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Films biodégradablesFilms biodégradables

Véronique Bellon-MaurelVéronique Bellon-MaurelCemagref - MontpellierCemagref - Montpellier

[email protected]@cemagref.fr

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

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Les Secteurs d’activité des «plastiques»

(140 M T/ an en 2002)

Le contexteLe contexte

Emballages

Agriculture Hygiène

Bâtiment

Travaux

publics

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Emballages

Agriculture Hygiène

Bâtiment

Travaux

publics

une courte durée de vie à usage unique

films de faibles épaisseurs en contact avec des produits souillés

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Emballages

Agriculture Hygiène

Bâtiment

Travaux

publics

EMBALLAGES et HYGIENE :corps creux recyclésFilms, barquettes, sacs de caisse (1 Million/h)

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Emballages

Agriculture Hygiène

Bâtiment

Travaux

publics

FILMS PLASTIQUES AGRICOLES200.000T en France - 30% pourrait êtreremplacé par biodégradable (paillage, petit tunnel, ficelle, emballage roundball)

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Emballages

Agriculture Hygiène

Bâtiment

Travaux

publics

FILMS PLASTIQUES AGRICOLES20 000 ha de paillage en France3 000 000 ha de paillage dans le monde (2005).

150 fois plus!!!

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L’enjeu économiqueL’enjeu économique

Biodégradabilité =

un argument commercial

Besoin d’une normalisation et/ou de méthodes

standard pour évaluer la biodégradabilité d’un

matériau

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

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DéfinitionsDéfinitions

Dégradation: processus irréversible apportant des changements significatifs de la structure du matériau.

Biodégradation: dégradation du matériau par les micro-organismes selon les étapes: biofragmentation assimilation, minéralisation

Photodégradation: Dégradation dont le mécanisme primaire s ’effectue sous l ’action de la lumière (rayonnements visible et UV)

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Plastiques photodégradablesPlastiques photodégradables

Combinaison de sels stabilisateurs et accélérateurs (sels métallo-organiques dialkyl-dithiocarbamate)

Stabilisateurs anti-oxydants: A base de Nickel, réagit avec oxydants (ROOH), donne un sulfate de Ni qui se retrouve sous forme d ’oxyde et est rendu inactif par l ’argile

et les acides humiques. Accélérateurs: mécanisme radicalaireCréation d ’ions métalliques => formation de radicaux libres =>

autocatalyse

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Plastiques photodégradablesPlastiques photodégradables

Utilisés en paillage (maïs)Pb: si le plastique n ’est pas au soleil, mauvaise

dégradation (or on enfouit pour éviter la dispersion ou pour

labour) Toxicité des métaux lourds (Ni)Non, simulation sur 180 ans, pas de problème

Attention aux bio-oxo- (pipo)-photodégradables!!!!

…Type EPI:http://www.epi-global.com/en/Products/TDPA/superiority.htm

Autre exemple de FAUX biodégradable …http://www.degradable.net/Autre exemple de FAUX biodégradable …http://www.degradable.net/

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ASTM D6400-99 et le Standard européen EN 13432 établissent qu'afin qu'un produit soit compostable, les critères suivants doivent être

respectés:1) Désintégration, capacité de se fragmenter en de petits morceaux non distinguables après examen et un support sûr pour la bio assimilation et

la croissance microbienne.2) Biodégradation inhérente, conversion du carbone en gaz carbonique à un niveau de 60% sur une période de 180 jours. (ASTM D6400-99) et de

90% en 180 jours pour le standard européen (EN 13432)3) Assurance qu'il n’y a aucune preuve d'une quelconque écotoxicité dans le compost fini et que les sols peuvent garantir la croissance de

plantes.4) Toxicité, que les concentrations des métaux lourds soient inférieures à

50% des valeurs recommandées.Les additifs TDPA® répondent à tous ces critères sauf le critère 2, le taux de conversion rapide de carbone en gaz carbonique. Les matières

plastiques fabriquées avec les additifs TDPA® se dégradent et finalement se bio dégradent plus lentement que ce qui est exigé par les

standards ASTM D6400-99 et EN 13432.

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Plastiques biodégradables: originePlastiques biodégradables: origine

OrigineOrigine

NaturelleNaturelle SynthèseSynthèse

Origine Origine agricoleagricole

Biotechn.Biotechn. PursPurs CompositesComposites

Amidon, Amidon, Cellulose, Cellulose, CellophaneCellophanegélatinegélatine

Biopol,Biopol,Bionolle,Bionolle,PHB, PHVPHB, PHV

PolyestersPolyestersPLA, PCLPLA, PCL

Polyesters (PCL) +Polyesters (PCL) +Amidon (materbi)Amidon (materbi)

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Plastiques biodégradables:cahier des charges

Soufflable, Injectable, moulable...Soufflable, Injectable, moulable...

Agriculture

Résistance mécanique, Résistance mécanique, à l ’eau, imperméabilitéà l ’eau, imperméabilitéEtanchéité gazEtanchéité gaz

Aptitude à la compostabilité Aptitude à la compostabilité ou à la biodégradationou à la biodégradation

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

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Que mesurer sur un matériau biodégradable?

Matériau + Biomasse

CO2 et/ou CH4, H2O, monomères, nouvelle biomasse.

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Que mesurer?

Matériau + 02 + Biomasse

CO2 et/ou CH4, H2O, monomères, nouvelle biomasse.

Estimation de la disparitionEstimation de la disparition::- Perte de poids- Perte de poids- Surface dégradée- Surface dégradée

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Que mesurer?

Matériau + 02 + Biomasse

CO2 et/ou CH4, H2O, monomères, nouvelle biomasse.

Evaluation de la croissanceEvaluation de la croissance::- Envahissement- Envahissement microbien microbien

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Que mesurer?

Matériau + 02 + Biomasse

CO2 et/ou CH4, H2O, monomères, nouvelle biomasse.

Consommation d’OConsommation d’O22

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Que mesurer?

Matériau + Biomasse

CO2 et/ou CH4, H2O, monomères, nouvelle biomasse.

Production de CO2Production de CO2

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Bureau Test n° Titre Param.

ASTM D5210-92 Dégrad . anaérobie en CO2/CH4* présence de boues de step

D5209-92 Dégrad . aérobie en CO2 présence de boues de step

D5338-92 Dégrad . aérobie en compostage CO2

D5271-93 Dégrad . aérobie en présence de 02 boues activées de step

D5247-92 Dégrad . en présence de Mw & Méca micro-organismes spécifiques

JIS K6950-94 Idem D5271-93

CEN 261085-95 Biodég ultime aérobie et désint CO2 des matériaux d’emballage en cond. contrôlées de compostage

TESTS NORMALISESTESTS NORMALISES

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Les conditions de mesureLes conditions de mesure

Tests In Situ

Conditions externes

Sols et compost

Test de laboratoire

liquide

ConditionsControlées

Test de laboratoire

solide

ConditionsControlées

Facilité de mise en oeuvreFacilité de mise en oeuvre

TransférabilitéTransférabilité

Indices de biodégradabilité

in vitro

Indices de biodégradabilité

in situ

Indices deIndices debiodégradabilitébiodégradabilité

in vitroin vitro

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

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- Titrimétrie, Détecteur IR - 14C

Méthodes respirométriques CO2O2

Méthode de l'envahissement microbien

Mesure de la croissance microbienne

Méthodes enzymatiques

Matériau

InoculumMicro-organismes

Mesure de la perte de poids

Méthodes analytiques

Mesure des propriétés mécaniques

Etude de la méthode d’estimation de la Etude de la méthode d’estimation de la biodégradabilité biodégradabilité in vitro: in vitro: Un éventail de techniques ...Un éventail de techniques ...

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- Titrimétrie, Détecteur IR -14C

Méthodes respirométriques CO2O2

Méthode de l'envahissement microbien

Mesure de la croissance microbienne

Méthodes enzymatiques

Matériau

InoculumMicro-organismes

Mesure de la perte de poids

Méthodes analytiques

Mesure des propriétés mécaniques

Etude de la méthode d’estimation de la Etude de la méthode d’estimation de la biodégradabilité biodégradabilité in vitroin vitro

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Etude de la méthode d’estimation Etude de la méthode d’estimation de la biodégradabilité de la biodégradabilité in vitroin vitro

Matériau+ Inoculum + Milieu minéral + O2

Dégradation aérobie

CO2 + H2O + biomasse + matériau résiduel

Ctotal = CO2 + COD + Cbiomasse

+ C matériau résiduel

(Swift, 1992; Müller, 1994; Itävaara, 1995)(Swift, 1992; Müller, 1994; Itävaara, 1995)

On mesure le CO2 (test de Sturm)On mesure le CO2 (test de Sturm)

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Méthode basée sur la future norme européenne qui est un test modifié de Sturm (Sturm, 1973)

air pressurisé

Production d’air exempt

en CO2

air exempt de CO2 air sortant

Liquide+ inoculum+ matériau

Gaz

Bioréacteur

- Titrimétrie Ba(OH)2

ou détection IR

Détection

CO2

Mise en place de la méthode Mise en place de la méthode in vitroin vitro

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Caractérisation de l’Inoculum

Inoculum=

Boue activée

Mesure du carbone

organique dissous

Mesure des MES et MVS

Dénombrement sur boite de Pétri

des cellules viablesUnités Formant Colonies

Dénombrement sur cellule de Thoma des cellules actives Coloration à l’INT

(Thouand, 1993)

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6 réacteurs pour 1 matériau

1. Test: inoc + mat1. Test: inoc + mat

2. Test: idem2. Test: idem

3. Inhib: inoc + mat + ac sodium3. Inhib: inoc + mat + ac sodium

4. Blanc: inoc4. Blanc: inoc

5. Ref >0: inoc + ac sodium5. Ref >0: inoc + ac sodium

6. Ref <0: inoc + PE6. Ref <0: inoc + PE

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Banc manuel de mesure de la biodégradabilité (Draft CEN, 1995):

Pièges CO2

Bioréacteurs

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Evolution du CO2 durant la dégradation

0 5 10 15 20 25 30 35 40

0

50

100

150

200

250

CO

2 cum

ulé

(mg)

Temps (Jours)

Acétate de Sodium

Matériau PHBV(A)

«Inoculum seul»

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Evolution du CO2 durant la dégradation

Matériau Matériau Teneur CTeneur C ThCOThCO22

Taux de minéralisationmCO2 dégagé (matériau) (inoculum)

mThCO2

mCO2 dégagé

Acétate de Sodium = Molécule de référenceAcétate de Sodium = Molécule de référence

Courbe référencée par rapport à l ’acétate de sodiumCourbe référencée par rapport à l ’acétate de sodium

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Evolution du CO2 durant la dégradation

0 5 10 15 20 25 30 35 40

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0T

aux

de m

inér

alis

atio

n (C

O2)

Temps (Jours)

Matériau PHBV(A)

Courbe référencée par rapport

à l’acétate de sodium

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Banque de données

0 10 20 30 40 50

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1,0

Ta

ux d

e m

iné

ralis

atio

n

Temps (Jours)

Protéines (P)

Amidon+ PCL (C)

PE (T)

Taux de minéralisation lu à t = 35 joursTaux de minéralisation lu à t = 35 jours

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Classement après 35 jours d’exposition

Matériaux Matériaux Facilement BiodégradablesFacilement Biodégradables

PHBV (e = 55µm) 99 %

PCL 85 %

Cellophane 76 %

Matériaux de Matériaux de Biodégradabilité intermédiaireBiodégradabilité intermédiaire

Amidon + PCL 49 %

PLA 29 %

Matériaux Non BiodégradablesMatériaux Non Biodégradables PE + Amidon 2 %

PE 0,3 %

Banque de données

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Modélisation de la dégradation du matériau A en laboratoire

0 5 10 15 20 25 30 350,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Tau

x de

min

éral

isat

ion

Temps (Jours)

ymax Hill

ymax/2

k=T1/2

Sigmoïde de Hill

Modélisation

Sigmoïde

de

Hill

y yt

k t

n

n n max

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0 10 20 30 40 50

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1,0

Ta

ux d

e m

iné

ralis

atio

n

Temps (Jours)

Protéines (P)

Amidon+ PCL (C)

PE (T)

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mais des limites ...mais des limites ...

Automatisation

Risque de fuite– Dosage manuel

et journalier

Coût des tests– Durée– Travail laborieux

Encombrement

AUTOMATISATIONDE LA

MESURE

basée sur le Draft CEN

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Banc automatisé de mesure de la biodégradabilité

AnalyseurIR de

CO2

Bioréacteurs

Ordinateur

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AutomatisationAutomatisationAutomatisation

0 5 10 15 20 25 30

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1,0T

aux

de c

onve

rsio

n du

CO

2

Temps (Jours)

Méthode manuelleMéthode automatisée «classique»Méthode automatisée «optimisée»

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Test laboratoire sur sol (1)

Pr e s s ur e c ont r ol le r

F lus hingout

C omp r e s s or

F low r at ec ont r ol le r

F il t e r

X15

F il t e r

F low r at e andC O 2

me as ur e me nt s

I nle t airfl ow r at ec ont r ol le r

H umid ifi e r

B ior e ac t or

C ond e ns e r

Col

dw

ater

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Tests laboratoire sur sol (2)

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Taux de conversion

Niveau de Conversion de 43% après 12 joursNiveau de Conversion de 43% après 12 jours

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

0 48 96 144 192 240 288 336time (hours)

co

nve

rsio

n r

ate

(%)

vermiculite 1

vermiculite 2

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

Page 47: Films biodégradables Véronique Bellon-Maurel Cemagref - Montpellier veronique.bellon@cemagref.fr

Biodégradabilité in situ (compost)

Haut 1,3m

Moyen0,90m

Bas 0,30m

0,30m

0,30m

1ère série de 5 cadres

2ème série de 5 cadres

3ème série de 5 cadres

4ème série de 5 cadres

3m

12m

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Biodégradabilité in situ (compost)

• 83 jours avec 4 prélèvements: 4 blocs prélevés à 7, 30, 55 et 83 jours

• 10 échantillons x 3 réplicats = 30 échantillons par prélèvement: 120 échantillons

• PP et SD

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0 100 200 300 400 500 600 7000,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

WL SD Toulouse Rennes Clermont Montpellier Compost

WL -

We

ight

loss

DS

- D

eg

rad

ed s

urf

ace

Time (days)

Biodégradabilité in situ (compost)

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Biodégradabilité in situ (compost)• Le temps de dégradation en compost sont

qqfois 6 fois plus courts que ceux obtenus pour une exposition sur sol.

• En compost, du fait de la température, le matériau peut changer de structure ce qui influence la dégradation (changement de cristallinité)?

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PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, * Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, solsol))

* Perspectives* Perspectives

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Mise en place du gabaritMise en place du gabarit

Mise en place des cadres

cadre

matériau

45°

Sol 5 cm

Phase terminale de recouvrement

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ExpérimentationExpérimentation Choix des sites

R

C

M

T

CemagrefVarennes S/Allier

CemagrefMontpellier

INRARennes

INRAAuzeville

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Protocole d’enfouissement

20 matériaux étudiés en triplicat 4 sites 6 relevés sur 2 ans

(20 matériaux) x (3 réplicats) x (6 prélèvements) x (4 sites)

= 1440 échantillons

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Représentation d’une parcelle

6,5 m

5,5 m

14 mois

1, 2, 3 4, 5, 6

Site: Varennes S/Allier

414 mois

622 mois

518 mois

26 mois

310 mois

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AVANT

APRES 2 ans

Matériaux: A B C D E F

TauxTauxde Perte de Poids (PP)de Perte de Poids (PP)

TauxTaux de Surface Dégradée (SD)de Surface Dégradée (SD)

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Dégradation du matériau PHBV (150 µm)

0

20

40

60

80

100 %

Per

te d

e P

oids

03/95 07/95 11/95 03/96 07/96 11/96 03/97

Durée de l’exposition

Montpellier

ToulouseClermont

Rennes

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0

20

40

60

80

100 %

Per

te d

e P

oids

03/95 07/95 11/95 03/96 07/96 11/96 03/97

Durée de l’exposition

PHBV (150µm)Site de Rennes

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0

20

40

60

80

100 %

Per

te d

e P

oids

03/95 07/95 11/95 03/96 07/96 11/96 03/97

Durée de l’exposition

PHBV (150µm)Site de Rennes

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Surface dégradéeà estimer

Matériau PHBV (155 µm)

Signal Vidéo

Traitement de l’image

Conversion Analogique-Numérique

Taux de Surface dégradée

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Dégradation du matériau PHBV (155µm) sur le site de Rennes

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1 T

aux

03/95 07/95 11/95 03/96 07/96 11/96 03/97

Durée de l’exposition

Taux de surface dégradée

Taux de Perte de Poids

Page 62: Films biodégradables Véronique Bellon-Maurel Cemagref - Montpellier veronique.bellon@cemagref.fr

Relation Surface dégradée / Perte de PoidsRelation Surface dégradée / Perte de Poids

0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Matériau PHBV (e=55µm)

Tau

x de

Per

te d

e P

oids

Taux de Surface dégradée0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

Matériau PHBV (e=150µm)

Toulouse

Rennes

Clermont

Montpellier

Compost

Tau

x de

Per

te d

e P

oids

Taux de Surface dégradée

Page 63: Films biodégradables Véronique Bellon-Maurel Cemagref - Montpellier veronique.bellon@cemagref.fr

PLANPLAN

* Problématique de l ’élimination des plastiques* Problématique de l ’élimination des plastiques

* Définitions: dégradabilité(s)* Définitions: dégradabilité(s)

* Mesure de la biodégradabilité: généralités* Mesure de la biodégradabilité: généralités

* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire* Mesure de la biodégradabilité en laboratoire

* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)* Mesure de la biodégradabilité en conditions réelles (compost, sol)

* Perspectives* Perspectives

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Les perspectives

• Modéliser le comportement d’un matériau dans un environnement donné à partir de sa biodégradabilité intrinsèque

• Connaître l ’impact agronomique/écologique des matériaux biodégradables

• Encourager les marques et les normes liées à la biodégradabilité.

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Caractérisationdes matériaux

Tests in vitroMéthode

normalisée

Tests in situ

Caractérisationdes sites

CHIMIQUE:%C, H, N, O

PHYSIQUE:e, Hydro.,Tsc

ymax, k, n- SD

- PP

SOL:Granulométrie

A, L, S

CHIMIQUE MO, pH, CN

CLIMAT Tmoy., P

Histogramme T

Modélisation dela dégradation des

matériaux

Temps

ModélisationModélisation

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Erreur de prédiction (%)

Nom

bre

d’é

chan

tillo

ns

corr

ecte

men

t pré

dit

445

9855 43

0

100

200

300

400

500

5 10 15 20

Résultats brutsRésultats bruts

0,61

0,750,84

0,89

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

5 10 15 20

Erreur de prédiction (%)

Tau

x d

'éch

anti

llon

s co

rrec

tem

ent p

rédi

t

Résultats cumulésRésultats cumulés

Page 67: Films biodégradables Véronique Bellon-Maurel Cemagref - Montpellier veronique.bellon@cemagref.fr

Impact agronomique des BioD

- Tests agronomiques:

- résultats OK en serre

- en plein champ: prob de détérioration précoce d ’où différence agronomique

- Quid des oligomères relargués?

Pb pour agriculture biologique (GRAB)

- Quid des microfragments relargués

Page 68: Films biodégradables Véronique Bellon-Maurel Cemagref - Montpellier veronique.bellon@cemagref.fr

Impact agronomique des BioD

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Encourager les marques :OK Compost

OK Biodégradable

4 conditions pour une marque trans-nationale

1. Même normes2. Zone éco homogène3. Support de l’industrie

4. Bonne coopération entre organismes de certification

«Tested once, approved once, accepted everywhere»

Bientôt OK plasticulture?Bientôt OK plasticulture?

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Encourager les normes et législation

Norme française (NF U52-001 – Matériaux biodégradables pour l'agriculture et l'horticulture - Produits de paillage - Exigences et méthodes d'essai, agréée en Février 2005),

11 Octobre 2005 : interdiction des sacs plastiques

Non biodégradables en 2010

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Utile…

• Comité Français pour la Biodégradabilité (COBIO): www.cobio.org

• I. B. P. M. A. Int Biodegradable Products Manufacturers Association- Bert Lemmes : 32 2 772 90 80

• AIB Vinçotte 0032 2 674 57 11OK Compost - OK Biodegradable

• http://www.degradable.net/downloads/ICS_Info_Pack_2001.pdf