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P1-18 Protéine Tau, bien plus qu’une protéine associée aux microtubules

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Page 1: P1-18 Protéine Tau, bien plus qu’une protéine associée aux microtubules

Revue NeuRologique 165 (2009) 53 - 64 61

d’inhibiteurs de protéases (Complete Mini Roche) a été ajouté

aux échantillons de plasma. La détection de l’Aβ40 et 42 a été

effectuée avec des kits ELISA commerciaux (BioSource).

Résultats : Nous avons observé une différence significative

entre les taux d’Aβ plasmatique chez des souris APPswe/

PS1dE9 de différents fonds génétiques. Par exemple, les taux

d’Aβ40 étaient respectivement de 988±75 et 591±37 pg/ml chez

les souris B6C3F1 et C57BL/6J. Cependant, les taux d’Aβ40 et

42 plasmatiques chez les souris n’étaient pas modifiés avec

l’âge ou l’évolution de la pathologie. Chez le microcèbe, aucune

différence significative des taux d’Aβ40 n’a pu être observée

entre les animaux jeunes et âgés (41.7±2.4 et 52.3±7.5 pg/ml).

Cependant, une plus grande hétérogénéité était présente chez

les microcèbes âgés, ceci pouvant être un indicateur d’un

vieillissement pathologique de type Alzheimer chez certains

animaux.

Conclusion : La détection des taux d’Aβ plasmatique est un outil

simple et très précis chez la souris transgénique et le primate.

Cet outil peut permettre de suivre les effets de traitements. Il

pourra également permettre de sélectionner des animaux pour

l’étude du vieillissement pathologique chez le microcèbe.

remerciements : Association France-Alzheimer, National

Institute on Aging (R01-AG020197).

P1-17 la baisse du turnover du lCr est associée à une diminution des taux intra-ventriculaires d’aβ42

J.-M. Serot, J. Peltier, R. Fournier, N. Ledeme, A. Fichten, F. Bellarbre, O. Godefroy et J.-C. Maziere

CHU Amiens, Place Victor Pauchet, 80054 Amiens Cedex1, France

introduction : L’hydrocéphalie à pression normale (HPN) et la

maladie d’Alzheimer présentent une diminution du turnover

du LCR. Dans ces 2 affections, celui-ci est d’environ une fois

par jour, chez le témoin jeune il est de 6 fois/jour et chez le

sujet âgé de 3-4 fois/jour. Chez l’animal, la création d’une

hydrocéphalie est suivie de l’apparition de dépôts amyloïdes.

Les lésions de maladie d’Alzheimer sont fréquentes chez les

patients souffrant d’HPN. L’utilisation du PETscan avec le

composé B de Pittsburgh comme ligand confirme la présence

de dépôts amyloïdes chez la moitié des patients souffrant

d’HPN. Chez les sujets atteints de maladie d’Alzheimer, les

taux d’Aβ42 sont inversement proportionnels à la charge

amyloïde évaluée par PETscan.

Patients et méthodes : Nous avons dosé la protéine Aβ42 dans

le LCR intra-ventriculaire de 27 patients consécutifs âgés de

3 à 86 ans. Tous présentaient une hydrocéphalie chronique

nécessitant une ventriculostomie ou une dérivation ventri-

culo-péritonéale. Les diagnostics étaient les suivants : 6 HPN

idiopathiques, 6 sténoses de l’aqueduc de Sylvius, 3 séquelles

de méningite, d’hémorragie méningée ou de rupture de kyste

dermoïde, 2 tumeurs malignes, 6 tumeurs bénignes, 2 séquelles

de chirurgie, 1 hydrocéphalie congénitale et 1 malformation

d’Arnold Chiari. Nous avons utilisé une technique ELISA (test

Innotest beta amyloid(1-42) ; Innogenetics) ; les taux physiolo-

giques pour le LCR lombaire sont supérieurs à 500 pg/ml.

résultats : Chez les 6 patients souffrant d’HPN, un seul avait

des taux d’Aβ42 supérieurs à 500 pg/ml, 3 des taux situés

entre 200 et 300 pg/ml, et 2 des taux inférieurs à 200 pg/ml.

Pour les 21 autres patients, 3 avaient des taux supérieurs à

500 pg/ml, 2 situés entre 400 et 500 pg/ml, 4 entre 200 et 300,

et 12 inférieurs à 200 pg/ml. Les taux d’Aβ42 étaient inférieurs

à 300 pg/ml chez 10 des 11 patients de plus de 70 ans et chez

10 des 16 sujets de moins de 70 ans (p>0.05).

Conclusion : La baisse des taux intra-ventriculaires d’Aβ42

survient quelle que soit l’étiologie de l’hydrocéphalie chroni-

que. Ceci suggère que la diminution du turnover du LCR joue

un rôle dans la formation des dépôts amyloïdes.

P1-18 Protéine Tau, bien plus qu’une protéine associée aux microtubules

A. Sultana, F. Nesslanyb, D. Marzinb, S. Talaharib, A. Loyensc, Z. Mansuroglud, E. Bonnefoyd, L. Buéea et M.-C. Galasa

aInserm U837, Equipe Alzheimer and Tauopathies ; Univ Lille Nord de

France ; UDSL, IMPRT, Jean-Pierre Aubert Research Centre, Bâtiment

Biserte, place de Verdun, F-59045 Lille, France ; bLaboratoire de

Toxicologie Génétique-Institut Pasteur de Lille, F-59019 Lille, France,

1, rue du Pr. Calmette, 59019 Lille Cedex, France ; cInserm U837,

Equipe Développement et Plasticité du Cerveau Post-natal ; Univ Lille

Nord de France ; UDSL, IMPRT, Jean-Pierre Aubert Research Centre,

Bâtiment Biserte, place de Verdun, 59045 Lille, France ; dRégulation de la

Transcription et Maladies génétiques, CNRS UPR2228, UFR Biomédicale,

Université René Descartes, F-75270 Paris, France, Université René

Descartes, 45 rue des Saints-Pères, 75270 Paris Cedex, France

introduction : La famille des protéines Tau est principalement

connue pour moduler l’assemblage et la stabilisation des

microtubules. Cependant Tau pourrait aussi avoir d’autres

fonctions neuronales comme dans la transduction du signal

via ses interactions avec la membrane plasmique ou dans le

noyau où Tau est notamment présent. Des études in vitro ont

montré que Tau était capable de se lier à l’ADN. La liaison de

Tau protégerait l’ADN d’une altération par les radicaux libres

et préviendrait sa dégradation par les DNAses. L’objectif de ce

travail est d’étudier in situ l’influence de Tau sur l’intégrité de

l’ADN en conditions de stress.

matériels et méthodes : Les conditions de stress (oxydant ou

thermique) ont été mises au point sur des cultures primaires de

neurones. Ces conditions ont été comparées dans des cultures

primaires de neurones corticaux de souris obtenues à partir

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62 Revue NeuRologique 165 (2009) 53 - 64

d’embryons sauvages ou déficients en Tau. La fragmentation

de l’ADN a été mise en évidence par Comet assay.

Résultats : Le stress entraîne une fragmentation de l’ADN spé-

cifiquement dans les neurones déficients en Tau. La présence

de Tau protègerait les neurones de la fragmentation de l’ADN

induite par un stress grâce à sa délocalisation nucléaire.

Conclusions : Ces résultats suggèrent que Tau est une protéine

multifonctionnelle qui pourrait jouer un rôle protecteur dans

le noyau des neurones. Dans la maladie d’Alzheimer, l’alté-

ration de Tau pourrait conduire à une perte de sa fonction

neuroprotectrice vis à vis de l’ADN et contribuer ainsi à la

physiopathologie de la maladie.

P1-19 Dérégulation de l’épissage de Tau par mBNl1 dans une Tauopathie

H. Trana, C.-M. Dhaenensa, C. Trolletb, H. Obriotc, D. Ghanema, C. Hammerd, E. Vanbrusselsa, N. Charletd, G. Gourdone, D. Furlingb, L. Buéea, M.-L. Caillet-Boudina, S. Schraen-Maschkea et N. Sergeantc

aInserm U837, Equipe Alzheimer and Tauopathies ; Univ Lille Nord

de France ; UDSL, IMPRT, Jean-Pierre Aubert Research Centre,

Bâtiment Biserte, place de Verdun, 59045 Lille, France ; bUniv Paris

6 Inserm U974/Institut de Myologie, bd de l’hôpital, 75013 Paris,

France ; cInserm U837, Equipe Alzheimer and Tauopathies ; Univ Lille

Nord de France ; UDSL, IMPRT, Jean-Pierre Aubert Research Centre,

Bâtiment Biserte, place de Verdun, F-59045 Lille, France ; dInserm

Avenir Groupe, IGBMC, 67404 Illkrich, France ; eInserm U781, Hôpital

Necker Enfants malades, 75015 Paris, France

introduction : La dégénérescence neurofibrillaire (DNF)

correspond à l’agrégation intraneuronale d’une ou plusieurs

isoformes de protéines Tau anormalement modifiées. Cette

lésion est commune à plus de vingt maladies neurodégéné-

ratives appelées Tauopathies. Il existe plusieurs hypothèses

étiologiques à la DNF dont celle d’une modification de l’épis-

sage de Tau. Nous avons montré dans le cerveau de patient

atteint de la dystrophie myotonique de type 1 (DM1) un défaut

d’épissage de Tau associé à une DNF. La DM1 est une maladie

neuromusculaire, autosomique dominante. La mutation, loca-

lisée en 3’UTR du gène dmpk, se caractérise par des répétitions

CTGn>50. Les ARNs mutants séquestrent des protéines dont

le facteur d’épissage MBNL1. La conséquence est une perte

de fonction de MBNL1 entraînant une dérégulation indirecte

de l’épissage alternatif de ses cibles, dont Tau. L’objectif de

notre travail vise à mieux comprendre les mécanismes liés

à la dérégulation de l’épissage de Tau et tenter de corriger

cette dérégulation.

matériel et méthodes : Afin de reproduire le défaut d’épissage

de Tau, nous disposons d’un minigène de Tau comprenant les

exons 2 et 3 flanquées de leurs séquences introniques, d’un

plasmide exprimant 960 répétitions CTG, mimant ainsi in

vitro la production des ARNs mutés de la DM1 et de plusieurs

isoformes de MBNL1 ainsi que des formes délétées des domai-

nes N- ou C-terminaux de cette protéine. Nous avons préciser

l’implication de MBNL1 à l’aide de ces outils moléculaires.

résultats : Nous montrons in vitro que les répétitions CTG

et l’invalidation de MBNL1 par siRNA reproduisent le défaut

d’épissage de Tau. De plus, la surexpression de MBNL1 en

présence des répétitions CTG restaure le défaut d’épissage

de Tau. MBNL1 semble donc jouer un rôle majeur dans

la régulation de l’épissage des exons 2 et 3 de Tau. Afin de

préciser l’implication de MBNL1 pour l’altération d’épissage

de Tau, nous avons réalisé une étude structure / fonction et

montrons que la région N-terminale de MBNL1 est essentielle

et suffisante à la restauration de l’épissage de Tau.

Conclusion/Perspectives : La perte de fonction endogène de

MBNL1 dans la DM1 peut être restaurée par la surexpression

du domaine N-terminale de MBNL1. Elle est actuellement

évaluée comme outil thérapeutique dans un modèle de souris

transgénique DM1

P1-20 effets de l’exercice volontaire à long terme dans un modèle de souris transgénique ThY-Tau22 développant une pathologie Tau similaire à celle observée dans la maladie d’alzheimer

L. Troquiera, S. Burnoufa, K. Belarbia, F. Fernandez-Gomeza, A. Sultana, M.-E. Grosjeana, D. Demeyera, H. Obriota, R. Cailliereza, M.-C. Galasa, I. Brionb, B. Barbotb, S. Humeza, N. Sergeanta, M. Hamdanea, D. Bluma et L. Buéea

aInserm U837, Equipe Alzheimer and Tauopathies ; Univ Lille Nord de

France ; UDSL, IMPRT, Jean-Pierre Aubert Research Centre, Bâtiment

Biserte, place de Verdun, F-59045 Lille, France ; bUniv Lille Nord de

France, IMPRT, Univ Lille 2, Place de Verdun, F-59045 Lille, France

introduction : La maladie d’Alzheimer est une maladie

neurodégénérative caractérisée par des dépôts amyloïdes et

une dégénérescence neurofibrillaire (DNF). Cette dernière est

constituée d’agrégats de protéines Tau hyper- et anormale-

ment phosphorylées et sa progression est corrélée avec celle

des déficits cognitifs. Afin de modéliser la pathologie Tau, nous

avons généré un nouveau modèle de souris transgénique Tau

(THY-Tau22) dans lequel nous testons certains paradigmes.

Ainsi, l’activité physique prévient le déclin cognitif et retarde

le début des démences.

matériels et méthodes : La lignée Thy-Tau22 a été caractérisée

dans une cinétique d’un point de vue comportemental (Y

maze). Des études immunohistochimiques sur la pathologie

Tau et le système cholinergique ont été réalisées. Des souris

THY-Tau22 et ”littermates” âgées de 3 mois ont été soumises

à l’exercice volontaire ad libitum durant 9 mois. Les mêmes

études ont ensuite été réalisées.