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Disponible en ligne sur www.sciencedirect.com Annales d’Endocrinologie 74 (2013) 278–280 SFE Paris 2013 Surrénales CO-61 Contrôle post-transcriptionnel de l’expression rénale du récepteur minéralocorticoïde par l’hypertonicité : conséquences physiopathologiques sur la balance hydro-éléctrolytique I. Lema a,, S. Viengchareun a , V. Kéo a , L. Amazit b , J. Nevoux a , L. Martinerie a , A. Blanchard c , N. Cherradi d , M. Lombès a a Inserm U693, Le Kremlin Bicêtre, France b Institut biomédical de Bicêtre (IB2), Le Kremlin Bicêtre, France c Inserm, Centre d’Investigations Cliniques 9201, Paris, France d Inserm U878, Grenoble, France Auteur correspondant. La balance hydrosodée et la pression artérielle sont régulées par l’aldostérone et le récepteur minéralocorticoïde (MR), un facteur de transcription dont l’expression rénale varie au cours du développement et est altérée dans certaines néphropathies. Nous montrons que l’hypertonicité stimule (× 4) l’expression de Tis11b, une protéine de liaison à l’ARN et réduit l’expression du MR (messager et protéine) dans les cellules rénales KC3AC1. À l’inverse, la contre-régulation de Tis11b par ARN interférents restaure l’expression du MR, confirmant la corrélation négative entre Tis11b et MR. Nous démontrons que Tis11b module la stabilité/dégradation du transcrit MR en se fixant aux motifs riches en adénosine/uridine (ARE), identifiés dans la région 3 -non traduite (3 -UTR) du transcrit MR. L’analyse de mutants de délétion du 3 -UTR du transcrit MR dans des vec- teurs rapporteurs pMIR-Luc révèle le rôle fonctionnel clé des éléments ARE proximaux dans la déstabilisation des transcrits par Tis11b. Les expériences de RNA-ChiP confirment l’interaction physique de Tis11b avec ces motifs ARE du 3 -UTR du MR. Nous montrons également que la baisse d’expression du MR induite par l’hypertonicité via Tis11b a des conséquences fonctionnelles majeures, en réduisant l’induction aldostérone-dépendante de gènes cibles dans les cellules rénales. Ces mécanismes de régulation post-transcriptionnelle sont également mis en jeu in vivo puisque les conditions mimant l’hypertonicité chez la souris (restriction hydrique, régime hypersalé, diurétiques) stimulent l’expression rénale de Tis11b et diminuent celle du MR. L’altération de ces mécanismes inédits, régulant spécifiquement l’action rénale du MR pourrait participer à la pathogenèse de maladies rénales, de l’hypertension ou des résistances minéralocorticoïdeS. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.123 Résumés présentés lors du 30 e Congrès de la Société franc ¸aise d’endocrinologie Paris 2013. CO-62 L’autocrine de la cellule cortico-surrénalienne est régulée par le récepteur glucocorticoïde L. Asser a,, S. Hescot a , J. Bouligand b , B. Delemer c , S. Trabado b , M. Lombès a a Faculté de médecine Paris Sud, INSERM unité 693, Le Kremlin Bicêtre, France b Faculté de médecine Paris Sud, INSERM unité 693, service de génétique moléculaire, pharmacogénétique, hormonologie, CHU de Bicêtre, Le Kremlin Bicêtre, France c Service d’endocrinologie et métabolisme, CHU de Reims, hôpital Robert-Debré, Reims, France Auteur correspondant. Si la régulation endocrine de la stéroïdogenèse surrénalienne par l’ACTH est bien connue, l’hyperplasie surrénalienne retrouvée chez les patients porteurs de mutations du récepteur glucocorticoïde (GR) ou chez les souris hétérozy- gotes invalidées pour GR nous interroge sur le rôle de la signalisation autocrine glucocorticoïde et sur l’implication du GR dans la fonctionnalité de la cellule cortico-surrénalienne. Les cellules humaines cortico-surrénaliennes H295R sécrétantes sont incu- bées avec un agoniste (déxamethasone) ou un antagoniste (RU486) du GR. L’expression du GR est contre-régulée par interférence ARN (SiRNA). L’expression génique est analysée par PCR quantitative et Western Blot, la sécrétion stéroïdienne mesurée par RIA. Nous montrons que la contre-expression du GR par SiRNA (baisse de 70 % en 48 heures) ou l’inactivation pharmacologique du GR par RU486, inhibent dras- tiquement (> 70 %) l’expression des gènes stéroïdogéniques (StAR, CYP11A1, CYP11B1), associée à une diminution de la sécrétion de 17-OH-progestérone et de cortisol. À l’opposé, 100 nM de dexaméthasone augmente d’un facteur 2 les transcrits de StAR, CYP11A1 et CYP11B1 et stimule de 1,5 fois la sécrétion stéroïdienne. Nous démontrons aussi que l’expression du récepteur de l’ACTH (MC2R) est corrélée à l’activité du GR : diminuée de 50 % par le SiRNA GR ou le RU486 et augmentée de 2,7 fois sous dexaméthasone. Nos résultats démontrent l’existence d’une relation fonctionnelle directe entre signalisation glucocorticoïde et stéroïdogenèse surrénalienne. L’implication directe de GR sur le potentiel sécrétoire surrénalien via l’expression modu- lée de MC2R suggère l’existence d’une boucle de rétrocontrôle autocrine de la signalisation glucocorticoïde sur la cellule cortico-surrénalienne. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.124 CO-63 Comparaison fonctionnelle de mutants PRKAR1A responsables de complexe de Carney et d’acrodysostose Y. Rhayem a,, C. Le-Stunff b , A. Linglart c , J. Bertherat a , C. Silve b , E. Clauser a a Inserm, université Paris Descartes, AP–HP, Paris, France 0003-4266/$ – see front matter

L’autocrine de la cellule cortico-surrénalienne est régulée par le récepteur glucocorticoïde

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Page 1: L’autocrine de la cellule cortico-surrénalienne est régulée par le récepteur glucocorticoïde

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www.sciencedirect.com

Annales d’Endocrinologie 74 (2013) 278–280

SFE Paris 2013

Surrénales�

CO-61

Contrôle post-transcriptionnel del’expression rénale du récepteurminéralocorticoïde par l’hypertonicité :conséquences physiopathologiques sur labalance hydro-éléctrolytiqueI. Lema a,∗, S. Viengchareun a, V. Kéo a, L. Amazit b,J. Nevoux a, L. Martinerie a, A. Blanchard c, N. Cherradi d,M. Lombès a

a Inserm U693, Le Kremlin Bicêtre, Franceb Institut biomédical de Bicêtre (IB2), Le Kremlin Bicêtre, Francec Inserm, Centre d’Investigations Cliniques 9201, Paris, Franced Inserm U878, Grenoble, France∗Auteur correspondant.

La balance hydrosodée et la pression artérielle sont régulées par l’aldostéroneet le récepteur minéralocorticoïde (MR), un facteur de transcription dontl’expression rénale varie au cours du développement et est altérée dans certainesnéphropathies.Nous montrons que l’hypertonicité stimule (× 4) l’expression de Tis11b, uneprotéine de liaison à l’ARN et réduit l’expression du MR (messager et protéine)dans les cellules rénales KC3AC1. À l’inverse, la contre-régulation de Tis11bpar ARN interférents restaure l’expression du MR, confirmant la corrélationnégative entre Tis11b et MR.Nous démontrons que Tis11b module la stabilité/dégradation du transcrit MRen se fixant aux motifs riches en adénosine/uridine (ARE), identifiés dans larégion 3′-non traduite (3′-UTR) du transcrit MR.L’analyse de mutants de délétion du 3′-UTR du transcrit MR dans des vec-teurs rapporteurs pMIR-Luc révèle le rôle fonctionnel clé des éléments AREproximaux dans la déstabilisation des transcrits par Tis11b. Les expériences deRNA-ChiP confirment l’interaction physique de Tis11b avec ces motifs AREdu 3′-UTR du MR. Nous montrons également que la baisse d’expression duMR induite par l’hypertonicité via Tis11b a des conséquences fonctionnellesmajeures, en réduisant l’induction aldostérone-dépendante de gènes cibles dansles cellules rénales.Ces mécanismes de régulation post-transcriptionnelle sont également mis en jeuin vivo puisque les conditions mimant l’hypertonicité chez la souris (restrictionhydrique, régime hypersalé, diurétiques) stimulent l’expression rénale de Tis11bet diminuent celle du MR.L’altération de ces mécanismes inédits, régulant spécifiquement l’action rénaledu MR pourrait participer à la pathogenèse de maladies rénales, de l’hypertensionou des résistances minéralocorticoïdeS.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.123

� Résumés présentés lors du 30e Congrès de la Société francaised’endocrinologie Paris 2013.

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L’autocrine de la cellulecortico-surrénalienne est régulée par lerécepteur glucocorticoïdeL. Asser a,∗, S. Hescot a, J. Bouligand b, B. Delemer c,S. Trabado b, M. Lombès a

a Faculté de médecine Paris Sud, INSERM unité 693, Le Kremlin Bicêtre,Franceb Faculté de médecine Paris Sud, INSERM unité 693, service de génétiquemoléculaire, pharmacogénétique, hormonologie, CHU de Bicêtre, Le KremlinBicêtre, Francec Service d’endocrinologie et métabolisme, CHU de Reims, hôpitalRobert-Debré, Reims, France∗Auteur correspondant.

Si la régulation endocrine de la stéroïdogenèse surrénalienne par l’ACTH estbien connue, l’hyperplasie surrénalienne retrouvée chez les patients porteursde mutations du récepteur glucocorticoïde (GR) ou chez les souris hétérozy-gotes invalidées pour GR nous interroge sur le rôle de la signalisation autocrineglucocorticoïde et sur l’implication du GR dans la fonctionnalité de la cellulecortico-surrénalienne.Les cellules humaines cortico-surrénaliennes H295R sécrétantes sont incu-bées avec un agoniste (déxamethasone) ou un antagoniste (RU486) duGR. L’expression du GR est contre-régulée par interférence ARN (SiRNA).L’expression génique est analysée par PCR quantitative et Western Blot, lasécrétion stéroïdienne mesurée par RIA.Nous montrons que la contre-expression du GR par SiRNA (baisse de 70 % en48 heures) ou l’inactivation pharmacologique du GR par RU486, inhibent dras-tiquement (> 70 %) l’expression des gènes stéroïdogéniques (StAR, CYP11A1,CYP11B1), associée à une diminution de la sécrétion de 17-OH-progestérone etde cortisol. À l’opposé, 100 nM de dexaméthasone augmente d’un facteur 2 lestranscrits de StAR, CYP11A1 et CYP11B1 et stimule de 1,5 fois la sécrétionstéroïdienne. Nous démontrons aussi que l’expression du récepteur de l’ACTH(MC2R) est corrélée à l’activité du GR : diminuée de 50 % par le SiRNA GR oule RU486 et augmentée de 2,7 fois sous dexaméthasone.Nos résultats démontrent l’existence d’une relation fonctionnelle directe entresignalisation glucocorticoïde et stéroïdogenèse surrénalienne. L’implicationdirecte de GR sur le potentiel sécrétoire surrénalien via l’expression modu-lée de MC2R suggère l’existence d’une boucle de rétrocontrôle autocrine de lasignalisation glucocorticoïde sur la cellule cortico-surrénalienne.

http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.124

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Comparaison fonctionnelle de mutantsPRKAR1A responsables de complexe deCarney et d’acrodysostoseY. Rhayem a,∗, C. Le-Stunff b, A. Linglart c, J. Bertherat a,C. Silve b, E. Clauser a

a Inserm, université Paris Descartes, AP–HP, Paris, France

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