hektoen

• ASAP

• SS, XLD, DCL

• Milieu d’enrichissement pour Salmonella .

• Bouillon sélénite (12-24h d’incubation)

• Incubation à 35°C pendant 24-48H

Page 11: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Milieu Hektoen

Milieu sélectif par sels biliaires (taux élevé de peptone pour Shigella)

Étude de 3 sucres ( lactose, saccharose, salicine) et H2S

Couleur Germes

Jaune saumon E. coli, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, S. arizonae, Vibrio cholerae (ox+), Aeromonas (ox+), Yersinia

Jaune saumon

à centre gris-noir

Proteus vulgaris

Bleues à centre noir

Proteus mirabilis

Salmonella

vertes Shigella, S.Typhi, Pseudomonas (ox+)

Page 12: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Milieu ASAP

sensibilité améliorée par enrichissement préalable

Incubation à 37°C; lecture à 24H

rose pourpres

Salmonella

Bleu vert Klebsiella, Enterobacter

Bleu violet Serratia

Page 13: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

COPROCULTURE CLASSIQUE

Mise en culture Recherche Yersinia enterocolitica

(gélose spécifique)

• Milieu CIN peu sélectif à 48-72h, lire à 24 h

• Milieu Wauters

• Incubation 48h à 30°C Identification:

Yersinia: +++ galerie

Yersinia sur CIN

Page 14: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

COPROCULTURE CLASSIQUE

Mise en culture Recherche Campylobacter (gélose sélective)

• Milieu Karmali • En microaérophilie (5 % O2, 10% CO2, 85% N2) • Incubation à 37°C • Lecture à partir J2J5

Campylobacter sur karmali

Page 15: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

Identification

COPROCULTURE CLASSIQUE

Compylobacter.jejuni Campylobacter.jejuni Doylei

Campylobacter.Coli

Campulobacter.fetus

Croissance à 25°C - - + +

Croissance à 42°C + - + -

Hippurate + + ou - - -

Céfalotine R S R S

Acide nalidixique S S S R

indoxylacétate + + ou - + -

Page 16: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

COPROCULTURE CLASSIQUE

Identification Salmonella :

• Galerie: identification espèce

• Sérotypage :

• Mélange agglutinines anti-O / sérum monovalent/ anti-H 1 et 2/ anti-Vi ( selon labo) puis envoyé CNR

• Test Sven Gard ( CBPE) Antibiogramme

Salmonella , Shigella ., Campylobacter, Yersinia .

Page 17: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

COPROCULTURE CLASSIQUE

Interprétation:Mise en évidence de Salmonella , Campylobacter .,

Yersinia enterocolitica, Shigella . pathologiqueCulture pure ou majoritaire sur PBC/Hektoen:

• Identifier et rendre P. aeruginosa, S. aureus et levures

Antibiogramme sur bactéries en situation de pathogénicité

Salmonella . déclaré à la TIAC

Page 18: ExamenBactériologieDesSelles - Copie

CONCLUSION Les résultats d'une coproculture doivent être

interprétés et confrontés aux données cliniques. La présence d'une bactérie ne témoigne pas forcément de son caractère pathogène. Par ailleurs il faut savoir que l'émission dans les selles, de certaines bactéries agents de diarrhées, peut être très brève et que souvent les coprocultures sont réalisées trop tard. En effet, il peut être difficile de recueillir des selles en cas d'épidémie. Il ne faut pas oublier également que de nombreuses diarrhées ont une origine virale, expliquant alors la négativité des cultures bactériennes