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TD 5 : LES AMINOACIDES BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

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TD 5 : LES AMINOACIDES

BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

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Exercice 1 : Vrai ou faux3. Spectre d’absorbance des acides aminés

aromatiques

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Exercice 1 : Vrai ou faux4. Etats de la glycine

pH

CH NH3+

HOOC

H

CH NH3+

OOC

H

- CH NH2OOC

H

-

pHi

Forme cationique

A+

Zwitterion

A

Forme anionique

A–

H3O+H2O

H3O+H2O

H3O+H2O

H3O+H2O

Page 4: TD 5 : LES AMINOACIDES BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

pH

CH NH3+

HOOC

H

CH NH3+

OOC

H

- CH NH2OOC

H

-

pHi

ZwitterionForme cationique Forme anionique

A+ A A–

A+ A A–

% forme

0

50

100

H3O+H2O

H3O+H2O

H3O+H2O

H3O+H2O

[A+] = [A] [A] = [A–]

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pHpHi

% formepH = pKa1 pH = pKa2

pKa = pH de demi-ionisation des fonctions ionisables

A+ A A–

[A+] = [A] [A] = [A–]

0

50

100

21 pKa pKa 21 pHi

• Si pH = pKa1 [COOH] = [COOH]

• Si pH = pKa2 [NH2] = [NH3+]

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Tampon pH = 6

Exercice 4 : Electrophorèse

AnodeCathode

G+

– +

PapierZone de dépôt

PO

T

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Exercice 6 : Analyse peptide

DE

NA

TU

RA

TIO

N

Oxy

datio

n S–

S

HYDROLYSE

TOTALE

Protéine

Acidesaminés

Ct

Nt

DéterminationNt et Ct

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode de Sanger (au FDNB)

H2N COOH

HN COOHDNP

FDNB

HNDNP

HClLIBERATION DE TOUS LES AA

SEUL AA Nt EST MARQUE

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOH

PTCPITC

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOH

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOHH2N

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

Page 12: TD 5 : LES AMINOACIDES BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOHH2N

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

Page 13: TD 5 : LES AMINOACIDES BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOHH2N

PITC

PITC

PITC

PITC

PITC

H2N

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOHH2N

PITC

PITCPITC

PITC

H2N

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H2N

Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Méthode d’Edman

H2N COOHH2N

PITC

PITCPITC

PITC

H2N

DE

TE

CT

EU

R

MÉTHODE RÉCURRENTE

PERMET LE SÉQUENÇAGE

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Aminopeptidase

H2N COOH

AM

INO

PE

PT

IDA

SE

DE

TE

CT

EU

R

Page 17: TD 5 : LES AMINOACIDES BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Aminopeptidase

H2N COOH

AM

INO

PE

PT

IDA

SE

DE

TE

CT

EU

R

H2N

Page 18: TD 5 : LES AMINOACIDES BTS DIETETIQUE 1 TD DE BIOCHIMIE

Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Aminopeptidase

H2N COOH

AM

INO

PE

PT

IDA

SE

DE

TE

CT

EU

R

H2N H2N

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de N-terminal

Aminopeptidase

H2N COOH

AM

INO

PE

PT

IDA

SE

DE

TE

CT

EU

R

H2N H2N H2N

METHODE RECURENTE

LENTE AVEC CERTAINS AA

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Exercice 6 : Séquence Mise en évidence de C-terminal

Carboxypeptidase

Dégradation de la protéine par le Ct

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Exercice 6 : Analyse peptide

DE

NA

TU

RA

TIO

N

Oxy

datio

n S–

S

TRYPSINE

CHIMOTRYPSINE

Arg ou Lys

Phe, Tyr, Trp

SEQUENCAGE

SEQUENCAGE

HYDROLYSE

TOTALE

Protéine

Acidesaminés

Ct

Nt

DéterminationNt et Ct