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Les prlvements gnitaux masculins

Croze Muriel et Mazellier Ccile DES microbiologie Semestre dt 2002

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Problme mdical (1/4)

Infections gnitales atteinte des organes gnitaux. Infections vnriennes maladies sexuellement transmissibles pouvant voluer dans des aires diffrentes de celles des organes de la reproduction. Les aspects cliniques de ces infections peuvent tre diffrents : ulcrations gnitales ; infections urtrales (urtrite) ; autres infections gnitales, chez lhomme : orchite pididymite prostatite anite. Un grand nombre de ces infections sont des MST et ncessiteront lexamen du ou des partenaires sexuels. Lors de lexploration dune hypofertilit recherche des micro-organismes responsables chez lhomme et la femme.

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Problme mdical (2/4)Physiopathologie de lurtrite masculine Infection frquente, presque toujours une MST. Symptomatique chez lhomme, le plus souvent asymptomatique chez la femme recherche dune infection chez la ou les partenaires dun homme atteint dune urtrite ou dune infection gnitale.

Urtrite aigu Consultation quelques jours aprs le rapport sexuel infectant pour : douleur la miction, coulement purulent. Dans 95% des cas urtrite gonococcique avec 1 fois/2 une autre MST concomittente. Aprs gurison urtrite chronique dite post gonococcique. Urtrite sub-aigu ou chronique Consultation plusieurs jours ou semaine aprs le dbut des symptmes pour : coulement mucode discret, dysurie, dmangeaison (plus rarement). Possible urtrite gonococcique mais le plus souvent autre infection spcifique en cause. Distinction faire : MST ou non MST. Classiquement, on parle durtrite gonococcique et durtrite non gonococcique.

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Problme mdical (3/4)Etiologies de lurtrite masculineBlennorragie (gonocoque) 95 % des urtrites. Complications de lurtrite gonococcique : septicmie, arthrite, infection cardiaque, mningite. Maladie de Nicolas-Favre (Chlamydia trachomatis) 50 % des urtrites non gonococciques. Association au gonocoque dans 30 % des cas : 60 % des urtrites post-gonococciques sont galemenyt dues Chlamydia thrachomatis. Le plus souvent pas de manifestation clinique vidente. Urtrite pouvant entraner une infection des canaux dfrents et des testicules (pididymite). Complications : pididymite aigu, unilatrale, strilit. Mycoplasmes Ureaplasma urealyticum et Mycoplasma genitalium sont les 2 espces agents durtrites non gonococciques (UNG). U. urealyticum trs probablement responsable de 15 20 % des UNG aigus ou chroniques. Peuvent tre responsables darthrites ractionnelles.

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Problme mdical (4/4)Physiopathologie des ulcrations transmises par voie vnrienneSige = le plus souvent au niveau de lappareil gnital. Infection primitive se traduisant par une ulcration et saccompagnant dadnopathies. Syphilis (Treponema pallidum) Adnopathies satellites. 7 10 % des chancres syphilitiques sigent en dehors des organes gnitaux (anus, langue, amygdale). Diffrentes manifestations allant druptions cutanes (ex : rosole) jusqu des affections des systmes cardiaques et nerveux (paralysie gnrale = PG). Chancre mou (Haemophilus ducreyi) Sige la partie cutane des organes gnitaux = sillon balano-prputial, fourreau de la verge (grande lvres, clitoris, anus chez la femme). Ulcration douloureuse bords irrguliers, dcolls, recouverte dun enduit gristre, ncrotique et purulent. Saccompagne dune adnopathie satellite = bubon inguinal.

Cas particulier du spermeScrtion strile ltat normal. Recherche dun micro-organisme : diagnostic tiologique dune infection haute de la sphre gnitale masculine = orchite, pididymite, prostatite (contamination possible du sperme par des germes pathognes ou commensaux des voies gnitales basses), contrle de la qualit du sperme dans le cadre de la fcondation in vitro et du don de sperme (insmination artificielle).

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Problme de sant publiqueLes MST bactriennes : Blennorragie (Neisseria gonorrhoeae) Syphilis (Treponema pallidum) Chancre mou (Haemophilus ducreyi) Maladie de Nicolas-Favre (Chlamydia trachomatis) (Devant une ulcration gnitale voquer aussi lherps vnrien) Incidence (1996) : Gonococcies = 62 millions de personnes travers le monde, Infections chlamydiennes = 89 millions de personnes, Syphilis = 12 millions de personnes. Danger de laugmentation continue du nombre de MST = lien entre MST et SIDA (les lsions et les inflammations gnitales causes par les MST augmentent le risque de transmission sexuelle du VIH). Neisseria gonorrhoeae : environ 20 % des gonocoques sont producteurs de pnicillinase en rgion parisienne.

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Agents pathognes attendus (1/2)Syndrme infectieux Urtrite Agent pathogne Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis Ureaplasma urealyticum Mycoplasma genitalium Trichomonas vaginalis Gardnerella vaginalis (rarement) Candida albicans Treponema pallidum Haemophilus ducreyi Calymmatobacterium granulomatis ou donovani Virus herpes simplex

Ulcrations gnitales

Flore non pathogne pouvant tre isole de lurtre antrieur : Staphylococcus epidermidis et Lactobacillus (chez + de 80 % des individus), moindre frquence des corynbactries, des streptocoques et des entrobactries, Bacterodes de la flore de Veillon, Ureaplasma (40 50 % des adultes en sont porteurs).

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Agents pathognes attendus (2/2)Principaux agents pathognes pouvant tre isols dans le sperme

MST

Contexte de FIV

Neisseria gonorrhoeae Staphylocoques, Streptocoques Chlamydia trachomatis Entrobactries Mycoplasma Pseudomonas spp Ureaplasma Mycobactries

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Prlvements (1/1)Prlvements raliss de prfrence le matin, avant toute toilette et avant la premire miction.(surtout si les seuls symptmes sont la goutte matinale). Prlvements dans les urtrites Si srosits purulentes au mat : directement sur lame. prlvement endo urtral lecouvillon en cas dcoulement absent ou minime (4 cm lintrieur de lurtre), pour la recherche de Chlamydia et de Mycoplasma, faire un grattage endo-urtral la curette ophtalmique mousse, au Bacto Pick, lcouvillon en dacron ou en alginate (cf annexe), recueil du 1er jet des urines (en particulier pour la recherche de Chlamydia par technique de biologie molculaire. Prlvement devant une ulcration ano-gnitale faire sourdre la srosit et la recueillir au niveau de la base ou des bords de lulcre avec un vaccinostyle, une se, une curette ou un couvillon, possibilit de raliser des biopsies ou une ponction du bubon satellite. Prlvement dans les pididymites et les prostatites couvillonnage urtral, prlvement de sperme (cf + bas), recueil du 1er jet urinaire, recueil des scrtions prostatiques aprs ventuel massage prostatique (prostatite). Prlvement dans les orchites Prlvement dabcs la seringue (chirurgie) (meilleur prlvement) Sperme (on peut y retrouver lagent responsable) recueilli aprs une miction suivie dune dsinfection soigne du gland laide dun antiseptique et rinage.

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Prlvements (2/2)NB : Un prlvement anal ou ventuellement de gorge pourra tre utile au diagnostic dans le cas de suspicion de MST (si lsions et signes). Les prlvements sils ne sont pas effectus au sein du laboratoire doivent tre achemins le plus rapidement possible. Pour une recherche par PCR de Chlamydia, un tube bouch pour le transport est ncessaire. QUELQUES PARTICULARITES (orientation clinique) Neisseria gonorrhoea A lcouvillon ou goutte de srosit Ractivation si le patient boit de la bire la veille (srosits plus abondantes) Le matin avant toute miction Treponema pallidum Retrouv dans les lsions de syphilis primaire et secondaire (chancres, ganglions satellites, plaques muqueuses) Avant toute rosion ou ulcration gnitale suspecte, avant prise dantibiotiques ou application dantiseptiques Chlamydia trachomatis, Mycoplasma, Ureaplasma Le grattage doit tre assez important pour rcuprer des cellules sinon le diagnostic direct nest pas possible

Les prlvements doivent permettre lexamen direct et lensemencement.

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Dmarche globale

Examen direct (Gram : essentiellement Neisseria gonorrhoeae) Culture Glose au sang cuit sans mlange inhibiteur pour rechercher Neisseria gonorrhoeae) sous 10 % de CO2 Glose au sang cuit (base Columbia) + /- ANC pour les ventuels cocci Gram positif Glose lactose pour les ventuels Bacilles Gram ngatif Autres cultures sur prescription ( cultures cellulaires pour recherche de Chlamydia, recherche spcifique de Mycoplasma hominis et Ureaplasma urealyticum, culture sur milieu spcifique si suspicion dpididymite ou prostatite Mycobactries)

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Quelques critres et techniques disolement et didentificationNeisseria gonorrhoeaeExamen direct : dipolcoques Gram intra et extra cellulaires (permet le diagnostic dans 90 % des cas) Ensemencement et culture : urtre sur milieu non slectif

Chlamydia trachomatis

Oxydase +, Catalase + Examen direct : coloration de Giemsa ou liode Immunofluorescence directe : observation de corps lmentaires. Isolement sur culture cellulaire :sur cellules Mac Coy ou Hela. PCR Examen direct : bacilles Gram peu visibles, disposition en courtes ou longues chanes, extra ou intra cellulaires. Ensemencement et culture : isolement difficile, ncessite le facteur X. Glose au sang de lapin 30 %, incubation 33-35C, atmosphre humide, 5 10 % de CO2.

Haemophilus ducreyi

Treponema pallidum

Oxydase +, Catalase + Uniquement par examen microscopique Examen au microscope fond noir : examen immdiatement entre lame et lamelle (rarement fait en pratique srologie) Examen aprs coloration (dlaiss) Immunofluorescence directe (non faite en pratique)

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Cas particulier : examen cytobactriologique du spermeContexte Suspicion dinfection gnitale haute (orchi-pididymite,prostatite) Avant une FIV ou PMA

Prlvement Abstinence pas ncessaire pour lexamen purement bactriologique Ncessit deffectuer une miction puis une dsinfection soigneuse du gland Flacon strile Transport le plus rapidement possible et 37 degrs

ED et culture(idem autres prlvements)

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Comparaison de diffrents laboratoires

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Croix-Rousse- Gram : prsence de germes. - Bleu de mthylne : prsence de leucocytes. - Recherche spcifique sur demande : T.pallidum, microscope fond noir. - GS (arobiose, 24h, 37C). - GS + ANC (arobiose, 24h, 37C). - GC + PVX (10% CO2, 24 48h, 37C). - Bouillon Schadler vit K. - Recherches spcifiques sur demande.

CHLS- Etat frais (L/l) : recherche Trichomonas vaginalis. - Gram : levures, cellules, germes. - Recherches spcifiques : T.pallidum, Mycoplasmes - GS (arobiose, 24h, 37C). - VCAT (CO2, 37C). - Mac Conkey (aer, 35C). - si levures lED ou demande spcifique : Candida ID (30C)

CardioEtat frais (L/l) : recherche Trichomonas vaginalis. Microscope fond noir : T. pallidum. - Gram : numration semi-quantitative des cellules et flore bactrienne. - GS (arobiose, 24h, 37C). - GS + ANC (arobiose, 24h, 37C). - GC + PVX (10% CO2, 24 48h, 37C). - GC + PVX + VCAT (10% CO2, 24 48h, 37C). - Mc Conkey (arobiose, 37C, 24h). - G Gardnerella (5 % CO2, 37C, 48h). - Sabouraud (arobiose, 30C, 24h 7j si levures ED ou Gram) Prlvements spcialiss ponction dabcs : Bouillon Brain heart (a, 37C, 24 48h) Milieu Schaedler (ana, 37C, 24h, 48h, jusqu 14 j).

HEH- Gram : numration semi-quantitative flore bactrienne. - Bleu de mthylne : numration semiquantitative des cellules.

St Etienne- Etat frais (L/l) : T. vaginalis + poly et cellules pithliales. - Gram : prsence de germes.

Examen direct

- GC + PVX (CO 2, 37C, 24 48h) - G Columbia ANC - Sabouraud Liquide prostatique : Rajout dun milieu Schaedler (jarre ana, dure 48h 7j).

- GC + PVX (CO 2, 37C, 48h). - GC + PVX + VCAT (CO2, 37C, 48h). - Sabouraud (28C, 48h).

Culture

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Croix-RousseJ+1 : Regarder tous les milieux, ED sur bouillon et repiquer si ncessaire. Si flore commensale : tests rapides et rendu des rsultats.

CHLSIdentification : prsence de Streptocoques bta hmolitiques, de bacilles Gram ngatif et de staph aureus en culture pure.

CardioJ +1 : - GC = aspect des col + oxydase + catalase (gono, Haemophilus). - GS = aspect des col, Gram, groupage des strepto, identification S. aureus. - Sabouraud = latex pour identification, envoi fac. - G Gardnerella = aspect des col, catalase et oxydase (ngatives pour Garderella) J+2: Idem J1. Cultures neg 48h rendues striles.

HEHIdentification : Neisseria gonorrhoeae Gardnerella vaginalis Levures Haemophilus ducreyi Strepto hmolytique S. aureus Entrobactries SCN en culture pure

St Etienne

Interprtation

Identification + ATB + recherche de btaJ+2 : lactamase : Neisseria Si culture ngative, rendre gonorrhoeae. strile. Autres germes : absence Identification et de flore pathogne antibiogramme pour tout avre. germe en culture pure. Cas particulier de la Identification et recherche de antibiogramme + envoi de mycoplasmes : (IST) souches au centre de bouillon de culture slectif rfrence : Neisseria associ une galerie de gonorrhoeae. 16 cupules permettant lidentification, le titre et un test de sensibilit 6 antibiotiques, lecture J3.

J+1: - Gram sur GC + PVX. - reprise sur GO des col de Staphylocoque et Staphytest (identification S. aureus). - reprise sur GO des col de BGN. - Gram sur GC + PVX + VCAT pour recherche de gonocoque + galerie Antibiogramme : A la demande du identification si Neisseria. Si strile remise ltuve biologiste. 5j (examen tous les jours). - Sabouraud repris sur Liquide prostatique : Identification et GO si levures + test de antibiogramme pour filamentation. toutes les bactries. Identification, antibiogramIdentification : me, antifongigramme sur C. albicans, S. aureus, indications du biologiste. SCN,Streptococcus spp Enterococcus spp, G. J+2: vaginalis, N. gonorrhoeae, Lecture nouveau de Chlamydia, H. ducreyi, T. tous les milieux. pallidum. Si positivit = idem J1. Autres bactries rares : anarobies, J+5: Corynebacterium spp, BK. Lecture nouveau GC + Antibiogramme : la PVX + VCAT. demande du biologiste, test cfinase pour gono.

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Croix -Rousse - Gram : prsence de germes. - Bleu de mthylne : prsence de leucocytes. - Recherche spcifique sur demande. - GS (arobiose, 24h, 37C). - GS + ANC (arobiose, 24h, 37C). - Bouillon Schadler vit K. - Recherches spcifiques sur demande.

CHLS - Gram : levures, germes. - Recherche spcifique sur demande.

HEH - Gram : prsence de germes. - Recherche spcifique sur demande.

Examen direct

- Ensemencement en quadrant (oese de 10 L) sur CPS et GC (patient dHG).

- Ensemencement (oese de 10L dans 500 L de srum physiologique) sur GC et GS.

Analyse bactriologique du sperme

Culture

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Croix-Rousse J+1 : Regarder tous les milieux, ED sur bouillon et repiquer si ncessaire. Si flore commensale : tests rapides et rendu des rsultats. Interprtation

CHLS

HEH Lecture J1 et J2 : Numration Seuil = 104 : ID + ATB pour toute bactrie dpassant ce sueil considres comme pathognes. Recherche de mycoplasmes = idem prlvements urtraux. Analyse bactriologique du sperme

Lecture J1 et J2 : - strile, - numration < 103 : rien de plus, - numration = 103 monomicrobien : rpondre Staph. NA, corynbactries, Streptococcus J+2 : viridans. Autres = Si culture ngative, identification. rendre culture strile. Polymicrobien : signaler uniquement Identification + ATB S.aureus et pour tout germe en S.agalactiae, culture pure. - numration > 103 : rpondre Staph. NA, ID + ATB + envoi de corynbactries, souches au centre de Streptococcus rfrence : Neisseria viridans. ID + ATB gonorrhoeae. pour les autres Recherche de mycoplasmes = idem prlvements urtraux.

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Recherche de Mycoplasmes Laboratoire Croze - Mazellier

Milieu glos A7 et Galerie Mycoplasma (et bouillon ure)

Prsence de colonies (24h 48h 72h) et galerie positive (24h 48h)

Prsence : identification et antibiogramme

Absence de mycoplasme

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Fiche technique danalyse des prlvements gnitaux masculins (sauf sperme)

Laboratoire Croze-Mazellier

Rception du prlvement : couvillonnage simple, 1er jet durines, curette (prlvement endourtral, grattage dulcration), ponction dabcs. Examen direct Culture

Lame/lamelle = Trichomonas vaginalis Bleu de mthylne = cytologie Coloration de Gram = germes

numration semi-quantitative des cellules et de la flore bactrienne

Demandes spcifiques

En absence de demande particulire, ensemencement : Glose au sang (arobiose 37C) Glose chocolat +PVX+VCAT (tuve CO2 ) Glose Columbia ANC (arobiose 37C) Glose BCP (arobiose 37C) Glose Sabouraud (selon ED) + Candida ID (arobiose)

Ponction dabcs, on ajoute :Recherche de mycoplasmes = cf spermoculture, Recherche Chlamydia = envoi extrieur, Recherche Treponema pallidum = envoi extrieur Bouillon Brain-Heart (arobiose) Milieu Schaedler (anarobiose) conserv jusqu J14.

Lecture des cultures J1 et J2

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SUITE PROCEDURE

Lecture des cultures 24 h

Absence de pousse bactrienne

Lecture des cultures 48 h

Prsence dune pousse bactrienneGlose Columbia ANC Glose BCP Sabouraud Candida ID

Glose chocolat VCAT

Colonies translucides, gristres, Strepto hmolytique catalase +, oxydase + (infection haute sinon contamination), entrocoque groupage gonocoque Staphylocoque (agglutination latex, coagulase).

Bacille Gram ngatif en culture pure

ED ID Candida albicans ou Candida non albicans

Absence de flore pathogne

Gram ID + ATB Rechehche de -lactamase

ID + ATB NB : pour SCN seulement si culture pure

ID + ATB

Envoi extrieur pour identification complmentaire et antifongigramme

Rponse - Fin

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GBEA spermoculture laboratoire Croze MazellierED puis Ensemencement en quadrant (oese de 10 L) sur G choc CO2 et CPS Et ensemencement sur glose sang Recherches spcifiques ventuelles (Chlamydia, mycoplasmes, mycobactries)

Absence Prsence de colonies(24h et 48h) strile

INF 10 UFC

10 50 UFC monomicrobien plurimicrobien

SUP 50 UFC

REPONSESNUMERATION 10 exp 3 UFC/mL NUMERATION 10 exp 3 UFC/mL ID sans antibiogramme NUMERATION 10 exp 3 UFC/mL NUMERATION Num ID + ATB

Quelle que soit la numration, ID + ATB pour Neisseria gonorrhoaea + recherche de bta lactamase.

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BIBLIOGRAPHIE1. Le Remic. 1998. 19-22, 25-26. 2. Freney J., Renaud F., Hansen W., Bollet C. 2000. Prcis de bactriologie clinique : 915-941, 1473-1482, 1499-1519, 1663-1674. 3. Fiche OMS. Aide-mmoire 110. Mars 1996. Les maladies sexuellement transmissibles (MST). 4. Flandrois J-P. Bactriologie mdicale : 166-169, 245-251, 252-256, 257-261. 5. Nauciel C. Bactriologie mdicale : 103-106, 169, 211-214, 226-227, 230. 6. Touraine R., Revuz J. Dermatologie clinique et vnrologie : 355-373. 7. Belach S. Le livre de linterne dermatologie et maladies sexuellement transmissibles : 123-129, 131-135, 347-359.

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