Prsentation PowerPoint

Projets de thrapie cellulaire et gnique: tudes prcliniques et conduite de lessai cliniqueFabian GROSSChef de projet BiothrapiesCIC BT/DRI CHU de Toulouse

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Laboratoire de recherche et promoteur

Approches in vitro et in vivo relevant de la pathologie vise par le protocole clinique.

Dveloppement du mdicament exprimentalLaboratoire de recherche

Intrt dune cible ou dune approche exprimentale (in vitro et in vivo)

Dveloppement dun mdicamentEtudes Pr Cliniques : le contexteEtudes Pharmacologiques : activit du produit

Etudes Pharmacocintiques : devenir et intractions du mdicament dans lorganisme (homme ou animal)

Etudes Toxicologiques : effets adverses dun produitToxicit aige Toxicologie chroniqueToxicologie de la fonction de reproductionEtudes de mutagnseEtudes de cancrognseDterminent la valeur thrapeutique et les investigations chez lhomme (paramtres cliniques surveiller)Etudes Pr cliniques : Stratgie AdoptePrincipales lignes directives : International Conference of HarmonizationNature des tudes selon le stade de dveloppement du produit : ICH M3 (CPMP/ICH/286/95) Produits biotechnologiques: ICH S6 (CPMP/ICH/302/95)Application: Thrapie anticancreuse : ICH S9 (CPMP/SWP/997/96)

Prambule : - Produit ou Mdicament identique ou comparable a celui de lessai clinique Mthodes et techniques valides (in vitro et in vivo)

Dossier de PharmacologieEtudes pharmacologiques

PharmacodynamieDonnes in vivo et in vitro de lactivit du produit lie ou non a leffet thrapeutique attendu

Pharmacologie de scuritEffets sur systme respiratoire, nerveux et cardiovasculaire => voir tudes de toxicologieEtudes pharmacocintiques

Donnes sur labsorption, le mtabolisme, la distribution, la fixation des protines plasmatiques, lexcrtion et le bilan de radioactivit

Si tude in vitro => matriel dorigine humaine

La toxicologie conditionne la premire dose administrer lhomme

Seuil defficacit MABEL (Minimal Anticipated Biological Effect Level )Seuil de tolranceAucun effet : pharmacologique (NOEL : No Effect Level)Secondaire (NOAEL : No Adverse Effect Level)Dose Maximale TolreMTD6Toxicologie GnraleObjectifs :Dtermination de la 1re dose injecte lhomme (Phase 1) Identification des effets adverses et dorganes cibles (NOEL et NOAEL)Reversibilit des effets adversesRelation effets du produit et de ses mtabolitesInfluence du sexe, de la dose, du temps dexposition ou dautres facteurs

Design :Groupes : Control (vhicule seul), faible dose (NOEL), forte dose (MTD) et dose moyenneAnimaux : 2 espces (un non rongeur), et Dure : 24h 2 ansVoie et rgime administration : IV et voie clinique envisage

Etudes BPL (directives 2004/10/CE et guidelines applicables EMEA Guideline EMEA/CHMP/410869/2006 du 31/07/2007) Etude de Biodistribution et de Toxicit par administration uniqueInjection :IV puis voie clinique, suivi pendant 2 5 semainesEscalade de doses selon un processus squentiel

Suivi : Observations cliniques sur les 1res 24h puis 1 2 fois par semaineAnalyses biologiques et biochimiques

Sacrifice et Autopsie :Examens anatomo-pathologiques dune 12aine dorganesEtude du potentiel immunotoxiqueDosage du mdicament exprimental ou des cellules dans les organes8Exemple du CYL-02

Injection IV du CYL-02 (1er lot pr-GMP) chez la souris de 250g/kg 7500g/kg

Suivi : Observations cliniques et analyses bio et bioch (sang, urine)

Autopsie : Examens anatomo-pathologiques de 12 organes + tumeurDosage du transgne (organes, sang et urines)Dfinition de la NOAEL 1500g/kg

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Rpartition de la positivit sexe/organes/doses confondus

Biodistribution : Poumon, foie, rein, muscle et gonades

Quantification des transgnes par qPCRPic de dtection 6h post injection

10Toxicit et biodistribution par voie cliniqueConduit sur un 2me modle animal

OBJECTIFSCalculer la premire dose administrer lhomme suivant le mode dadministration prvu en clinique

METHODESModle animal pathologie ou du modle dtude si non disponibleInjection du ME par la voie clinique, suivi des animaux sur les jours suivant et 1 2 fois par semaines (biologie et biochimie).Traitement de lanimal par les traitements concomitants de ltudeEntre 2 et 5 semaines, sacrifice des animaux et prlvement des organes pour anapath et dosage du mdicament exprimental

11 Toxicit intratumorale du CYL-02

J0queue du pancras par mini-laparotomie gauche (allogreffe orthotopique)

J7Contrle de lvolution de la tumeur par laparotomie mdiane exploratrice.Injection et suivi des animaux.J9, 11 et 13Injections intrapritonales de Gemcitabine (80 mg/kg).J15Sacrifice des animaux et prlvement des organes.4 groupes :Glucos 5% (vhicule) avec ou sans traitement GemcitabineCYL-02 (900g/kg) avec ou sans traitement GemcitabineAucune ltalit dans lensemble des groupes ayant reu le CYL-02 seul ou associ la gemcitabine.

12Rsultats de la biodistribution aprs injection intra tumoraleCYL-02+ NaClCYL-02 + GemcitabineTumeur+++++Rate+/-+Foie+++++Rein et intestins-+/-Poumons, muscles et gonades--Biodistribution:Prsence du transgne dans la tumeur 8 jours aprs une injection intra-tumorale.CYL-02 + gemcitabine, faible positivit au niveau rnale et intestinal alors que positif au niveau splnique

Suivi pondral :Aucune anomalie pondrale et clinique dans le groupe CYL-02,Amaigrissement significatif (15% en moyenne) avec la gemcitabine,Aucune diffrence significative entre gemcitabine seule versus CYL-02 + gemcitabine.

Examen anatomopathologique macroscopique:Aucune lsion pancratique, pritonale, ou hpatique

TmoinsgemzarPTGPTG + gemzar120010008006004002000% de progression- 50 3 %13OBJECTIFSSimulation du protocole propos chez lhomme Accumulation Sensibilisation Cerner la Pharmacologie de Scurit Calculer la premire dose administrer lhommeEtude de Toxicit dose rpte du Cyl-02

Calcul de la 1re dose injectable lhommeHED (Dose quivalente chez lHomme) = NOAEL (Animal)/ Facteur de scurit/ fact clearance (Homme/Animal)

Soit : 900g/Kg/60/7,4 = 2g/kg

Poids moyen dun patient ACP de 63kg => 125g

14Injection de 2.106 CSM dans lorgane considr sur le modle animal Nude de la pathologie vise par ltude clinique sur des 10x et 10x: vehicule seul (CTRL ) et CSM

Surveillance des signes cliniques des animaux (poids, sociabilit) 1 2 x / semaine

Sacrifice 3 semaines (toxicit aige) et 12 semaines (toxicit chronique), observation macroscopique sur 8 organes (ganglions, foie, cerveau, reins, rate, peau, gonades et poumons) + organe inject

Rsultat : Evolution du poids, morbidit, mortalit et signes de toxicit, anatomopathologie

Recherche de cellules humaines par qPCR (ALU)

Exemple dtude de biodistributionAucune altration des organesAucune cellule humaine 3 et 12 semaines

15GnotoxicitOBJECTIFS :Recherche de toute modification du matriel gntique induite par le MERecherche dune potentialit mutagne

MODALITE :Etudes normalises in vitro et in vivo, comprenant :Test de mutation gnique in vitro sur bactries (test de Ames)Test daberrations chromosomiques in vitro sur cellules de mammifresOptionnel : Test daberration chromosomique in vivo sur cellules hmatopotiques de rongeur (test du micro noyau)Thrapie Gnique : Mutagnse insertionnelle des vecteurs virauxThrapie Cellulaire : Tumorignicit des cultures cellulairesInjection intramusculaire ou sous cutane chez la souris Nude (5 animaux/grpe) de 10.106 CSM : HT29 (CTRL+) ; vhicule seul (CTRL ) et CSM

Surveillance des signes cliniques des animaux (poids, sociabilit) 1 2 x / semaine

Mesure des nodules 1 a 2 fois par semaine pendant 12 semaines

Sacrifice 90 J et observation macroscopique sur le site dinjection et 6 organes (en gnral : ganglions, foie, cerveau, reins, rate et poumons)

Si apparition de tumeurs, qPCR pour recherche de cellules humaines (ALU)

Rsultats : Suivi des animaux, poids, anatomopathologie et volume des tumeursExemple dtude de tumorognicitRsorption au point dinjection en 3 6 jours Pas de dveloppement de tumeurAucune altration des organes 90J

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Promoteur

Protocole clinique sur des volontaires (sains ou patients) suivant des modalits dinclusion et de suivi prdfiniesDveloppement dun mdicamentLaboratoire de recherche et promoteur

Approches in vitro et in vivo relevant de la pathologie vise par le protocole clinique.

Dveloppement du mdicament exprimentalLaboratoire de recherche

Intrt dune cible ou dune approche exprimentale (in vitro et in vivo)

Documents spcifiques la TGDocuments spcifiques la thrapie gnique : Ces documents sont a fournir par le promoteur lors de la demande dAutorisation dEssais Clinique (AEC) faite lANSM et au HCB en plus des documents communs.CERFA n 12536*02 : agrment des locaux de recherche clinique en fonction du classement de lOGM tablit par le HCB. Dcret n93-773 du 27 mars 1993 et arrt du 27 dcembre 1994.Annexe 2 : Principes applicables a lvaluation du risque pour lenvironnement dcrit en termes gnraux l'objectif atteindre, les lments prendre en considration et les principes gnraux ainsi que la mthodologie suivre pour effectuer l'valuation des risques pour l'environnement. Directive 2001/18/CE du 12 mars 2001.Annexe 3A : Informations devant figurer dans la notification concernant la dissmination des OGM autres que les plantes suprieurs. Directive 2001/18/CE du 12 mars 2001.Formulaire de synthse de la notification concernant la dissmination volontaire dOGM dans lenvironnement dautres fins que leur mise sur la march. Directive 2001/18/CE du 12 mars 2001.Fiche dinformation destine au Public prsente les buts et les utilisations prvues de la dissmination, la description synthtique et les mthodes de surveillance. Cette fiche d'information permet de procder une consultation du public sur cette dissmination et doit donc prciser les modalits de cette consultation et la date limite de rponse de 30 jours aprs sa publication sur le site internet de lANSM. Directive 2001/18/CE du 12 mars 2001.Remarque : la fiche dinformation destine au Public est diffrente de la notice dinformation aux patients et ne la remplace en aucun cas.Annexe 2 : Principes applicables a lvaluation du risque pour lenvironnement.

Annexe 3A : Informations devant figurer dans la notification concernant la dissmination des OGM autres que les plantes suprieurs.

Formulaire de synthse de la notification concernant la dissmination volontaire dOGM dans lenvironnement dautres fins que leur mise sur la march.

Fiche dinformation destine au Public : date limite de rponse de 30 jours aprs sa publication sur le site internet de lANSMDemande de classement initial et dagrment CERFA 1674*02Intgrer dans la demande lutilisation pour essai clinique (addendum demande initiale)

Demande dagrment des sites hospitaliers CERFA 12536*02Confinement doit tre en adquation avec le classement de lOGM. Une demande dagrment dutilisation confine dOGM par site (pharmacie, chambre hospitalire, laboratoire, local dadministration). numro de dossier identique celui du classement tablit initialement par le HCB.

Ponction de MOCircuit du mdicamentPrlvement de TA

Srologies patient (HIV 1&2, HTLV 1&2, HBC et HCV, Syphilis)

Autorisation du lieu de prlvement (bloc opratoire, anesthsie et praticien)

Cahier navetteAutorisation de site

Ponction de MOCircuit du mdicament

Conglation ou Mise en culturePrlvement de TA

Autorisation de siteSocit spcialise et autoriseTransport avec respect des T (ambiant, froid ou congel) et des dlais

Rglementation transport matires vivantes (directive europenne 2004/23/CE)Expansion cellulaire ou transfert de gne

Ponction de MOCircuit du mdicament

Conglation ou Mise en culturePrlvement de TA

Cellules : SAAutorisation de siteSocit spcialise et autoriseAutorisation de production

Etablissement autoris (tablissement pharmaceutique ou non, classement pour OGM)Contrles in process (strilit)Dlivrance dun certificat de conformit Libration, conglation de la SAExpansion cellulaire ou transfert de gne

Ponction de MOCircuit du mdicament

Libration, conglation de la SAConglation ou Mise en culture

Prlvement de TA

Cellules : SAMise en forme SA = PFAutorisation de siteSocit spcialise et autoriseAutorisation de productionPrparation et dispensation pharmaceutique

Prparation pharmaceutique, stockage, dconglation, mise en forme, dispensation +/- confinement (double ou triple emballage)Retour et destruction des UT, pb de linactivation des OGM : solides a autoclaver (20 mn 121C)liquides a neutraliser la Javel (12h 2% final extemporan)Expansion cellulaire ou transfert de gne

Ponction de MOCircuit du mdicament

Libration, conglation de la SAConglation ou Mise en culture

Prlvement de TA

Cellules : SAMise en forme SA = PF

Autorisation de siteSocit spcialise et autoriseAutorisation de productionPrparation de type pharmaceutique

Injection au volontaireConclusionsProduit grade recherche :Preuve de concept et comprhension du mode daction (Pharmacologie)Dveloppement et validation des techniques : caractrisation, identit, activit et fonctionnalitTest in vivo : validation du modle animal, efficacit et effets secondaires (pr toxicologie)

Produit grade Pr-GMP :Pharmacologie essentiellement in vitro sinon a intgrer aux tudes de toxicologie in vivoTumorognicit des MTI de TC et TG ex vivo, mutagnse insertionnelle en TGBiodistribution des vecteurs et des cellulesToxicologie des vecteurs ou du transgne

Produit grade Clinique :Circuit du mdicament : confinement, dlivrance, stabilit courteCircuit du patient : prlvement, injection, hospitalisationSuivi des patients : effets adverses, confinement, fluides biologiques, destruction

Graph1741553321505

Feuil1poumonreinintestincurmusclecerveaupritoinepancrasratefoievessiegonades741553321505

Feuil1

Feuil2

Feuil3