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Microbiologie. L’Étude des Microorganismes. D éfinition d’un Microorganisme. Dérivé du grec: Mikros , «petit» et Organismos , «organisme» Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) - PowerPoint PPT Presentation
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Définition d’un Microorganisme• Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» – Organisme microscopique qui comprend soit une
seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées)
– Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires
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Buts
• Croissance sous des conditions contrôlées• Maintien• Isolation de cultures pures• Tests métaboliques
Types
• Liquides (bouillons)– Permets la culture en suspension– Distribution uniforme des éléments nutritifs,
environnementaux et autres– Permets la croissance de grands volumes
• Milieux Solides– Mêmes que milieux liquides + agent de
solidification• L’agar : Polysaccharide dérivé d’une algue
Croissance sur Gélose
• Croissance sur surface solide• Croissance isolée• Permets l’isolation de
colonies simples• Permets l’isolation de cultures
pures
Colonie simple
Milieux Solides (suite)
• Pente– Croissance en surface et en profondeur
– Différentes disponibilités d’oxygène
– Entreposage à long terme
• Tube profond– Milieu semi-solide
– Entreposage à long terme
– Faible disponibilité d’oxygène
Colorations Simples
• Coloration positive– Coloration du spécimen– Coloration indépendante de l’espèce
• Colorations négatives– Coloration de l’environnement de fond– Coloration indépendante de l’espèce
Méthodes
• Coloration simple: – Un seul agent de coloration– Permet de déterminer la taille, la forme, et
l’arrangement des cellules
Les Formes Cellulaires
• Coccus: – Sphères – Division sur 1,2 ou 3 plans– Nombre de plans de division donne différents
arrangements– Arrangements typiques de différents genres
bactériens
Les Cocci (Coccus)
Diplococcus
Streptococcus(4-20)
Tétrade
Staphylococcus
ArrangementsPlans de division
Indice: si le nom du genre de bactéria finisse par coccus, la forme de la bactérie est cocci
Les Formes Cellulaires (suite)
• Bacilles:– Bâtonnets
– Division sur 1 plan seulement
– Arrangements typiques de différents genres bactériens
Les Bacilles
Diplobacille
Streptobacille
ArrangementsPlans de division
Indice: si le nom du genre de bactérie finisse par bacille, la forme de la bactérie est bacille
Si elle ne finisse pas par cocci, c’est probablement une bacille.
Quantifier les Microorganismes
• Mesure de turbidité: densité optique• Comptes viables• Nombre le plus probable• Comptes directs
Mesure de la Turbidité
• Mesure la quantité de lumière qui peut traverser un échantillon
• Le moins de lumière qui traverse l’échantillon le plus dense est la population
• Mesure la densité optique ou le pourcentage de transmission
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Mesure de la Turbidité
• Spectrophotomètre (A600): – Mesure de la Densité Optique
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Lumière
600nm
Détecteur….lecture
Lecture différente
Comptes Viables
• Dilutions en séries de l’échantillon• Étalement des dilutions sur milieu approprié• Chaque colonie simple est originaire d’une unité
formatrice de colonie (UFC)• Le nombre de colonies équivaut à une approximation
du nombre de bactéries vivantes dans l’échantillon
63 UFC/0.1 ml de 10-5
630 UFC/1.0 ml de 10-5
630 UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans l’échantillon original
Si il y avait 100 ml d’échantillon bactérien?
• Avantages::– Dénombre les microorganismes viables– Peu distinguer différents microorganismes
• Limites:– Pas de milieu universel
• Ne peut pas demander combien de bactérie dans un lac• Peut demander combien d’E. coli dans dans un lac
– Nécessite la croissance du microorganisme
– UFC une bactérie• Ex. Un UFC de Streptococcus un de E.coli=? =?