F. Buseyne 05/04/2013 Le Kremlin-Bicêtre ANRS-EP38-IMMIP AG 05/04/2013 Le Kremlin-Bicêtre Florence Buseyne

F. Buseyne 05/04/2013 Le Kremlin-Bicêtre

ANRS-EP38-IMMIP

AG 05/04/2013 Le Kremlin-Bicêtre

Florence Buseyne


ANRS-EP38-IMMIPInclusions et caractéristiques des sujets

93 patients inclus Février 2007-Février 200993 patients inclus Février 2007-Février 2009

Infection périnatale par le VIH-1>15 ansStatut thérapeutique inchangé depuis au moins 6 mois

Age médian : 17 ans (15-24)57% Filles

85% HAART, dont 75% ARN VIH <80 copies/ml 66% CD4 > 500 cellules/µl


Naissance --------- >15 ans

CliniqueTraitement

CD4Virus Le statut

immunitaire et

virologique actuel

ANRS-EP38-IMMIP : Objectifs


Différentiation des lymphocytes T

Naive

Naive

Naive

Naive

Antigène

Mémoire

MémoireMémoire

MémoireMémoire

VIHDestruction

La taille du compartiment CD4 naif est liée à la diversité du répertoire et la capacité des lymphocytes T à contrôler de nouvelles infections

Périphérie

Moelle osseuse

Thymus

Naive

Tissus lymphatiques


Méthode : analyse des cellules du sang périphérique par cytométrie en flux

Adapté de Maecker, NRI, 2012


% N

aive

CD

8

Non infectés IMMIP0

20

40

60

80

100

% N

aive

CD

4

Non infectés IMMIP0

20

40

60

80

100

CD4

Médiane

(10-90th)

CD8

Médiane (10-90th)

IMMIP

15-24 ans

56 (37-70) 31 (15-56)

Non infectés

(US 12-18 ans)

51 (31-65) 56 (42-73)

Les proportions de lymphocytes T CD4 naifs sont préservées chez les sujets de l’étude

Shearer, JACI, 2003

CD4

Médiane

(25-75th)

CD8

Médiane

(25-75th)

IMMIP

15-24 ans

56 (44-64) 31 (22-45)

Non infectés

(US Adultes)

50 (41-58) 52 (41-59)

Roederer, JCI, 1995

«Témoin » : intra-laboratoire, adultes non infectés VIH et non infectés VHC

«Témoin » : Littérature


Les proportions de lymphocytes T naifs sont corrélés au nombre de lymphocytes T CD4

CD4N (%)

CD

8 N (

%)

0 20 40 60 80 1000

20

40

60

80

100 =0.330 p=0.004

CD4/µl

CD

4 N (

%)

0 500 1000 15000

20

40

60

80

100 =0.387 p=0.04

CD4/µl

CD

8 N (

%)

0 500 1000 15000

20

40

60

80

100 =0. 656 p<0.0001


Les proportions de lymphocytes T naifs ne sont pas liées à l’âge/durée d’infection par le VIH

Age (yrs)

CD

4 N (

%)

15 20 250

20

40

60

80

100 =-0.261 p=0.17H

Age (yrs)

CD

8 N (

%)

15 20 250

20

40

60

80

100 =0.030 p=0.79J

Pas d’association avec l’âge au nadir de CD4, ni avec l’âge à l’initiation des HAART


Différentiation des lymphocytes T et infections virales

Naive

Naive

Naive

Naive

Antigène

Mémoire

MémoireMémoire

MémoireMémoire

VIH

VIH

Destruction

Les infections par le VIH et le CMV induisent une diminution des % de lymphocytes T naifs chez l’adulte

CMV

VIH


Les proportions de lymphocytes T CD8 naifs sont diminués chez les sujets ayant une réplication

active du VIH et chez les sujets infectés par le CMV

plasma HIV RNA

CD

8 N (

%)

< 80 copies/ml >= 80 copies/ml0

20

40

60

80

100 p<0.0001F

CMV serologyC

D8 N

(%

)Negative Positive

0

20

40

60

80

100 p<0.0001G


Les proportions de lymphocytes T CD4 naifs ne sont pas diminués chez les sujets ayant une réplication active du VIH et chez les sujets

infectés par le CMV

plasma HIV RNA

CD

4 N (

%)


20

40

60

80

100 p=0.10

CMV serologyC

D4 N

(%

)Negative Positive

0

20

40

60

80

100 p=0.46

Résultat paradoxallien CD4 chez les sujets de l’étudeLittérature adultes


Histoire de la maladie et lymphocytes naifs

→ Analyses stratifiées selon ARN VIH plasmatique (interactions)

Focus sur → les sujets dont l’ARN VIH est < 80 copies/ml → les lymphocytes T CD4


Les proportions de lymphocytes T CD4 naifs sont positivement corrélés avec la virémie cumulée au cours des 10 ans précédant le prélèvement

Durée cumulée sur 10 ansARN VIH < 500 copies (mois)

CD

4 N (

%)

0 50 100 1500

20

40

60

80

100 =-0.354 p=0.009

Virémie cumulée 10 ans(log10 (ARNVIH) xjours)

CD

4 N (

%)

0 5000 10000 15000 200000

20

40

60

80

100 =0.336 p=0.01

HIV DNA (log10 copies/106 PBMC)

%C

D4 N

1 2 3 40

20

40

60

80

100=0.224 p=0.11

ARN VIH < 80 copies/ml


Tropisme

CD

4 N (

%)

R5 X4R50

20

40

60

80

100 p=0.001

Les % de lymphocytes T CD4 naifs sont plus élevés chez les sujets ayant des virus X4R5

Virus X4R5 (« tropisme génétique »)=virus « archivé »-Stades avancés de la maladie (déplétion CD4)-Plus infectieux pour les lymphocytes T CD4 naifsque les virus R5



Les % de lymphocytes T CD4 naifs sont pas liés à la sévérité clinique/immunologique de la

maladie

stade CDC

CD

4 N (

%)

non C C0

20

40

60

80

100 p=0.18

CD4 nadir (%)C

D4 N

(%

)0 10 20 30

0

20

40

60

80

100 =0.107 p=0.58



Les % de lymphocytes T CD4 naifs « émigrants thymiques récents »

Kohler, Blood 2009

L’expression de la molécule CD31 définit deux populations de lymphocytes T CD4 naifs Le % de lymphocytes T CD4 naifs CD31+ est un marqueur de l’activité thymique

PBMC congelés, n=57, cytométrie en flux


Les % de lymphocytes T CD4 naifs « émigrants thymiques récents » sont plus élevés chez les

sujets ayant un ARN VIH plasmatique détectable

ARN VIH plasmatique

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N


60

70

80

90

100

p=0.003

% parmi les lymphocytes T CD4 naifs


Les % de lymphocytes T CD4 naifs « émigrants thymiques récents » sont positivement corrélés

au nombre de lymphocytes T CD4

CD4/µl

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

0 500 1000 150050

60

70

80

90

100 =0.487 p=0.002

CD4N (%)%

CD

4 NC

D31

+ p

arm

i C

D4 N

0 20 40 60 80 10050

60

70

80

90

100=0.252 p=0.14

Nombre lymphocytes T CD4 % CD4 naifs



Les % de lymphocytes T CD4 naifs « émigrants thymiques récents » sont négativement corrélés

à l’immunosuppression antérieure

CD4 nadir (%)

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

0 10 20 3050

60

70

80

90

100=0.474 p=0.002

Durée CD4%<15% (mois)%

CD

4 NC

D31

+ p

arm

i C

D4 N

0 50 100 15050

60

70

80

90

100=-0.536 p=0.0004

ARN VIH indetectables


Les % de lymphocytes T CD4 naifs « émigrants thymiques récents » ne sont pas liés à l’histoire

virologique, ni au tropisme viral

Virémie cumulée 10 ans(log10 (ARNVIH) xjours)

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

0 5000 10000 1500050

60

70

80

90

100 =-0.159 p=0.33

Durée cumulée sur 10 ansARN VIH < 500 copies (mois)

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

0 50 100 15050

60

70

80

90

100 =0.102 p=0.54

HIV DNA (log10 copies/106 PBMC)

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

1 2 3 450

60

70

80

90

100 =0.171 p=0.30

Tropisme

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

R5 X4R550

60

70

80

90

100 p=0.50

ARN VIH indetectables


Les % de lymphocytes T CD4 naifs « émigrants thymiques récents » sont plus

élevés chez les filles

Sexe

%C

D4 N

CD

31+

par

mi

CD

4 N

M F50

60

70

80

90

100 p=0.002


Analyses multivariées Sujets ARN VIH indétectable-%CD4 naifs

Naive T CD4

(% among CD4 lymphocytes)

Estimate [ 95% CI] P

Age

15-17 years

18-19 years

20-24 years

Reference

2.7

-2.4

[-4.8;10.3]

[-11.0;6.2]

0.54

CD4 cell count

Per 100 cells/µl

1.7 [0.40;3.99] 0.01

Viral tropism

X4R5

R5

Reference

-9.9 [-16.4;-3.5]

0.004

Cumulative viremia (10 yrs)

Per 1000 log10 copie x days

0.90 [-0.12;1.93] 0.08


Analyses multivariées Sujets ARN VIH indétectable-%CD4 RTE

CD4 RTE (% among naive CD4)

Estimate [ 95% CI] P

Age

15-17 years

18-19 years

20-24 years

Reference

-2.4

-1.1

[-6.4;1.6]

[-5.5;3.4]

0.47

CD4 cell count

Per 100 cells/µl 0.93 [0.21;1.65] 0.01

Sex

Male

Female

Reference

4.5 [1.0;8.0]

0.01

Lifetime duration of CD4% <15%

Per 100 months -5.7 [-10.3;-1.1] 0.02

Plasma IL-10 (100x per pg/ml) 1.3 [-0.2;2.9] 0.09


Chez les sujets ARN VIH plasmatique détectable… en bref

Prudence, manque de puissance

Lié aux lymphocytes T CD4 (%CD4 naifs, mais pas %CD4 RTE)

Non lié quantité d’ARN VIH plasmatique

Non lié à l’âge


Conclusions

Les proportions de lymphocytes T CD4 naifs et l’activité thymique (%RTE)

→ Sont positivement corrélées au nombre de lymphocytes T CD4 (≈adultes)

→ Ne sont pas diminuées/sont augmentées par la réplication du VIH (≠ adultes)Comparaison sujets ARN VIH détectable/indétectableHistoire virologique chez les sujets ARN VIH indétectable

Interprétation : la destruction des lymphocytes T CD4 par la réplication du VIH est compensée par une production accrue de lymphocytes T CD4 naifs dans le thymus

Décrit chez l’enfant infecté (corrélation positive TREC-ADN VIH)Décrit chez certains adultes (<40 ans) et avant immunosuppression sévère


DiscussionMaintien activité thymique élevée et de proportions de lymphocytes T CD4 naifs préservées avec ou sans suppression de la réplication virale

→ Résultat remarquable compte tenu des caractéristiques des sujets IMMIP médiane 17 ans après l’infection, nadir %CD4 = 8% (5-11)Puberté : début involution du thymus

→ Equilibre virologique/immunologique « pédiatrique », déjà observé via l’absence d’association ADN VIH-nombreCD4 (Avettand-Fenoel, JID, 2012)

→ Un bémol : Chez les sujets avec suppression de la réplication virale, le % de RTE est négativement corrélée à la durée d’immunosuppression sévère

→ Une inconnue : combien de temps cette activité thymique élevée va-t-elle durer?

→ Work in progress : impact des autres mécanismes immunologiques (activation, homéostasie…)


Remerciements

INSERM U1018

Y. Benmebarek

N. Bouallag-Bonnet

J. Lechenadec

J. Warszawski

ANRS

M. Trumeau

L. Marchand

Laboratoire de virologie-EA3620 U. René DescartesV. Avettand-FenoelC. Rouzioux

Institut Pasteur de ParisUPIPV puis EPVOF. BuseyneC. ClairetP. LoucheT. MontangeY. Rivière URIRC. DidierD. Scott-Algara

Sites hospitaliers ANRS-CO-10S. Blanche, F. Veber, M.C. MoureyA. Chacé, M. Bonnard C. Dollfus, G. VaudreG. Firtion, N. BoudjoudiM. Levine, A. Faye, C. Poder, S. Leveillé A. MayJ.P.Viard, A. MaignanC. Floch-TudalS. LemerleV. Jeantils, S. Tassi

Support financier

ANRS

Fondation AREVA

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