A168 GASTROENTEROL CLIN BIOL, 2009, 33

P.239 Rôle des récepteurs de CXCL12 dans laprogression des tumeurs endocrines diges-tives

S Navoizat (1), JC Gevrey (1), V Hervieu (1), F Lepinasse(1), T Walter (1), H Schmid-Antomarchi (2), A Schmid-Alliana (2), C Lombard-Bohas (1), JA Chayvialle (1), JYScoazec (1), J Abello (1)(1) Lyon ; (2) Nice.

Introduction : Les tumeurs endocrines digestives (TED)sont des tumeurs rares, d’évolution difficile à prédire maisdont le caractère agressif est indiqué par le fait que 50 %sont d’emblée associées à des métastases au moment dudiagnostic. A ce jour, les marqueurs pronostiques et lescibles thérapeutiques efficaces font défaut dans la prise encharge de ces tumeurs. Dans ce contexte, l’objectif de notretravail est d’évaluer l’implication potentielle des récepteursde chimiokines dans la progression des TED. Le rôle de cer-tains de ces récepteurs dans la progression de plusieurs typesde cancers a en effet été montré et l’existence d’inhibiteurspharmacologiques en fait des cibles thérapeutiques poten-tielles. Nous avons donc déterminé le profil d’expression deces récepteurs dans les TED humaines et évalué leur fonc-tion au cours de la tumorigenèse endocrine.

Matériels et Méthodes : Les niveaux d’expression del’ensemble des récepteurs de chimiokines ont été analysés parRT-PCR quantitative à partir d’échantillons cryopréservés de12 TED (pancréas : 6 ; intestin grêle : 6). L’expression de cer-tains récepteurs a été vérifiée par immunohistochimie. La pré-sence des récepteurs d’intérêt a également été confirmée dansles lignées cellulaires tumorales endocrines digestives BONet QGP1. Leur fonctionnalité a été évaluée in vitro à traversdes tests de migration, d’adhésion et de tumorigénicité enréponse à leur ligand spécifique et les effets in vitro d’inhibi-teurs pharmacologiques ont été testés.

Résultats : L’analyse des récepteurs de chimiokines parqRT-PCR a révélé que les TED exprimaient un large panelde récepteurs, à des niveaux très variables. Dans toutes lestumeurs testées, les ARNm de CXCR7 et CXCR4 étaient lesplus exprimés. L’expression des protéines correspondantes aété confirmée par immunohistochimie. La présence deCXCL12, le ligand commun à ces deux récepteurs, a étédétectée dans le tissu tumoral, suggérant la possibilité d’uneinteraction fonctionnelle ligand/récepteur(s). Les lignéesendocrines humaines BON et QGP1 présentaient un profild’expression comparable à celui observé dans les tumeurs,avec une forte expression de CXCR4 et CXCR7. Les testsfonctionnels indiquaient que ces cellules migraient enréponse à CXCL12 de manière CXCR4-dépendante,CXCR7-indépendante. D’autres processus associés au carac-tère invasif des tumeurs étaient également stimulés parCXCL12 comme l’interaction des cellules avec du matrigelet le développement de colonies en agar mou. L’effet desinhibiteurs de CXCR4 et CXCR7 a révélé une implicationdifférentielle de ces récepteurs dans ces processus.

Conclusion : Nos données indiquent que deux récepteurs dechimiokines, CXCR7 et CXCR4, sont exprimés conjointe-ment et à un niveau important dans les TED humaines.L’interaction de ces récepteurs avec leur ligand commun,CXCL12, est susceptible de moduler les propriétés invasivesdes cellules et par conséquent d’influencer la progression desTED. L’existence d’inhibiteurs de ces récepteurs en fait descibles thérapeutiques potentielles.

P.240 Comparaison des profils de méthylation del’ADN dans les tumeurs endocrines iléaleset pancréatiques : de nouvelles pistesmoléculaires pour la compréhension desmécanismes de la tumorigenèse endo-crine digestive ?

MO Joly-Pharaboz (1), T Walter (1), V Hervieu (1), MCordier-Bussat (1), C Roche (1), G Poncet (1), CPartensky (1), JA Chayvialle (1), C Lombard-Bohas (1),JY Scoazec (1)(1) Lyon.

Introduction : Dans les tumeurs endocrines digestives spora-diques, des mutations d’oncogènes ou de gènes suppresseursde tumeurs sont rarement observées. D’autres mécanismesmoléculaires, notamment épigénétiques, doivent donc êtrerecherchés. L’objectif de notre travail était d’analyser les pro-fils de méthylation de plusieurs gènes cibles dans une série detumeurs endocrines digestives et de les comparer en fonctionde leur site d’origine.

Patients et Méthodes : 53 tumeurs endocrines digestivessporadiques ont été analysées : 32 de siège pancréatique(13 tumeurs bien différenciées, 19 carcinomes bien différen-ciés) et 21 de siège iléal (tous des carcinomes bien diffé-renciés). Le statut de 13 gènes et loci a été évalué par laméthode MSP (Methylation Specific PCR, après traitementde l’ADN au métabisulfite de Na) appliquée à des échan-tillons tissulaires congelés.

Résultats : Les deux gènes les plus fréquemment hypermé-thylés dans les tumeurs examinées étaient HIC (hypermethy-lated in cancer) et RASSFA1, dans respectivement 94,3 et73,5 % des cas, sans différence significative en fonction dusite de la tumeur primitive ; ces deux gènes sont connus pourêtre fréquemment hyperméthylés dans de nombreux types detumeurs. Quatre gènes impliqués dans la carcinogenèsecolique étaient fréquemment hyperméthylés dans les tumeursexaminées : APC (36 %), DCC (36 %), UNC5H3 (23 %), etECAD, codant pour la E-cadhérine (21 %). Trois de cesgènes, DCC, UNC5H3 et ECAD, étaient altérés de manièresignificativement plus fréquente dans les tumeurs iléales quedans les tumeurs pancréatiques (respectivement, 71 vs 15 %,57 vs 3 %, et 38 vs 6 %, chi2 test, p < 0,01). Contrairementaux cancers colorectaux de phénotype méthylé (CIMP), lestumeurs endocrines examinées ne présentaient que rarementdes altérations des gènes et loci hMLH1, p16, MINT1,MINT2 et MINT31 (dans respectivement 0 %, 7,5 %, 1,8 %,7,5 % et 13,2 % des cas). Enfin, les gènes MEN-1 et VHLn’étaient hyperméthylés dans aucune des tumeurs examinées.Il n’existait pas de différence statistiquement significativedans les profils de méthylation des gènes étudiés entre lestumeurs endocrines bénignes ou malignes du pancréas.

Conclusion : Les tumeurs endocrines digestives sporadiquesprésentent des profils de méthylation différents en fonctionde leur localisation, iléale ou pancréatique. Nos résultats sug-gèrent que plusieurs gènes déjà connus pour être impliquésdans la carcinogenèse épithéliale intestinale, comme DCC etUNC5H3, pourraient jouer un rôle dans la tumorigenèseendocrine iléale.