NOTES 421

Recherches sur les Ahria (Phaeophyceae) de l'est canadien. 11. Traitement de sporocystes de Laminariales par la rkaction nuclkale de Feulgen "in toto " '

P. DEMALSY ET M.-J. FELLER-DEMALSY Section d'OcPonogrophie (SOUQAR), DPportement des Sciences Plrres, Universite' du QuPbec b Rimouski,

Rimouski, QlrPbec, G5L 3Al

R e ~ u le 7 aoilt 1974

DEMALSY, P., et M.-J. FELLER-DEMALSY. 1975. Recherches sur les Alorio (Phaeophyceae) de I'est canadien. 11. Traitement de sporocystes de Laminariales par la reaction nucleale de Feulgen " i t 1 toto." Can. J. Bot. 53: 421-423.

Les auteurs decrivent une mtthode permettant I'etude caryologique de sporocystes entiers de Laminariales coloris par la rtaction nucleale de Feulgen "in toto."

DEMALSY, P., and M.-J. FELLER-DEMALSY. 1975. Recherches sur les Alorio (Phaeophyceae) de I'est canadien. 11. Traitement de sporocystes de Laminariales par la reaction nucleale de Feulgen "in loto." Can. J. Bot. 53: 421423.

The authors describe a method for the caryological study of whole sporocysts of Laminariales after treatment by the nucleal Feulgen reaction in toto.

Introduction logues, tels Yabu (1957, 1964), Robinson et

~i~~ au point il a un demi-siicle exactement, Cole (1971) et d'autres selon le relevt de ces la nucltale de ~~~l~~~ et ~ ~ ~ ~ ~ ~ b ~ ~ k deux derniers auteurs, accordent leurs faveurs

(1924) a largement contribut aux progr6s de la soit B des coupes colortes B l'htmatoxyline ou B Biologic, notamment dans l'ttude du noyau et la technique de I'actto-carmin de Belling plus ou des chromosomes de nombreux organismes. son moins modifike et ce, malgrt les dtsavantages de

certains groupes, dent les ~ ~ ~ i ~ ~ - ces mtthodes, dont leur non-sptcificitt a l'tgard riales, pose cependant des problimes particuliers de lYacide dtsoxyribonucltique (ADN). non rtsolus B ce jour. Si l'application a notre mattriel (Feller-

Selon l'aperCu synoptique des methodes Demalsy et Demalsy 1974) de la rtaction nucltale utilistes pour llttude caryologique des ~ ~ ~ i ~ ~ - de Feulgen realiste selon des mtthodes dtjB riales ( ~ ~ b i ~ ~ ~ ~ et tole 1971), walker (19521, dCcrites permit d'obtenir de bons rtsultats pour sur des gamttophytes de Macrocystis integrifolia la phase gamt to~h~ t ique et les tout premiers Bory, et Magne ('953), sur des coupes de ~tades du s ~ o r o ~ h ~ t e , les essais sur les spore- Laminaria fIexicauljs Le Jolis et L. saccharins phylles s'avtr&rent tri% dtcevants. (L.) L ~ ~ ~ ~ ~ , t t ~ les premiers appliquer la Les problimes rencontres relevaient, comme reaction nucltale de Feulgen ces algues. Encore 1'0nt signale nos devanciers, de la nature des faut-il rioter que, dans son article, Walker ne parois cellulaires ainsi que de la prtsence de

sptcifie pas la coloration utiliste et que M ~ ~ ~ ~ , chloroplastes et d'autres inclusions dans les le seul auteur qui avait applique la rtaction nucltale des parties de sporophytes adultes, ne La rtalisation B basse temptrature d'une partie

fournit aucun detail sur sa technique. du traitement du mattriel et l'introduction dans plus tard, walker (1954), ~~~l~~ (1956) et les manipulations de certaines ttapes de la pripa-

E~~~~ ('965) u t i l i s~ent la nucltale de ration de "squash" permanents selon Martoja et

Feulgen pour 1'Ctude des gamttophytes et de Ma't~ja-~ierson (1967) nous permirent cepen- jeunes sporophytes de plusieurs espices du genre dant l'obtention de rtsultats satisfaisants pour les

Laminaria, les deux derniers auteurs ayant Cgale- s~OrOphylles- ment utilist l'actto-carmin de Belling pour le M6thodes traitement de leur mattriel. La rtaction nucleale

Les sporophylles ont e t t traitees comme suit. ( I ) Fixer de parait s'appliquer sans diffi- les sporophylles dans un melange constitue de trois cult6 A l'ttude de ces stades. parties d'ethanol (95%) et d'une partie d'acide acetique

Par contre, dans les travaux ulttrieurs con- gla~ia l pendant au moins 12 h a une temperature ne sacres aux sporophytes de ce groupe, les alga- depassant pas 2°C. Si le materiel n'est pas trait6 imme-

diatement apres la fixation, le conserver dans 1'6thanol L 'Contribution No. 9 de la SOUQAR. 70% a 2°C. (2) DCcouper les sporophylles en lanieres

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transversales de 4 a 6 mm de largeur et rincer celles-ci a I'eau courante pendant environ 3 min. (3) Hydrolyser les lanieres dans HCI N a 60°C pendant 10 a 12 min. (4) Rincer rapidement dans I'eau distillie et transfirer dans le reactif de Schiff pendant 8 h ou une nuit. (5) Plonger les sporophylles dans trois bains successifs d'eau sul- fureuse fraichement preparee, pendant 30 s chaque fois; ensuite rincer rapidement a I'eau. (6) Deposer la laniere sur la platine porte-objet d'un microtome a congelation avec rasoir refrigere (OLI d'un cryostat) et la dtbiter en coupes anticlines de 15 a 20 microns (p) d1Cpaisseur. (7) Etendre une goutte d'adhtsif de Haupt modifiCZ (Demalsy 1953) sur Line lame porte-objet, laisser stcher et y diposer une tres petite goutte d'eau. (8) Y placer et Ctaler une OLI plusieurs coupes non dCgelCes. (9) Recouvrir Line lamelle couvre-objet d'huile de silicone. (10) Dtposer la face du couvre-objet enduite d'huile de silicone sur la (OLI les) coupe(s). Presser 1Cgerement mais suffisamment pour separer les sporocystes les uns des autres et eliminer les event~~elles bulles d'air. (1 1) Vaporiser du Cryokwik sur le porte-objet OLI dtposer celui-ci sur un morceau de carboglace pendant 1 min. (12) Apres givrage de la lame, detacher rapidement la lamelle a I'aide d'un objet tran- chant (lame de rasoir par exemple). (13) Plonger la lame portant I'objet dans Lln bain d'ethanol a 95% j~usqu'i ce que I'huile de silicone se soit completement dCposCe au fond de I ' a~~ge a coloration. (14) lmmerger la lame pen- dant 10 s dans un melange constitue en proportions egales, d'ethanol95Z et de b ~ ~ t a n o l et, ensuite, la transferer dans un bain de butanol pur. Une coloration de fond peut- Etre realisee par passage dans un bain de butanol con- tenant du fast green, s ~ ~ i v i d'un r in~age dans le butanol pur. (1 5) Transferer dans le xylol et proceder au montage permanent de la lame.

Discussion et conclusion

Le fixateur et la durte de fixation appliques aux Alaria etudiis sont ceux que precpnise Evans (1966). Nous avons cependant constati que la fixation et le stockage du materiel a basse temperature (52°C) assuraient une meilleure conservation des fines structures cytologiques.

L'emploi de carboglace (Martoja et Martoja- Pierson 1967) ou de Cryokwik Cvitent les pro- blimes decoulant du passage et du gonflelnent du materiel en milieu aqueux au cours de la dtshydratation. Les deux produits ont donne pleine satisfaction. La prCfCrence a cependant CtC accordCe au second en raison de son prix de revient infkrieur et de la simplicit6 de son emploi.

Contrairement au cas des gamktophytes et des tout jeunes sporophytes, ou le rin~age a I'eau pure (Demalsy 1953; Demalsy et Callebaut 1967) suffit, gr5ce aux petites dimensions de ces objets, a les dkbarrasser de surplus de reactif

ZLa proportion de glycerine y est rtduite au tiers soit 5 crn3 au lieu de 15.

de Schiff, le passage classique dans trois bains successifs d'eau sulfureuse fraichement prCparCe s'est aver6 nCcessaire B l'obtention des meilleurs rCsultats dans le traitement des sporophylles. L'acide acCtique gla~ial permet d'obtenir un aussi bon r in~age que l'eau sulfureuse. Toutefois, la dissociation des sporocystes Ctant moins aisCe aprks son action sur le matkriel, son emploi n'a pas CtC retenu.

Les coupes rCalisCes au microtome B congela- tion doivent Etre d'une Cvaisseur suffisamment supCrieure au diamMre des sporocystes afin de maintenir entiers le plus grand nombre de ceux-ci pour 1'Ctude de leur contenu cellulaire et de leur nombre chromosomique. Une attention particulikre doit Etre apportee au reperage des sporocystes intacts lors de l'examen des prtpara- tions.

La mCthode dCcrite ci-dessus prCsente deux avantages qu'aucune technique dCjB appliqute B 1'Ctude des sporophytes adultes de Laminariales n'avait encore rCunis. Elle allie en effet la specificit6 de la reaction nuclCale de Feulgen B la possibilite d'examiner des sporocystes entiers, separes par Ccrasement (squash). Ses carac- teristiques ecartent la possibilitt de confondre des nucleoles ou des organites cellulaires avec les chromosomes, qui sont de trks petite taille, et elilninent tout doute quant B I'intCgritC des lots chromosomiques CtudiCs. Sa realisation ne re- querant que des appareils Cquipant normale- ment tout laboratoire d'histologie ou de biologie cellulaire, la technique que nous avons mise au point ne comporte aucune difficult6 particuliere qui constitue un obstacle B son emploi en routine.

Remerciements

Cette Ctude a CtC rCalisCe avec l'aide des sub- ventions du Fonds de la Politique Institutionnelle de I'UQAR et du CNRC no. A6904 et E2532.

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The use of an ionizing unit for improved ultrathin sectioning1

R. H. HASKINS AND L. R. NESBITT National Research Council of Canada, Prairie Regional Laboratory, Saskatoon, Saskatcl~ewan, S7N OW9

Received October 24, 1974

HASKINS, R. H., and L. R. N E S B I ~ . 1975. The use of an ionizing unit for improved ultrathin sectioning. Can. J. Bot. 53: 423-425.

A readily available polonium ionizing unit placed near the ultramicrotome knife greatly facili- tated ultrathin sectioning and subsequent handling of the sections.

HASKINS, R. H., et L. R. NESBITT. 1975. The use of an ionizing unit for improved ultrathin sectioning. Can. J. Bot. 53: 423-425.

Si I'on place prks du couteau d'un ultramicrotome une unit6 ionisante au polonium, facilement disponible, le sectionnement ultramince et la manipulation substquente des coupes sont beaucoup plus faciles. [Traduit par le journal]

Static electricity often interferes with the ultra- thin sectioning procedures necessary for pre- paring specimens for electron microscopy studies. This may be especially so in northern climates where low temperatures result in very low hum- idity levels.

An ionizing unit with a polonium element (Model 2 U500 Nuclear Products Company, P.O. Box 1178, El Monte, California 91734) was mounted on a short metallic strip affixed to a steel magnetized bar (Fig. 1). The weight of the bar plus its magnetic attraction to the steel transverse-motion plate of the Reichert Ultra- microtome OmU2 is sufficient to hold the ioniz- ing unit to one side and opposite the cutting edge of the knife and an inch or so away from it. The

'NRCC No. 14390.

simple unit is quickly set in place and as quickly removed when no longer required.

With the unit in place, water in the trough did not pile up at the knife edge when the knife edge and the specimen were being adjusted in relation to each other. This adjustment in the apparatus shown is facilitated by bringing upward pointing light to behind and below the diamond knife edge by means of an inexpensive vinyl-jacketed 40-mil plastic light pipe (e.g. 'Crofon' micro lite fibers, Dupont Ltd.) available from hobby shops and fiber-optics suppliers. During sectioning, sections did not pull over the knife edge and far fewer silver and grey sections were spoiled by wrinkling and folding. The sections were con- siderably easier to group and to pick up on grids. The unit when properly placed did not interfere in any way with the focussing of the binocular

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