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HématologieNiveau 1
Alexandra Briend-Marchal
Patricia Crosse
Laboratoire Vebio
www.vebio.fr
Plan
• Pré-requis techniques
• La physiologie: hématopoïèse, rôle des hématies, rôle des leucocytes
• L’examen d’un frottis sanguin: morphologie des hématies et des leucocytes
• Application: quelques cas cliniques
• Questions à choix multiples
Les techniques: prise du sang, réalisation et lecture d’un frottis
sanguin
Les techniques: prise de sang
Les techniques: prise de sang
• Tube propre (ne pas contaminer le prélèvement)
• EDTA (bouchon violet) non périmé
• Agiter doucement par retournements successifs
• Réaliser un frottis sanguin
Les techniques: réalisation d’un frottis sanguin
Impossible d’afficher l’image.
Les techniques: réalisation d’un frottis sanguin
Impossible d’afficher l’image.
Frottis sanguins inexploitables et exploitable
Impossible d’afficher l’image.
inexploitablescorrect
Frottis trop épais
Impossible d’afficher l’image.
Superposition des hématies
Lecture d’un frottis sanguin
Zone de lecture d’un frottis sanguin:2ème tiers vers la queue de frottis
Si trop proche de la base: hématies superposées et formule leucocytaire modifiée (plus de lympho, moins de neutro)
Si trop proche de la queue de frottis: sur-estimationde certains leucocytes (éosino et mono)
Le microhematocrit centrifugé, HCT
• Micro centrifuger un tube capillaire à grande vitesse (13 000 g)
• Le plasma est en haut
• La couche intermédiaire est constituée de leucocytes et de plaquettes
• Les hématies sont en bas
Impossible d’afficher l’image.
Plasma ictérique
Plasma lipémique
Plasma hémolysé
Les techniques: automates à variation d’impédance
Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter)
• Comptage dans 2 cuves séparées:
- 1 pour les hématies et les plaquettes
- 1 pour les leucocytes
• Les cellules passent à travers une ouverture créant une différence de potentiel électrique entre deux électrodes
• La variation d’impédance est fonction du volume de la particule, ce qui permet de classer chacune des cellules
Impossible d’afficher l’image.
Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter)
• Les numérations érythrocytaire, leucocytaire et plaquettaire sont réalisées
• Le VGM est mesuré
• Une formule leucocytaire approximative est déterminée (par classification des GB en fonction de leur taille)
• L’hémoglobinémie est mesurée par spectrophotométrie après lyse des GR.
Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter)
Valeurs mesurées:
• Numération des GR
• VGM (volume globulaire moyen)
• Hémoglobinémie
• Numération des plaquettes
• VPM (volume plaquettaire moyen)
• Numération des GB et formule approximative
Valeurs calculées:
• Hématocrite: RBC X MCV
• TCMH (taux corpusculaire moyen en hémoglobine): Hgb / nbre de GR
• CCMH (concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine): Hgb / Hématocrite
• RDW (Indice de variation de la taille des GR)
Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat)
Compteurs de cellules par analyse du buffy coat
• Tube capillaire spécial contenant un cylindre de matière plastique (flotteur).
• Lors de la centrifugation, la couche leuco-plaquettaire s’étend le long du flotteur.
• La fluorescence est utilisée pour différencier les couches de cellules.
• L'épaisseur de la couche de chaque type de cellule est corrélée avec sa concentration.
Impossible d’afficher l’image.
Compteurs de cellules par analyse du buffy coat
Valeurs mesurées:
• Hématocrite
• CCMH (concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine): Hgb / Hématocrite
• Plaquettocrite
• Fibrinogène
• Buffy coat
Valeurs calculées:
• HGB
Numération des réticulocytes
• Coloration spéciale des ARN rémanent dans les réticulocytes colorés en bleu foncé par Bleu de Crésyl Brillant
• Comptage des cellules colorées (% des cellules non colorées au total)
• Interprétation de la numération absolue des réticulocytes seulement
Impossible d’afficher l’image.
Réticulocytes
Physiopathologie: l’hématopoïèse et le rôle des différentes populations cellulaires
Hématopoïèse
L’academie de Dijon
Hématopoïèse
Erythropoïèse
• L'hématopoïèse se déroule, après la naissance dans la moelle des os
• L’érythropoïétine agit sur les CFU-E (colonyforming unit - erythocyte) qui répond en se divisant ou en se différenciant en proérythroblastes
• L'érythropoïétine est produite par le rein, en réponse à une hypoxie
Erythropoïèse: Moelle Osseuse
Erythroblastes acidophile
Erythroblaste polychromatophile
Erythroblastebasophile
Proérythroblaste
Myélopoïèse
• La myélopoïèse se déroule principalement après la naissance dans la moelle osseuse
• La myélopoïèse est régulée par les cytokines
(exemple CSF)
Myélopoïèse
Prolifération Maturation Circulation
Moelle osseuse Sang
Le rôle des hématies:apporter l’oxygène aux tissus
Le rôle des hématies
• La fonction principale des hématies et à apporter l’oxygène aux tissus
• Toute l'énergie générée par le métabolisme de l’hématie est consacrée au maintien de la forme des cellules, à la structure de la membrane, aux fonctions enzymatiques, au maintien du fer réduit, le but final étant le fait d'optimiser l'apport d'oxygène aux tissus
Le rôle des leucocytes: défendre l’organisme contre les agressions
Le rôle des neutrophiles
• Rôle dans l'immunité innée
• La fonction principale des neutrophiles est (associée à l’inflammation aiguë) de lutter contre la pénétration et le développement de l’ensemble des éléments infectieux (bactéries, virus, champignons) et non-infectieux (cellules nécrotiques, corps étrangers)
• Arrivée aux contacts des éléments étrangers, libération de substances actives, phagocytose
• Rôle dans l’immunité adaptive: immunorégulation
Migration des polynucléaires neutrophiles
1. Margination, adhérence à l'endothélium
2. Migration à travers l'endothélium
3. Migration dans les tissus interstitiels
4. Lutter contre l’infection
Le polynucléaire neutrophile
• 3 Pools:
- Circulant
- Marginé
- Tissulaire
• Un stress induit une démarginalisation et une augmentation du nombre de neutrophiles circulants.
Le rôle des lymphocytes:
• Rôle dans l'immunité innée (cellules NK)
• Rôle dans l’immunité adaptive:
Humorale: production des anti-
corps
Cellulaire: cytotoxicité ou
hypersensibilité retardée
• Recrutement des monocytes
Les lymphocytes
• Production médullaire et périphérique (ganglions lymphatiques, rate et thymus).
• Pools circulant et marginé
Le rôle des monocytes:
• Rôle dans l'immunité innée
• La fonction principale des macrophages est de lutter contre la pénétration et le développement de l’ensemble des éléments infectieux (bactéries, virus, champignons) et non-infectieux (cellules nécrotiques, corps étrangers)
• Arrivée aux contacts des éléments étrangers, libération de substances actives, phagocytose
• Rôle dans l’immunité adaptive: immunorégulation
• Rôle dans la réparation tissulaire
Les monocytes
• Taille d’un monocyte: 12-20 microns
• Appartient au (système des phagocytes mononucléés): cellules avec de nombreuses fonctions
• Monocytes circulent dans le sang, puis entrent tissus pour devenir des macrophages.
• Monocytose:
Inflammation
Glucocorticoïdes
NéoplasieMonocyte PNN
Les polynucléaires éosinophiles
• Taille: 12-15 microns
• Production dans la moelle osseuse est stimulée par les cytokines (IL5 surtout)
• Pools circulant et marginé
• Ils circulent pendant quelques heures max puis entrent dans les tissus, où ils peuvent vivre pendant des semaines.
PNN PNE
Eosinophilie
Causes:
- parasitose
- phénomène allergique
- syndrome éosinophilique
- syndrome paranéoplasique (mastocytome, autre)
Le rôle des plaquettes: assurer l’hémostase
Rôle des plaquettes
• La première fonction des plaquettes est de contribuer à réparer des brèches vasculaires et à prévenir une hémorragie, en participant à la formation des bouchons hémostatiques. Les plaquettes sont consommées dans ce processus.
• L'énergie pour les fonctions plaquettaires est dérivé de l'ATP (généré par la glycolyse aérobie et la phosphorylation oxydative)
• Les plaquettes jouent également un rôle importante dans l’inflammation
Morphologie des cellules sanguines
Les hématies
Examen des hématies
• Cellule anucléée chez mammifères (nucléée chez oiseaux, reptiles, batraciens, poissons)
• Produite par lignée érythroïdemédullaire
• Volume variable en fonction espèce
• Examen de la taille, de la forme, de la couleur
• Uniformité générale
Examen des hématies: chien
• Disques biconcaves
• Volume: 65-75 fl
Cas particuliers:
Macrocytose Caniche (VGM=80 fl)
Microcytose Akita et Shiba Inu
(VGM= 60 fl)
• Contours réguliers
• Légère pâleur centrale
Examen des hématies: chat
• Disque biconcave
• Volume: 45-55 fl
• Légère anisocytosephysiologique
• Pâleur centrale peu visible
Les leucocytes
Le polynucléaire neutrophile
• Diamètre: 10-12 microns (GR= 7 microns)
• Noyau polylobé (2 à 5 lobes)
• Cytoplasme abondant clair sans granulation
Polynucléaire éosinophile: Chien
• Diamètre: 12 microns
• Noyau bi ou trilobé
• Chien: granulations rondes, oranges, en nombre et de taille variables
Polynucléaire éosinophile: Chat
• Diamètre: 12 microns
• Bilobé le plus souvent
• Chat: granulations très nombreuses, en batonnets, oranges
Polynucléaire éosinophile: chien et chat
PNE de ChienPNE de Chat
Les polynucléaires basophiles
• Très rarement observés (très faible nombre circulants)
• Plus fréquent chez le chat que chez le chien
• Production dans la moelle osseuse est stimulée par les cytokines
Le lymphocyte
• Diamètre: 7 à 10 microns
• Noyau rond parfois encoché, cytoplasme clair très réduit
• Rôle dans l’immunité à médiation humorale
Le monocyte
• Diamètre: 15-20 microns
• Noyau massif grossièrement en U, cytoplasme abondant grisâtre et parfois vacuolisé
• Rôle dans l’immunité à médiation cellulaire
monocyte
Les plaquettes
Les plaquettes
• Plaquettes = fragments de cytoplasme de mégacaryocytes médullaires
• Rôle: hémostase primaire (formation du thrombus blanc)
• Chat: plaquettes volumineuses + amas fréquents
Plaquettes (thrombocytose sévère ici)
Les plaquettes
Plaquettes Amas de plaquettes
Macroplaquettes: Cavalier King Charles
Amas de plaquettes
• Très fréquent chez le chat physiologiquement
• Peut être le signe d’un état d’hyperagrégabilitéplaquettaire
Modifications des hématies
Modification de taille et de coleur
• Différence de taille entre les GR = anisocytose
• Différence de couleur entre les GR = polychromatophilie
Anisocytose + polychromatophilie
• Réticulocytes = plus gros et plus bleus que les GR
• Régénération des GR:
Perte de sang
Anémie hémolytique
Réticulocytes
Réticulocytose: bleu de Crésyl
• Réticulocytes possèdent résidus ARN colorés en bleu foncé par Bleu de Crésyl Brillant
• Classification de l’anémie (régénérative ou pas)
Réticulocytes
Hypochromie
• Parmi des hématies normales:
- hématies pâles
- hématies petites
- cellules cibles
• Anémie ferriprive
Annulocytes
Corps de Howell-Joly
• Résidu nucléaire, rond, très basophile
• Fréquent et physio chez chat en petit nombre
• Augmenté chez animal splénectomisé
Corps Howell-Joly
Erythroblastes circulants
Acanthocytes
• Hématies dont le membrane est déformée, comme « ondulée »
• Altération du ratio entre différents lipides membranaires (hépatopathie, défaut d’absorption intestinale des lipides)
Acanthocyte
Schizocytes
• Morceaux d’hématies de formes aléatoires
• Fragmentation mécanique (glomérulopathie, endocardite, néovascularisation tumoraleV)
Schizocytes
Corps de Heinz
• Oxydation de l’hémoglobine qui précipite sous forme d’un corpuscule rejeté à un pole de l’hématie puis à l’extérieur
• CT >> CN
• Hématies définitivement non fonctionnelle
• Traitement oxydant (paracématol..), additifs alimentaires, oignons
Corps de Heinz
Corps de Heinz
Corps de Heinz:bleu de Crésyl
Réticulocyte
Corps de Heinz
Eccentrocytes
Eccentrocytes
Sphérocytes
Sphérocytes
Parasitoses décelables sur le frottis sanguin
• CN: babesiose (dans GR), dirofilariose, hépatozoonose (dansmonocytes), anaplasmose (dans les plaquettes)
• CT: mycoplasmose (dans GR) (haemofelis, haemominutum)
Babesia sp
Babesiose(Babesia canis)
Dirofilariose(dirofilaria immitis ou repens)
Anaplasmose(anaplasma platys)
Anaplasma platys
Mycoplasmose(Mycoplasma haemofelis ou haemominutum)
Mycoplasma
Modifications des leucocytes
Jeunes Polynucléaires Neutrophiles toxiques
• Formes immatures peu lobées
• Parfois cytoplasme spumeux ou corps de Doëhle
• Infection, surtout bactérienne
Jeunes polynucléaires neutrophiles toxiques
Jeunes PNN
Corps de Doëhle
Corps de Doëhle
• Corpuscules cytoplasmiques ronds, bleutés, taille variable
• Résidus de reticulum endoplasmique lors de défaut maturation granuleux
• Observés dans infections suppurées
Corps de Doëhle
Corps de Doëhle
Neutrophilie
• Physiologique (réaction de fuite, de défense)
• Associé à une augmentation des glucocorticoidescirculants (origine médicamenteuse ou hypercorticisme spontané)
• Inflammatoire
• Tumorale
Les lymphocytes
• Lymphocytose
Physiologique
Inflammation chronique
Néoplasie
Hypocorticisme
• Lymphopénie
Glucocorticoïdes
Inflammation aïgue
Perte de lymphocytes (épanchement chyleux)
Hypoplasie lymphoïde (immunosuppression)
Lymphocytes activés
• Plus grands, cytoplasme plus abondant et plus basophile
• Parfois quelques grains cytoplasmiques rougeâtres
Lymphocyte activé
Cas cliniques
Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
• HCT: 10%
• HGB: 4 g/dL
• VGM: 55 fl
• Réticulocytes: 138 320/µL
• Plaquettes: 331 000/µL
• Neutrophiles: 38 260/µL
• Coombs: Positif
Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
• LIGNÉE ROUGE : Anisocytose et polychromatophilie ++.
• LIGNEE PLAQUETTAIRE : Pas d'anomalies morphologiques notées.
• LIGNEE BLANCHE : Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.
Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans
• Conclusion: anémie périphéique et Coombs +
- Evoque une anémie à médiation immune
- Un éventuel foyer de saignement ne peut pas être exlu
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
• HCT: 28%
• HGB: 9 g/dL
• VGM: 65 fl
• Réticulocytes: 40 200/µL
• Plaquettes: 257 000/µL
• Leucocytes: 4 820/µL
• Neutrophiles: 3 520/µL
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
• LIGNÉE ROUGE: Pas d'anisocytose ni de polychromatophilie.
• LIGNEE PLAQUETTAIRE: Macroplaquettes
• LIGNEE BLANCHE: Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires
observées.
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
Conclusion:
Anémie non régénérative modérée compatible avec:
-une inflammation chronique
-une hypoplasie médullaire
-une insuffisance rénale chronique
-une perte de sang chronique (parasitisme interne ou externe
sévère? ulcère digestif?...)
Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans
Prochaine étapes:
1. Cherchez un foyer inflammatoire chronique
2. Myélogramme
Cas 3: Chien cocker 12 ans
Cas 3: Chien cocker 12 ans
• HCT: 25%
• HGB: 8,5 g/L
• VGM: 73 fl
• Réticulocytes: 156 000/µL
• Plaquettes: 65 000/µL
• Neutrophiles: 9 000/µL
Cas 3: Chien cocker 12 ans
• LIGNÉE ROUGE : Anisocytose et polychromatophilie ++
Sphérocytes +
• LIGNEE PLAQUETTAIRE : Pas d'anomalies morphologiques notées.
• LIGNEE BLANCHE : Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.
Cas 3: Chien cocker 12 ans
Conclusion:
Anémie périphérique compatible avec:
- une anémie à médiation immune
- un éventuel foyer de saignement
Cas 3: Chien cocker 12 ans
Prochaines étapes:
• Un test de Coombs
• Une biochimie
• Historique d’intoxication médicamenteuse ou de transfusion?
Alexandra Briend-MarchalDocteur VétérinaireDiplômée du Collège Européende Pathologie Clinique VétérinaireD.U. Cyto-Hématologie HumaineC.E.S. Hémato-Biochimie Vétérinaire
Stéphanie Lafarge-BeurletDocteur VétérinaireD.U. Cyto-Hématologie HumaineMaster de CancérologieDoctorat de Science
Patricia CrosseDocteur VétérinaireDiplômée du Collège Américainde Pathologie Vétériniaire, option Biologie CliniqueAncienne consultante au Royal College de Londres
Expertise, Disponibilité, Indépendance, Qualité
ACTIVITÉSBiologie vétérinaireRecherche et développement cliniques, en interne et en partenariats (publics et privés)Formation continue vétérinaire (articles, conférences, cours, stages ...)
ENGAGEMENTSAffilié à un contrôle qualité externe internationalMatériel de pointe et méthodes validées pour la biologie vétérinaireExpertise, disponibilité et indépendance des biologistes vétérinairesAgrément par le Collège Européen de Biologie Clinique pour la formation de résidents
SERVICESRésultats disponibles sur internet (espace personnalisé et sécurisé)Transport simple et rapide à un coût minimalFourniture de matériel de prélèvement et de kits d’envoi aux normes P650Organisation de cessions de formation continue en biologie clinique (ouvrant droit à des points de formation)
Laboratoire Vebio Biologie Vétérinaire
41bis avenue Aristide Briand
94117 Arcueil cedex
Tel : +33 (0)1 49 12 11 02
Fax : +33 (0)1 49 12 11 10
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