TR | Technicien biologiste profil n° : TR07-GAP-4

emploi-type n°: A4B03

Angers concours : TRA04

Lieu du concours : Nantes

::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: FICHE DE PROFIL || CONCOURS EXTERNES INRA 2007 :::::::

Le technicien biologiste, dans le cadre d’un protocole établi, applique les techniques de la biologie pour l’obtention et l’étude d’échantillons.

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n°BAP : A | Sciences du Vivant

Département : Génétique et Amélioration des plantes

unité n° 1259 | Unité Mixte de Recherche GenHort (INRA/INH/Université d'Angers)

Lieu de travail (si différent) :

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personne(s) à contacter : Mme LORIDON 02.41.22.57.52

Mme CHEVREAU 02.41.22.57.77

Environnement :

Le technicien exercera son activité au sein de l'équipe "transgenèse-fruits" de l'Unité Mixte de Recherche (UMR) Génétique et Horticulture, qui comprend un autre technicien et un adjoint technique. Il/elle travaillera sous la responsabilité de Mme Loridon (Ingénieur d'Etudes) et de Mme Chevreau (Directeur de Recherche) dans le cadre de programmes de transgenèse sur arbres fruitiers destinés d'une part à mieux comprendre les interactions plantes/pathogènes et d'autre part à améliorer les méthodes de transfert de gènes. Il/elle s'impliquera principalement dans l'analyse moléculaire des transgènes et la préparation de nouvelles constuctions génétiques. Il/elle contribuera également aux expériences de transformation génétique et à l'entretien du matériel végétal in vitro, ainsi qu'aux observations sur plantes en serre. De plus, dans le cadre de la démarche Assurance Qualité en Recherche, il/elle prendra part aux activités collectives du groupe de travail "biologie moléculaire".

Activités :

Réaliser, à partir de protocoles définis, des expériences de collecte, de préparation et d'analyse utilisant les techniques de biologie moléculaire et de biologie cellulaire. Tenir un cahier d'expériences, rassembler les résultats, les mettre en forme et en rendre compte. Se former à la mise en œuvre des nouvelles techniques dans l'équipe et initier les utilisateurs. Actualiser le dossier de protocoles techniques. Consulter et exploiter une documentation technique. Appliquer, en situation de travail, les règles d'hygiène et sécurité, et celles spécifiques au travail sur les organismes génétiquement modifiés (OGM).

Compétences :

Connaître les bases de la biologie, en particulier la biologie moléculaire et cellulaire et la génétique. Maîtriser dans le cadre d'une utilisation de routine les techniques de biologie moléculaire employées pour l'analyse de l'expression de transgènes (clonage, extraction d'acides nucléiques, PCR, RT-PCR, Q-PCR, Western…) Avoir une connaissance opérationnelle de l'appareillage utilisé et des techniques qu'il requiert (thermocycleurs, incubateurs, Q-PCR…). Savoir utiliser les logiciels liés aux techniques expérimentales (analyses de séquences, définition d'amorces) et à la présentation des résultats. Connaître les risques chimiques et biologiques liés aux produits, matériels et techniques utilisés ainsi que la réglementation concernant les OGM ; les transposer en situation de travail. Savoir situer son intervention dans une procédure plus large et collaborer avec les autres intervenants.

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2007 | conception et réalisation : DRH & PSI

Capacités personnelles :

Diplôme réglementaire minimum exigé : baccalauréat. Expérience souhaitée dans le domaine de la biologie moléculaire et des autres activités de laboratoire. Capacités d'initiative et d'organisation. Capacité d'apprendre des méthodes et techniques nouvelles. Goût pour le travail en équipe. Connaître l'anglais technique du domaine.

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TR | Technicien biologiste profil n° : TR07-SA-4

emploi-type n°: A4B03

Nantes concours : TRA04

Lieu du concours : Nantes

::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: FICHE DE PROFIL || CONCOURS EXTERNES INRA 2007 :::::::

Le technicien biologiste, dans le cadre d’un protocole établi, applique les techniques de la biologie pour l’obtention et l’étude d’échantillons.

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n°BAP : A | Sciences du Vivant

Département : Santé Animale

unité n° 1034 | Unité Mixte de Recherches INTERACTIONS HOTE-PARASITE-MILIEU

Lieu de travail (si différent) :

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personne(s) à contacter : M. CHAUVIN 02 40 68 76 98/77 71

Environnement :

L'activité s'exercera au sein de l'Unité Mixte de Recherche Ecole Nationale Vétérinaire de Nantes-INRA 1034, sous l'autorité directe du Directeur d'unité en relation avec les différents chercheurs (3), enseignants-chercheurs (4) et Ingénieurs et Techniciens Administratifs (4) de l'unité pour les différents protocoles faisant appel aux élevages de tiques. A certaines périodes, les protocoles expérimentaux nécessitent une présence le week-end. Une partie du travail nécessite la manipulation de vertébrés vivants (gerbilles, lapins, moutons) ou d'acariens (tiques). L'agent sera amené à caractériser la diversité génétique des tiques à l'aide de marqueurs moléculaires (microsatellites, AFLP, séquence nucléotidiques …). Il(elle) gérera un élevage de tiques au laboratoire (mise en place et entretien de lignées). Il(elle) devra réaliser et suivre des infections expérimentales de tiques par des protozoaires ou des bactéries, quantifier et localiser les agents pathogènes à l'aide d'outils moléculaires (PCR quantitative, hybridation in situ...).

Activités :

Réaliser, à partir de protocoles définis des expériences de préparation et d'analyse utilisant un ensemble de techniques d'un domaine : cultures, dosages biologiques et/ou biochimiques... Tenir les cahiers d'expérimentation, enregistrer les données, rassembler, mettre en forme les résultats. Actualiser et rédiger des fiches de protocoles techniques. Contrôler les conditions environnementales. Consulter les données bibliographiques dans le domaine. Assurer la gestion des commandes et le bon fonctionnement des appareils. Appliquer les règles d'hygiène et sécurité liées à la manipulation d'agents pathogènes potentiellement tranmissibles à l'Homme.

Compétences :

Avoir des connaissances générales en biologie Maîtriser les techniques de base en biologie moléculaire, les appareils utilisés (extraction d'ADN, PCR, PCR-RLFP, PCR quantitative …) et les outils informatiques associés (traitement de données, analyse de séquences …). Connaître les risques chimiques et biologiques et la réglementation liés à la manipulation d'agents pathogènes potentiellement zoonotiques.

Capacités personnelles :

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2007 | conception et réalisation : DRH & PSI

Diplôme réglementaire minimum exigé : baccalauréat. Formation recommandée : biologie, biologie moléculaire. Expérience sur les élevages d'invertébrés serait appréciée. Niveau de base en anglais et en informatique (Word, Excel) souhaitée. Formation en expérimentation animale (pouvant être acquise après recrutement) appréciée. Excellentes aptitudes au travail en équipe et à se former à de nouvelles techniques et méthodologies. Respect des règles de fonctionnement d'hygiène, sécurité et qualité. Connaissance des bases de l'anglais scientifique.

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CONCOURS EXTERNES ITA 2007

TECHNICIEN DE LA RECHERCHE

TR A04

TECHNICIEN BIOLOGISTE

EPREUVE ECRITE

Date : 1er

juin 2007

Durée de l’épreuve : 3 heures

Coefficient 3

Seul l’usage d’une calculatrice non programmable et d’un dictionnaire

d’anglais/français est autorisé.

Ce document est conçu pour que vous répondiez dans les espaces disponibles

après chaque question.

Ne rajoutez pas de feuille supplémentaire.

Ne pas porter de signe de reconnaissance sur les documents.

Merci de veiller à éteindre vos téléphones portables.

Composition de l’épreuve :

Barème

1. QCM 40 points

2. Questions à réponses brèves 40 points

3. Exercice d’organisation 40 points

4. Compréhension 30 points

5. Problème au choix 50 points

2

1. QCM (noté sur 40 points)

1 point par question si et seulement si toutes les réponses exactes sont données.

Temps conseillé : 30 minutes

Cochez la ou les cases correspondant aux bonnes réponses ou, le cas échéant, affectez-leur un

numéro d’ordre.

1. l’INRA est un :

� Etablissement Public à Caractère Administratif

� Etablissement Public à Caractère Industriel et Commercial

� Institut Technique Agricole

� Etablissement Public à Caractère Scientifique et Technologique

2. l’INRA a été fondé en :

� 1980

� 1946

� 1919

� 1958

3. quel(s) outil(s) informatique(s) sert (servent) à rechercher des homologies de séquence ?

� BLAST

� WEBCUTTER

� CARTHAGENE

4. l’écart type est :

� la racine carrée de la moyenne

� la racine carrée de la variance

� la somme des carrés des écarts à la moyenne

� le carré de la somme des écarts à la moyenne

5. le code génétique est dit dégénéré car :

� toute l’information ne se transmet pas à la descendance

� plusieurs codons correspondent à un acide aminé

� plusieurs acides aminés correspondent à un codon

6. une nanomole correspond à :

� 10-3

mole

� 10-9

mole

� 10-6

mole

� 10-12

mole

3

7. parmi ces produits, lequel est (lesquels sont) utilisé(s) en PCR quantitative ?

� SYBR Green

� DAPI

� TaqMan

� SYBR Safe

8. un gel d’acrylamide en conditions dénaturantes permet de séparer les protéines suivant

leur :

� charge

� masse moléculaire

� masse moléculaire et leur charge

9. quel est le matériel qui vous donne la meilleure précision pour mesurer 39 µl ?

� une micro pipette P1000

� une micro pipette P100

� deux pipetages avec une micro pipette P20

10. mettez dans l’ordre, de 1 à 6, les principales étapes d’une analyse RFLP :

� digestion enzymatique

� autoradiographie

� hybridation

� électrophorèse

� extraction d’ADN

� transfert

11. une puce à ADN est un :

� composant électronique d’un séquenceur automatique

� insecte transgénique vecteur d’un virus à ADN

� support miniaturisé pour ADN

� transposon

12. parmi les activités suivantes, quelles sont celles qui sont strictement interdites dans les

zones de manipulation de laboratoire :

� rentrer des données dans un ordinateur

� manger

� écouter la radio

� utiliser des produits cosmétiques

� boire

� fumer

� rédiger le cahier de laboratoire

� établir un protocole

13. pour quelle(s) manipulation(s) un agrément (autorisation) officiel est-il requis ?

� culture de protoplastes

� culture d’OGM

� immunisation de souris

� inoculation avec un organisme de quarantaine

4

14. quel est, environ, le nombre d’agents fonctionnaires à l’INRA

� 540

� 2940

� 8940

� 17040

15. on prélève 100 mL d’une solution mère à 1 g/L de glucose à laquelle on ajoute 400 mL

d’eau distillée ; on obtient une solution à :

� 100 ml/L

� 200 mg/L

� 300 mg/L

� 400 mg/L

16. pour stériliser une solution par filtration vous choisissez un filtre de porosité

� 1,22 µm

� 0,45 µm

� 0,22 µm

17. un antibiotique agit principalement sur les :

� cellules animales

� virus

� bactéries

� bactériophages

18. comment appelle-t-on la partie d’un antigène reconnue par un anticorps ?

� épiphyse

� radical

� épitope

� noyau

19. parmi les espèces suivantes, cocher celle (s) qui est (sont) une (des) rosacée (s) :

� amandier

� poirier

� églantier

� noyer

20. on doit préparer 1 L d’une solution de NaCl à 0,5 M (PM = 58,44 g/mole) ; quelle quantité

de NaCl doit-on peser ?

� 29,22 g

� 2,922 g

� 5,844 g

� 58,44 g

5

21. on réalise un clonage dans un plasmide de type pUC. Après transformation d’une souche

bactérienne d’Escherichia coli, les colonies portant le plasmide recombinant, cultivées en

présence d’IPTG et de X-Gal sont :

� noires

� translucides

� bleues

� blanches

22. une mutation dans l’ADN d’un gène se traduit toujours par un changement d’acide aminé

dans la protéine correspondante :

� vrai

� faux

23. les phases de la division cellulaire (mitose) sont, dans l'ordre :

� anaphase, métaphase, télophase, prophase

� prophase, métaphase, anaphase, télophase

� métaphase, anaphase, télophase, prophase

24. un cycle parasitaire représente :

� les différentes étapes de la vie du parasite

� la périodicité d'infection d'un hôte par le parasite

� les différentes maladies occasionnées par le même parasite

25. après une migration de protéines sur un gel de polyacrylamide, vous avez réalisé un

transfert sur nitrocellulose ; vous avez réalisé un :

� southern-blot

� northern-blot

� eastern-blot

� western-blot

26. le bromure d’éthidium permet :

� de dénaturer l’ADN

� d’extraire les ARN des tissus

� de visualiser les acides nucléiques

� de dégrader spécifiquement l’ADN

27. qui ne produit pas de protéines de manière autonome ?:

� les bactéries

� les plantes

� les algues

� les virus

� les champignons

28. les chromosomes sont constitués :

� d’ADN seulement

� de protéines

� d’ADN et de protéines

� d’ADN et de lipides

6

29. une tique est un :

� arthropode

� insecte

� diptère

� arachnide

� acarien

30. lequel (laquelle) n'est pas dans une cellule :

� le réticulum endoplasmique

� la mitochondrie

� le stomate

� l'appareil de Golgi

� le ribosome

31. une zoonose est :

� une maladie qui sévit dans une zone géographique définie et limitée

� une maladie qui se transmet de l'animal à l'homme et vice versa

� une partie d'un parasite qui provoque des réactions immunitaires

� une maladie qui ne se transmet qu'entre les animaux d'une même espèce

32. quelle est la molécule qui contient les gènes :

� l'ARN

� l'ADN

� les protéines

� les anticorps

33. la conservation à long terme d’une souche bactérienne s’effectue dans :

� un milieu de culture additionné d’antibiotique à 4°C

� un milieu de culture à –20°C

� un milieu de culture à –80°C

� un milieu de culture additionné de glycérol à –80°C

34. un allèle est :

� un gène exprimé

� une des formes d'un gène

� un gène réprimé

� un gène sur exprimé

35. un « crossing-over » est :

� un échange de chromosomes

� un échange de segments de chromatides entre chromosomes

� une technique de biologie moléculaire

36. le sigle PAC signifie :

� Programme Agricole Commun

� Politique d’Aide aux Communes

� Programme d’Aide Communautaire

� Politique Agricole Commune

7

37. le mur de Berlin a été démoli en :

� Mai 1968

� Décembre 1989

� Juin 1961

� Février 1993

38. pour transformer une plante avec un gène, on peut :

� l'infecter par un micro-organisme qui transmet le gène

� utiliser une amorce du gène transférée sous vide dans les cellules

� utiliser un pistolet envoyant des billes recouvertes par le gène sur des cellules

végétales

39. une culture d’E. coli en phase exponentielle a un temps de génération de 20 minutes. La

culture est à 5.105 cfu/mL. Quelle sera la densité de la culture dans 1 heure ?

� 8.105 cfu/mL

� 2.106 cfu/mL

� 4.106 cfu/mL

� 5.108 cfu/mL

40. quand a-t-on découvert l'ADN ?

� au XIXème

siècle

� au XVIIIème

siècle

� au XXème

siècle

8

2. Questions à réponses brèves (noté sur 40 points)

Temps conseillé 50 minutes

1. Citez 2 modes de transformation de bactéries compétentes : (1 point)

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2. Au choix : (4 points)

Donnez la définition, les principales caractéristiques et, en quelques mots-clés les étapes :

- de la technique d’AFLP

OU

- de l’obtention de marqueurs microsatellites

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3. Quelles sont les 3 étapes d’une PCR ? (1 point)

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4. Quels sont les différents types d’ARN ? A partir de quel(s) type(s) peut-on obtenir un ADN

complémentaire ? Par quelle enzyme ? (2 points)

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5. Vous disposez d’une centrifugeuse avec un rotor à angle fixe de 6 places. Vous avez 3

tubes de même poids à centrifuger. Comment équilibrez-vous le rotor ?

Répondez sous forme de schéma. (1 point)

6. Quel est le poids sec d’une graine, sachant que son poids frais est de 2 g et sa teneur en eau

de 23,5% ? (1 point)

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7. Définir les termes de biologie cellulaire suivants : (2 points)

Transcription :

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Traduction :

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8. Qu’est-ce que le phénotype d’un individu ? (1 point)

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9. Qu’est-ce que le génotype d’un individu ? (1 point)

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10. La masse molaire du TRIS est égale à 121,1 g. Quelle masse de ce composé doit-on peser

pour préparer 0,1 litre de solution à 0,1 M ? (1 point)

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11. Convertir : (3 points)

En gramme : 800 cm3 d’eau

En mg/mL : 150 ng/µL

2,7 mg en µg :

100 µg en mg

5 mL en µL

0,1 g/L en mg/mL

12. Vous devez préparer le plus précisément possible 100 mL de solution. Quelle verrerie de

laboratoire devez vous utiliser ? (1 point)

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13. Qu’est-ce qu’une gamme étalon ? (1 point)

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14. Proposez un mode de stérilisation pour chaque élément suivant : (2 points)

- un Erlen en verre : -

- 2 litres de milieu de culture : -

- 5 mL d’une solution de vitamines : -

- des outils de chirurgie : -

15. Quels sont les grands axes des recherches menées à l’INRA de Nantes OU Angers ?

(3 points)

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16. Pour faire une PCR, vous recevez un oligonucléotide sous forme de lyophilisat. La

quantité synthétisée est de 180,6 µg ou 30,3 nanomole. Quelle quantité d’eau ultra-pure (en

µl) devez-vous ajouter pour obtenir une solution de cet oligonucléotide à 100 µM ? (1 point)

- µl

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17. Que faut-il faire avant de manipuler un produit que l’on n’a jamais utilisé auparavant ?

(2 points)

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18. Vous préparez un milieu de culture. Indiquez précisément comment prendre le pH de ce

milieu (pH initial attendu aux environs de 7,0 ) puis comment le corriger pour obtenir un pH

de 5,7 : (2 points)

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19. Indiquez pour chaque pictogramme la signification du danger encouru : (3 points)

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20. Quelles sont les différences entre une cellule animale et une cellule végétale ? (1 point)

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21. Citer deux maladies des plantes que vous connaissez et le pathogène correspondant.

OU

Citer deux maladies animales ou humaines transmises par un vecteur arthropode. (2 points)

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22. Vous devez manipuler les produits indiqués dans le tableau ci-dessous. Indiquez, en

cochant les cases correspondantes, ce qu’il convient d’utiliser pour vous protéger et/ou

travailler dans les conditions rigoureuses de manipulation. (4 points)

Masque Poste de Sécurité

microbiologique

Sorbonne ou

hotte

aspirante

Gants

(appropriés au

produit)

Lunettes de

protection

Culture bactérienne

β-mercaptoéthanol Dodécyl sulfate de

sodium (SDS)

Cristaux de soude Chloroforme BET Azote liquide Tampon Tris-HCl

13

3. Exercice d’organisation (noté sur 40 points) Temps conseillé 40 minutes

Planification du travail pour une semaine-type.

Votre responsable scientifique vous a donné une série de tâches à réaliser sur la semaine et

vous devez par ailleurs effectuer un certain nombre de tâches de façon récurrente et à

intervalle régulier. En cas d’absence, un collègue effectuera à votre place les tâches

quotidiennes obligatoires.

Liste des tâches à effectuer :

� Effectuer cette semaine une demande de devis pour un matériel tombé en panne (1 h

30)

� Gaver les souris chaque jour (30 min)

� Effectuer chaque jour à la même heure une série de mesures de poids et de fécondité

dans l’élevage juste avant de les gaver (30 min)

� Réaliser cette semaine l’inventaire des produits à commander (produits chimiques et

de culture cellulaire) pour l’expérience de la semaine 50 : vérification des stocks et des

dates de péremption, faire un tableau sous Excel (2 h 30)

� Euthanasier 20 souris et récupérer les œufs fécondés le lundi matin (1 h 30)

� Micro-injecter les œufs (100-200) le lundi après-midi (2 h)

� Réimplanter les œufs le mardi matin (2 h)

� Rédiger, lorsque le planning le permet, des fiches techniques simplifiées pour des

appareils utilisés au laboratoire (1 h par fiche)

� Participer à une réunion hebdomadaire le mercredi matin à 10 h (1 h)

� Absence le jeudi

� Préparer de la verrerie pour stériliser (30 min)

� Changer les cages des souris le vendredi des semaines paires (2 h 30)

� Réaliser les injections d’hormones le vendredi des semaines impaires (1 h)

� Extraction d’ADN (1 h 30)

� Formation d’un stagiaire sur les techniques que vous maîtrisez (3 h 30)

� Lancer une culture de cellules en fin de semaine (3 h)

� Chaque jour, remplir le cahier de laboratoire (15 min)

� Rédiger les consignes pour Adèle (30 min)

1. A partir de la liste de tâches qui vous est fournie, remplissez votre planning

hebdomadaire ci-joint. Les tâches ne peuvent pas être morcelées. (Reportez

uniquement les mots en caractères gras pour chaque tâche mentionnée).

2. Pendant votre absence, quelles consignes laisserez-vous (sous forme de tableau) à

votre collègue Adèle, chargée de vous remplacer ?

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Votre planning hebdomadaire Semaine 42

LUNDI MARDI MERCREDI JEUDI VENDREDI

9h

9h30

10h

10h30

11h

11h30

12h

12h30

13h45

14h15

14h45

15h15

15h45

16h15

16h45

17h15

17h30

Consignes à Adèle

Tâche Durée Heure

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4. Compréhension (noté sur 30 points)

Temps conseillé 20 minutes

The procedure is as follows: Grow a 1.5 mL culture overnight under selective conditions and

harvest the cells in a microfuge (5000 g, 5 min).

After re-suspending the pellet in 100 µL of STET (8% sucrose, 50 mM Tris pH 8.0, 50 mM

EDTA, 5% Triton X-100), add 0.2 g of 0.45 mm glass beads, and vortex the tube vigorously

for 5 min. Following addition of another 100 µL of STET, vortex the tube briefly and place it

in a boiling water bath for 3 min. Cool briefly on ice and spin in a microfuge for 10 min at

4°C.

Transfer 100 µL of the supernatant to a fresh tube containing 50 µL of 7.5 M ammonium

acetate, incubate at –20°C for 1 h, and centrifuge for 10 min at 4°C. (At this stage, residual

chromosomal DNA, large RNA species, and the putative impurities which inhibit E. coli

transformation are precipitated). Add 100µL of the supernatant to 200 µL of ice-cold ethanol,

and recover the DNA by centrifugation. Wash with 70% ethanol, and re-suspend pellet in 20

µL of water. Use 10 µL of this solution to transform competent bacteria.

1. établir la liste complète des produits et des appareils nécessaires à la réalisation du

protocole décrit ci-dessus.

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2. établir une fiche résumé du protocole (il ne s’agit pas d’une traduction du texte mais

d’une note de travail)

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5. Problème (noté sur 50 points)

En fonction du profil auquel vous postulez, vous répondrez au

problème correspondant. Pour les candidats se présentant sur plusieurs profils, le choix du sujet

n'influera pas sur la décision finale du jury.

Temps conseillé 40 minutes

Problème 5A

Questions de culture générale

1) Quels sont, selon vous, les risques potentiels liés à la dissémination de plantes

génétiquement modifiées (PGM) ?

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2) Quels sont, selon vous, les risques potentiels liés à la dissémination de bactéries

porteuses de gènes de résistance aux antibiotiques ?

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3) Connaissez-vous des alternatives à la sélection des plantes transgéniques par les

antibiotiques ?

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4) Parmi ces méthodes, quelles sont celles qui NE vous semblent PAS applicables à des

plantes à multiplication végétative ? Expliquez pourquoi

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5) Indiquez le principe et l’application du RNAi (ARN interférence)

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Exercice

Vous avez réalisé une expérience de transformation d’explants de pommier via une souche

d’Agrobacterium tumefaciens portant la construction ci-dessous dans le but de sur exprimer le

gène de la lactoferrine bovine.

Vous devez à présent analyser les plantes régénérées issues de cette transformation et

sélectionnées sur kanamycine. Décrivez de manière concise mais précise (en indiquant

notamment les amorces et endonucléases choisies) comment vous vous y prendriez pour :

1) vérifier que le génome des plantes régénérées contient le gène d’intérêt

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2) vérifier que le génome des plantes régénérées contient le gène de sélection

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= 200 pb

tnos t35S Lactoferrine p35S p35S npt II

PstI BamHI HindIII

EcoRI EcoRI EcoRI PstI

EcoRV XhoI

LactoF

LactoR

nptF

nptR

RB LB

p = promoteur t = terminateur

ClaI

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3) estimer le nombre de copies du gène d’intérêt dans le génome des plantes

transformées

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4) Estimer le nombre de copies du gène de sélection dans le génome des plantes

transformées

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5) Déterminer la taille de l’ADN de transfert

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6) D’après vos premières analyses moléculaires, le génome d’un des clones obtenus

semble bien contenir le gène de sélection, mais pas le gène d’intérêt. Quelles

hypothèses pouvez-vous formuler et quelles expériences allez-vous mettre en œuvre

pour les confirmer ou les infirmer ?

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OU

Problème 5B

Tiques : caractères morphologiques et biologiques, infection expérimentale

de tiques.

1. caractères morphologiques et biologiques des tiques.

a/ Compléter la légende du schéma suivant d’Ixodes ricinus femelle

b/ Ixodes ricinus est une tique dont le cycle biologique est triphasique : que signifie ce

terme ?

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c/ Sur quels animaux, les adultes d'I. ricinus se nourrissent-ils en milieu naturel ?

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d/ Citez une autre espèce de tique :

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2. Dans le cadre d'un projet de thèse, un doctorant et le chercheur qui l'encadre, souhaitent

évaluer le taux de transmission transovarienne d'une souche de Babesia divergens pour deux

lignées d'Ixodes ricinus dont vous assurez l'entretien. Pour cela, ils décident de réaliser une

expérience de gorgement artificiel avec du sang parasité à une parasitémie* de 1 à 2%. Ils

évalueront le taux de transmission en mesurant, par PCR avec des amorces spécifiques de B.

divergens, la proportion d’œufs infectés sur un échantillon des œufs pondus par la tique ; ils

souhaitent disposer de 30 pontes de tiques issues de chaque lignée. Ils vous demandent

d'organiser l'expérimentation.

Vous présenterez un planning prévisionnel des différentes manipulations à réaliser

impliquant les différents membres de l’équipe.

Informations complémentaires

1/ Le gorgement artificiel des tiques consiste à faire se nourrir les tiques dans un

dispositif visant à se substituer à l'hôte animal. Cela permet de plus de contrôler le repas

sanguin et notamment d'y introduire un agent pathogène pour infecter expérimentalement la

tique.

Pratiquement, les tiques sont introduites dans un appareil spécifique (‘gorgeur’) ;

celui-ci est schématiquement constitué :

- d'une chambre où sont introduite les tiques ; au maximum 20 tiques femelles

adultes peuvent être introduites en même temps ;

- d'une membrane (peau animale spécifiquement traitée) sur laquelle les tiques se

fixent ;

- d'une cellule contenant 2,5 ml de sang dans laquelle les tiques fixées puisent leur

repas.

Le sang doit être changé toutes les 12 ± 3 heures ; le changement du sang demande

environ 30 minutes pour 2 ‘gorgeurs’. Un gorgement complet de tiques adultes dure de 15 à

20 jours. Lorsque l'on souhaite infecter expérimentalement les tiques, le sang infecté est

reconstitué avec 1/3 de globules rouges parasités et 2/3 de plasma issu d'un animal sain (de la

même espèce que les globules rouges utilisés).

2/ Babesia divergens est un protozoaire des bovins cultivable in vitro sur hématies.

L'entretien des différentes souches est assuré par un autre technicien. La culture de la souche

choisie est réalisée en boîte de culture contenant 1 ml de globules rouges de bovin pour 40 ml

de milieu (RPMI + 20% de sérum de veau fœtal). Le milieu doit être renouvelé au minimum

tous les 2 jours. La parasitémie est multipliée par 10 en 3 jours. L'entretien des cultures est

réalisé par sous-cultures successives tous les 2, 3 ou 4 jours en diluant 50 à 100 µl d’hématies

de la culture parasitée dans une boîte de culture contenant 900 à 950 ml d’hématies saines. Le

changement de milieu de culture ou le repiquage demande de 30 à 45 minutes pour 4 boîtes.

Les hématies de bovin proviennent d'un animal hébergé en animalerie A2 ; le sang est prélevé

une fois par mois ; après préparation, il est stocké à +4°C en tube contenant 1/3 de globules

rouges et 2/3 de RPMI.

* parasitémie : proportion d'hématies parasitées dans un échantillon de sang ou de culture in

vitro.

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25

CONCOURS TRA04 : TECHNICIEN BIOLOGISTE

EPREUVE ORALE

Temps de préparation : 15 minutes

Durée : 25 minutes ; coefficient : 3

Question à préparer par les candidats :

Veuillez indiquer aux membres du jury en quoi votre formation et/ou votre expérience vous

permet(ent) d’être en adéquation avec le ou les profil(s) auquel (auxquels) vous postulez.

Temps de l’exposé devant le jury : 5 minutes (inclus dans les 25 minutes)