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Le Diagnostique Les Bacilles Gram Positifs

Le Diagnostique Les Bacilles Gram Positifs. Classification Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte

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Le Diagnostique

Les Bacilles Gram Positifs

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Classification

Bacilles Gram Positifs

Sporulants

Aérobie et aérobie facultatif Bacillus

Anaérobie stricte Clostridium

Non-sporulants Aérobie Listeria

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Caractéristiques des Bacilles Sporulants

• Tous sont de gros bacilles Gram positifs• Font des endospores • Principalement retrouvés dans le sol, les eaux

et la poussière• Exigences nutrionelles très diverses

– Utilisent des sources de carbones simples et complexes

– Leurs spores leurs permettent de résister à des conditions extrêmes

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Les Bacilles d’Importance Médicale

• Bacillus– Majoritairement inofensifs– Quelques espèces opportunistes

• Bacillus cereus & Bacillus subtilis– Empoisonement alimentaire

– Une espèce pathogène• Bacillus anthracis

– Anthrax

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Les Bacilles d’Importance Médicale

• Clostridium– Plusieurs espèces pathogènes

• Clostridium perfringens– Gangrène gazeuse

• Clostridium tetani– Tétanos

• Clostridium botulinum– Botulisme

• Clostridium difficile– Diarrhée

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Identification: Tests Métaboliques

• Bouillon de phénol rouge– Métabolisme de sources de carbones simples– Source de carbone:

• Peptone (protéine acides aminés)• Sucre désiré ajouté

– Indicateur de pH• Phénol rouge

– Jaune pH acide– Orange pH neutre– Rouge pH alcalin

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Bouillons de Phénols Rouges

• Utilisation de Carbone:– Sucre

• Réaction acide (Jaune) • ou neutre (Original)

– Protéine• Réaction alcaline

(Rouge)

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Fermentation du Glucose

• Accumulation d’acide:– Glucose pyruvate acide lactique et/ou acétique + CO2

• Accumulation de produits neutres– Glucose pyruvate acétoine 2 butanediol + CO2

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Test de Méthyl Rouge

• Test pour l’accumulation d’acide– Sources de carbones: Glucose et protéines– Indicateur -méthyl rouge; Ajouté après

• MR +: rouge (pH < 5.2)• MR - : jaune (pH > 5.2)

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Test de Voges-Proskauer

VP + = rougeVP - = jaune

Résultats habituelle de MR/VP: MR+/VP-; MR-/VP+ MR-/VP-

Réactifs VP:butanediol + -naphthol + KOH + O2 acétoine

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Utilisation d’Urée

• Carbone:– Urée

• Enzyme– Uréase

• Indicateur de pH– Phénol rouge

C O + 2 H2O CO2 + H2O + 2 NH3 (NH4)2CO3

H2N

H2N

uréeammoniumcarbonate(alcalin)Acides aminés

Négatif Positif

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Utilisation du Carbone Complexe

• Trop gros pour le transport à l’intérieur• Nécessite enzymes exocellulaires pour la

dégradation externe en petites unités– Polysaccharides

• Amidon (amylase)

– Lipides (lipase)• Tributyrine

– Protéines (protéase)• Caséine (caséinase)

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Amylase

Avant l’ajout d’iode Après l’ajout d’iode

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Caséinase

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Lipase

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La Respiration AérobieLa Chaîne de Transport d’e-

3 H2O

H+

2 H+

2 H+

3 H+ + 3 OH-

2 H+

H2O

3 H+ + 1/2 O2

2 e-

2 e-

2 e-

Fp

Fe-S

2 e-

Q

Cyt b

Cyt o

NADH + H+

FADH2

intérieur

extérieur

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Test d’Oxydase

• Cytochrome oxydase catalyse la réduction du capteur final d’e-, l’oxygène

• Un donneur artificiel d’e-, la phenylenediamine, est utilisé pour réduire le cytochrome oxydase

• Si l’enzyme est présente, le réactif incolore (état réduit) deviendra bleu (état oxydé)

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Catalase

Ajout de 3% H2O2 à la croissance bactérienne

2H2O2 2H2O + O2 catalase

Produit de la respirationdommageable pour l’ADN

Métabolisme d’aérobie requière la catalase

Bulles(O2)

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Respiration Anaérobie

2 H+

2 H+

3 H+ + 3 OH -3 H2O

2 H+

NO2- + H2O (N = +3) nitrite

NO3- + 2 H+ (N = +5) nitrate

2 e-

2 e-

2 e-

Fp

Fe-S

2 e-

Q

Cyt b

NADH + H+

FADH2

Nitrate réductase

Intérieur

Extérieur

Capteur final d’e-

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Nitrate Réductase

NO3- + 2 H+ + 2 e- H2O + NO2

- NO, N2O, NH2OH, NH3, N2

nitrate nitrite

Étape 1: Test pour nitriteNO2

- + acide sulfanilique et alpha naphthylamine HNO2

Nitrate n’est pas réduit

Absence de Nitrite Jaune

Nitrate est réduitProduction de Nitrite

Rouge

Nitrate est réduit au nitrite Nitrite est réduit

Absence de Nitrite Jaune

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Nitrate Réductase (suite)

NO3- + 2 H+ + 2 e- H2O + NO2

- NO, N2O, NH2OH, NH3, N2

nitrate nitrite

Étape 2: Test pour présence du nitrateNO3

- + Zn (s) NO2-

Nitrate est présentRéduction au Nitrite

RougeNitrate est absentNitrite a été réduit

Jaune

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Le Diagnostique

Les Cocci Gram Positifs

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Classification

Cocci Gram Positifs

Streptococcaceae

Catalase -

Aérobie & anaérobie facultatif

Streptococcus

Micrococcaceae

Catalase +Aérobie

Micrococcus

Staphylococcus

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Caractéristiques des Cocci Gram Positifs

• Tous sont non sporulants• Principalement retrouvés parmi la flore

naturelle des hommes et des animaux• Exigences nutrionelles fastidieuses

– Utilisent des sources de carbones simples

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Aggrégation Cellulaire des Cocci Gram Positifs

Micrococcus & Streptococcus

Streptococcus

Micrococcus

Staphylococcus

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Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale

• Micrococcaceae– Staphylococcus aureus

• Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et choc toxique

– Staphylococcus epidermidis• Cause des infections opportunistes

– Staphylococcus saprophyticus• Cause majeure de cystites chez les femmes

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Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale

• Streptococcaceae– Streptococcus pyogenes– Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse

de chair– Streptococcus agalactiae

• Infections génitales– Streptococcus mutans

• Endocardites– Streptococcus pneumonia

• Otite, meningite et pneumonie– Enterococcus spp.

• Infections opportunistes

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Identification: Tests Métaboliques

• Microccocus Vs Staphylococcus• Test d’oxydase

– Micrococci sont +– Staphylococci sont –

• Bacitracine– Micrococci sont sensibles– Staphylococci sont résistants

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Identification: Tests Métaboliques

• Différentitation des espèces de Staphylococcus• Test de coagulase

– Les staphylococci coagulase positifs» S. aureus

– Staphylococci coagulase négatifs» Tous les autres Staphylococci

• Fermentation du mannitol– S. aureus et quelques S. saprophyticus sont positifs– S. epidermidis est negatif

S. aureusS. epidermidis

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Identification: Tests Métaboliques

• Différentiation des espèces de Streptoccocus• Regroupement sérologique de Lancefield

– Fondé sur le type d’hydrate de carbone dans leur paroi» 8 groupes (A-H et K-U)

» Groupe A: β-hémolytique - Streptococcus pyogenes» Groupe B: β-hémolytique - S. agalactiae» Groupe C: α ou γ hémolytique- S. viridans» Groupe D: γ –hémolytique – Enterococcus» Pas classifié d’après le regroupement de Lancfield

» α hémolytique- S. pneumoniae et S. mutans

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Hémolyse Sanguine

• Gélose de sang:– Discrimination d’après patrons d’hémolyses

• Hémolyse alpha - Hémolyse incomplète• Hémolyse beta - Hémolyse complète• Hémolyse gamma - Aucune hémolyse

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Identification: Tests Métaboliques

• Identification de Streptoccocus pneumoniae– Solubilisation par la bile

• Strep. pneumoniae est positif• Autres Strep. sont négatifs

• Identification d’Enterococcus– Test de bile-esculin

• Enterococcus est positif• Autres Strep. sont négatifs