VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION...de ces 3 matrices. Ces essais nous montreront également si la méthode est applicable, du point de vue de l'effet de matrice, à des types

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE

LABO: LFSAL SECTIE - SECTION: PHYTO / RESIDUS

Datum laatste aanpassing

Date de la dernière adaptation

GC-FID

Pain

3/12/2012

MET-LFSAL-122

Détermination de la teneur en acide propionique et ses sels dans le pain.

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Analysemethode

Méthode d’analyse

Techniek

Technique

Matrix / matrixgroep

Matrice / Groupe de matrices

LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-11-28 Page 1/87



● Résumé des critères de performance :

pain

250 à 4000 mg/kg

linéaire

5

± 10 %

7,4 %

± 0,9 %

0,5 %

entre 80 et 110 %

95,3 %

107,7 %

101,7 %

non significativement

différent

250 mg/kg LOQ

125 mg/kg LOD

7,9 mg/kg

67,8 mg/kg

73,5 mg/kg

16,2 mg/kg

102,2 mg/kg

371,8 mg/kg

7,83 %

7,00 %

12,04 %

● La validation répond aux exigences de la procédure LAB 00 P180.

Incertitude de mesure élargie

Domaine de validation

Etalonnage

Spécificité

Justesse

Répétabilité

Reproductibilité intra-

laboratoire

Rendement moyen obtenu

Matrice

Gamme de quantification

Modèle mathématique

Nombre de niveaux d'étalonnage

Critère sur l'étalonnage

Critère sur l'identification par temps de rétention

Ecart maximum observé sur le temps de rétention

Critère sur le rendement

Rendement le plus bas observé

Rendement le plus haut observé

Comparaison résultat avec laboratoire accrédité

Ecart maximum observé sur l'étalonnage

à 500 mg/kg

à 1000 mg/kg

à 3000 mg/kg

LOQ

LOD

à 500 mg/kg

à 1000 mg/kg

à 3000 mg/kg

à 500 mg/kg

à 1000 mg/kg

à 3000 mg/kg




: doit satisfaire à l’équation d’Horwitz.

● Historique de validation :

Edition Révision par/date Motif de la révision Modifications

1 De Tandt Thierry / 03/12/2012 Adaptation au nouveau

template

Adaptation au nouveau

template du dossier de

validation.

● Contenu :

Dossier de validation.

● Le laboratoire qui veut appliquer cette méthode doit démontrer que les critères

ci-dessous soient remplis pour les combinaisons matrices/paramètres :

Participation à un test interlaboratoire (ou comparaison avec un laboratoire

accrédité ; voir §8.2.2) et obtention de résultats corrects.

les contrôles décrits au §11.1 de la méthode doivent être

respectés (blanc méthode, droite d'étalonnage, échantillons dopés).




Naam – Nom : DE TANDT THIERRY

Functie - Fonction: EXPERT TECHNIQUE

Datum - Date: 13/11/2012

Handtekeningen - Signatures:

Sé

Naam-Nom : ETIENNE-THEWISSEN

Functie - Fonction: RESPONSABLE DE

SECTION

Datum - Date: 19/05/2011

Handtekeningen - Signatures:

Sé

Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure

LAB 00 P 180.

Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P

00 180.

Verantwoordelijke

Responsable

Naam-Nom : ETIENNE-THEWISSEN

Functie - Fonction: RESPONSABLE DE SECTION

Opgesteld door

Rédaction par

Functie - Fonction: EXPERT TECHNIQUE

- DE TANDT THIERRY (finalisation méthode, essais de validation et rédaction

dossier de validation)

- OFFERMANNE MARIE-CHRISTINE (essais de validation)

- DUPUCHE NATHALIE (essais de validation)

- MONISSE ISABELLE (essais de validation)

- ERVEN VINCIANNE (bibliographie, rédaction méthode et essais préliminaires)

Functie - Fonction: ASSISTANT TECHNIQUE :

- DELBROUCK STANY (essais de validation : partie préparation uniquement)

Start - Début: 09/05/2011

Einde - Fin: 19/11/2012

(adaptation au nouveau template de rapport de validation : 03/12/2012)

Medewerkers

Collaborateurs

Periode van validatie

Période de validation

Methode goedgekeurd en

geschikt bevonden door

Méthode approuvée et jugé

convenable pour la routine

par

MET-LFSAL-122

Détermination de la teneur en acide propionique et ses sels dans le pain.

GC-FID

Pain

Totale

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION

Analysemethode

Méthode d’analyse

Techniek

Technique

Matrix / matrixgroep

Matrice / Groupe de

matrices

Type validatie

Type de validation


1. Paramètres de validation

1.1 Plan de validation

1.2 Domaine de validation

1.3 Spécificité

1.4 LOD

1.5 LOQ

1.6 Etalonnage

1.7 Justesse

1.8 Répétabilité & reproductibilité

1.9 Incertitude de mesure

2. Plan de validation

2.1 Description

2.2 Tableau récapitulatif des essais

2.3 Matrices utilisées

3. Domaine de validation

4. Données brutes et résultats

5. Spécificité

6. LOD & LOQ

6.1 Détermination de la LOQ

6.2 Détermination de la LOD

6.3 Aspect pratique de la LOD et de la LOQ

7. Etalonnage

8. Justesse

8.1 A partir des rendements sur matrices blanches dopées

8.2 A partir de matrices non blanches (série n°5)

9. Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire

9.1 Niveau : 1000 mg/kg



10. Incertitude de mesure




11. Conclusion

DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDE PROPIONIQUE ET

SES SELS DANS LE PAIN PAR GC-FID (MET-LFSAL-122)

Table des matières

Dossier de validation de la méthode analytique :



1.1 Plan de validation

Le plan d'expérience des essais de validation sert à estimer, dans les conditions où le mode opératoire sera

appliqué en routine, quelles sont les performances de la méthode. Celui-ci devra définir le nombre de séries

et d'essais par série. Le nombre minimum de séries est fixé à 3 et au minimum 3 essais par série. La

validation sera réalisée sur une ou des matrices représentatives des échantillons de routine. Dans le cas

d'une méthode multi-matrices, la validation pourra être réalisée sur une matrice constituée des sous-

matrices.

1.2 Domaine de validation

Le domaine de validation de la méthode sera caractérisé par la gamme de concentrations où la méthode

aura été validée et les matrices analysées.

1.3 Spécificité

En fonction de la technique analytique, la spécificité d'une méthode peut être appréciée sur base du temps

de rétention, de la spécifité avec un réactif, d'un spectre UV ou de masse,....

1.4 LOD

La limite de détection de la méthode sera égale la teneur de l'analyte dans la matrice qui donnera, en suivant

le mode opératoire de la méthode, une réponse analytique correspondant à la moitié de celle du plus petit

niveau d'étalonnage.

1.5 LOQ

La limite de quantification de la méthode sera égale la teneur de l'analyte dans la matrice qui donnera, en

suivant le mode opératoire de la méthode, une réponse analytique correspondant à celle du plus petit niveau

d'étalonnage.

1.6 Etalonnage

L'étalonnage est réalisé avec un minimum de 5 niveaux. Lors du calcul de la courbe d'étalonnage, le rejet

d’un des niveaux est autorisé à condition que cela ne soit ni le premier ni le dernier. Le modèle de réponse

sera soit linéaire, soit quadratique. La validité de la courbe d'étalonnage est évalué sur la correspondance

entre la valeur mesurée et la valeur théorique de chaque niveau d'étalonnage sur base d'un écart maximum

de 10 %.

1.7 Justesse

L'écart entre la récupération moyenne de chaque série déterminée expérimentalement sur un CRM et lors

de la validation et la valeur théorique doit se situer dans les limites suivantes en fonction des concentrations :

Justesse minimale des méthodes quantitativesJournal officiel des Communautés européennes

DÉCISION DE LA COMMISSION du 12 août 2002

portant modalités d’application de la directive 96/23/CE du Conseil en ce qui concerne les performances des méthodes d’analyse et

l’interprétation des résultats

(2002/657/CE)

Note : Lorsqu'aucun matériau de référence n'est disponible, la justesse des mesures est évaluée par la

récupération d'ajouts de quantités connues de l'analyte ou des analytes à un blanc matrice .



La justesse peut aussi être évaluée grâce à la participation à des tests interlaboratoires ou, à défaut, par la

comparaison des résultats d'échantillons analysés à la fois par le laboratoire et par un laboratoire tiers

accrédité pour le couple paramètre/matrice concerné.

1.8 Répétabilité & reproductibilité intra-laboratoire

La répétabilité et la reproductibilité intra-laboratoire sont calculées à partir de minimum 3 séries de 3 essais

réalisées sur des matrices contenant "naturellement" l'analyte recherché. Pour être dans les conditions de

reproductibilité intra-laboratoire, il faut faire varier au moins un paramètre (analyste, jour, appareil,...) d'une

série à l'autre.

La répétabilité et la reproductibilité doivent être déterminés à différents niveaux, par exemple à ceux

correspondant aux normes légales en vigueur.

Critère d'évaluation : vérifier que le %RSDr et/ou le %RSDRW calculés sont inférieurs ou égaux aux valeurs

maximales admissibles découlant de l'équation d'Horwitz.

1.9 Incertitude de mesure

L'incertitude de mesure de la méthode est calculée sur base de la fidélité intermédiaire dans le cas où les

résultats analytiques sont corrigés par le rendement ou de l'approche TOP-DOWN s'il n'y a pas de correction

par le rendement sur le résultat analytique. Elle doit être déterminée à différents niveaux, par exemple à

ceux correspondant aux normes légales en vigueur.


2.1.1 Plan original

2.1.2 Essais complémentaires suite à l'audit interne

2.1.3 Essais complémentaires suite à l'audit Belac

Ces séries (n°6 à 9) ont été effectués en faisant varier les paramètres jour et analyste.


La validation de la méthode a été réalisée sur 4 séries de 6 essais à la norme la plus stricte, à savoir un

maximum autorisé de 1000 mg/kg dans les pains préemballés (la norme la plus élevée est à 3000 mg/kg dans

le cas de pains préemballés découpés). Les essais ont été effectués sur des petits pains type sandwich

préemballés, en faisant varier les paramètres jour et analyste.

Ce plan de validation répond donc aux exigences présentées au point 1.1 Plan de validation.

Suite à l'audit interne du 25/05/2011 d'Alain Dubois, une cinquième série d'essai a été réalisée sur 3 matrices

(pain toast, pain pita et pain burger) supposées non blanches (l'emballage indique la présence de propionate

de calcium), afin d'évaluer l'efficactité de l'extraction.

Cette évaluation a été faite à la fois de manière qualitative et quantitative.

D'un point de vue qualitatif, si l'extraction a bien lieu, on doit retrouver un pic d'acide propionique pour chacune

de ces 3 matrices. Ces essais nous montreront également si la méthode est applicable, du point de vue de

l'effet de matrice, à des types de pain très différents.

D'un point de vue quantitatif, si l'extraction est efficace (le reste de la méthode ayant été précédemment

validé), notre résultat doit concorder avec celui d'un laboratoire accrédité pour le dosage de l'acide propionique

dans le pain. Pour ce faire, nous avons fait analyser une aliquote (un demi pain) d'une de ces 3 matrices par

le laboratoire SGS Belgium (Agro Food Services). Cet essai, à défaut d'avoir trouvé un CRM ou un test

interlaboratoires, nous permettra de vérifier la justesse de la méthode sur une autre base que les rendements

d'échantillons dopés.

Suite à l'audit Belac du 01/06/2011, 4 séries d'essais supplémentaires ont été réalisées afin d'une part, de

déterminer une incertitude de mesure à 3000 mg/kg (4 x 6 dopés à 3000 mg/kg) et d'autre part, afin de

déterminer la répétabilité et la reproductibilité de la méthode aux 2 niveaux correspondant aux normes légales

(1000 et 3000 mg/kg).

2.1 Description

La matrice utilisée pour déterminer l'incertitude de mesure à 3000 mg/kg sont des sandwiches préemballés

(matrice blanche que l'on a dopé à 3000 mg/kg).

La matrice utilisée pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité à 1000 mg/kg est du pain complet dont

la teneur "naturelle" est équivalente à ce niveau.

La matrice utilisée pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité à 3000 mg/kg est du pain toast dont la

teneur "naturelle" est équivalente à ce niveau.


2.1.4 Essais complémentaires suite à la nouvelle procédure de validation de méthode.

Ces séries (n°10 à 12) ont été effectuées en faisant varier les paramètres jour et analyste.

Selon la nouvelle procédure de validation de méthode (LAB-00-P-180-Validation méthodes analyse v02 -

15/03/2012), il faut réaliser les essais de validation à 3 niveaux de concentration, généralement à 1/2 fois, 1

fois et 2 fois la norme. Comme des essais de validation ont déjà été réalisés à 2 niveaux (correspondant aux

2 normes de 1000 et 3000 mg/kg), nous avons décidé de réaliser des essais complémentaires à 1/2 fois la

norme la plus petite, soit au niveau de 500 mg/kg.

Trois séries d'essais supplémentaires ont donc été réalisées pour déterminer la répétabilité, la reproductibilité

et l'incertitude de mesure à 500 mg/kg (3 x 6 dopés à 500 mg/kg).


Ne disposant pas de pain contenant "naturelllement" cette teneur en acide propionique, la matrice utilisée sont

les mini-sandwiches préemballés Carrefour (matrice blanche) que l'on a dopés à 500 mg/kg. Il s'agit des

mêmes sandwiches qu'utilisés lors des séries de validation précédentes (6 à 9) que nous avions conservés au

congélateur.


Série n° Date Analyste blanc méthode matrice non dopé dopé New Cal. Nbre level Contrôles

1 09/05/2011 Dupuche Nathalie OUI 3 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

2 10/05/2011 De Tandt Thierry NON* 1 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

3 12/05/2011 Monisse Isabelle OUI 1 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

4 12/05/2011 Stany Delbrouck** OUI 1 6 (+1000 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

Toast (~3000 mg/kg) 3 3 (+1000 mg/kg)

Burger (~1700 mg/kg) 2 -

Pita (~1250 mg/kg) 2 -

sandwiches (matrice blanche) 1 6 (+3000 mg/kg)

Toast (~3000 mg/kg) 3 -

Pain complet (~1000 mg/kg) 3 -


Toast (~3000 mg/kg) 3 -





Toast (~3000 mg/kg) 3 -

10 10/10/2012 De Tandt Thierry OUI 0 6 (+500 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

11 06/11/2012 M-C Offermanne OUI 0 6 (+500 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

12 19/11/2012 M-C Offermanne OUI 0 6 (+500 mg/kg) OUI 5 1ère ligne

* oubli. ** partie préparation uniquement, la partie GC étant réalisée par De Tandt Thierry.

1ère ligne9 22/06/2011Marie-Christine

OffermanneOUI OUI 5

OUI 5

1ère ligne

8 20/06/2011 De Tandt Thierry OUI OUI 5 1ère ligne

7 17/06/2011Marie-Christine

OffermanneOUI OUI 5

sandwiches (matrice blanche)

sandwiches (matrice blanche)


2.2 Tableau récapitulatif des essais

1ère ligne

3ème ligne

6 17/06/2011 De Tandt Thierry OUI OUI 5 1ère ligne

5 26/05/2011Marie-Christine

OffermanneOUI


2.3.1 Matrice des séries n°1 à 4


La matrice utilisée pour les séries n°1 à 4 est du pain préemballé type sandwich (mini-sandwiches La

Lorraine).

2.3 Matrices utilisées

Cette matrice ne contenant pas d'acide propionique d'après nos essais (concordant avec la liste d'ingrédients

indiquée sur l'emballage), seule la première série comprend une répétition du dosage sur la matrice non

dopée. Les 3 séries suivantes ne comprenne qu'un seul essai non dopé.


2.3.2 Matrices de la série n°5

Les 3 matrices non blanches utilisées pour la série n°5 sont :

1) pain Toast Carrefour (contenant environ 3000 mg/kg)



2) pain Burger Carrefour (contenant environ 1700 mg/kg)



3) pain Pita Carrefour (contenant environ 1250 mg/kg)



2.3.3 Matrices des séries n°6 à 9

1) sandwiches Carrefour (matrice blanche)

2) pain Toast Carrefour (contenant environ 3000 mg/kg)



3) pain complet Boerkens (contenant environ 1000 mg/kg)



2.3.4 Matrice des séries n°10 à 12

Sandwiches Carrefour (matrice blanche)



Fiche technique du secteur "Transformation" comprenant le paramètre "Acide propionique"

3. Domaine de validation

La gamme de concentration couverte par la méthode correspond à des pains dont la teneur en acide

propionique se situe entre 250 et 4000 mg/kg, ceci afin de couvrir les 2 normes en vigueur, à savoir 1000

mg/kg pour les pains préemballés et 3000 mg/kg pour les pains préemballés et découpés.

Seule la matrice pain a été testée puisque c'est la seule actuellement visée par les contrôles de l'AFSCA

concernant le paramètre acide propionique. Toutefois, des pains préemballés de types très différents ont

pu être analysés avec cette méthode : pain complet, pain sandwich, pain toast, pain burger et pain pita.


Fiche technique du secteur "Distribution" comprenant le paramètre "Acide propionique"

3. Champ d'application


Pain Toast

Pain Burger


Remarquons ici qu'aucune des 5 matrices testées ne présente d'effet de matrice indésirable et que les

chromatogrammes obtenus sont assez semblables :


Pain Pita

Pain Sandwich (dopé à 1000 mg/kg)



Pain complet



Solutions Tps rét. Surface Tps rét. Surface quantité (mg)

L01 9,37 59256 7,64 4278 0,2792

L02 9,37 50900 7,62 7682 0,5177

L03 9,36 46000 7,61 15308 1,0687

L04 9,37 46772 7,61 31394 2,0941

L05 9,36 46876 7,60 66766 4,3758

C1 9,36 48146 7,62 9094 0,6327

C2 9,37 47293 7,61 45732 2,9903

blanc méthode* 9,36 40039 non détecté 0 0,0000

non dopé 1 9,36 41812 non détecté 0 0,0000



dopé 1 9,36 46356 7,61 15424 1,0685

dopé 2 9,37 45252 7,61 14559 1,0352

dopé 3 9,37 48338 7,62 15515 1,0329

dopé 4 9,37 45127 7,62 14565 1,0383

dopé 5 9,36 43246 7,61 14103 1,0485

dopé 6 9,36 43436 7,61 14209 1,0515

C1 9,36 44889 7,62 8352 0,6242

C2 9,36 47900 7,60 45870 2,9619

* Standard interne ajouté au blanc méthode par erreur.

Série n° 1 : données brutes

Acide propioniqueStandard interne

Données brutes des rapports d'injection :



108,4 mg

99,94 %

50 ml

2,1667 mg/ml

calculée mesurée écart (%) accepté0,2708 0,2792 3,1 oui

0,5417 0,5177 -4,4 oui

1,0833 1,0687 -1,4 oui

2,1667 2,0941 -3,4 oui

4,3334 4,3758 1,0 oui

250,3 mg

99,94 %

50 ml

5,0030 mg/ml

C1 (120 µl / 20 ml) : 0,6004 mg acide propionique pour 200 µl de la solution de SI


calculée mesurée écart (%) acceptéC1 0,6004 0,6327 5,4 oui

C2 3,0018 2,9903 -0,4 oui

C1 0,6004 0,6242 4,0 oui

C2 3,0018 2,9619 -1,3 oui

L4 : dilution 1000 µl / 20 ml

Préparation et contrôle de la droite de calibration :

pesée acide propionique (mg) :

pureté (%) :

volume :

concentration solution mère :


ac.propionique (mg)

pour 200 µl de SItolérance de 10 %

Série n° 1 : résultats des contrôles



Préparation des solutions de contrôle et suivi de la réponse :


pureté (%) :

volume :

ac.propionique (mg)






Concentration solution de dopage (mg/ml) : 5,0030

nature de l'échantillonsandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

numéro de l'échantillon dopé 1 dopé 2 dopé 3 dopé 4 dopé 5 dopé 6

prise d'essai (g) 4,93 4,90 4,89 4,90 4,86 4,90

volume de solution de dopage ajouté (ml) 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00

soit en acide propionique pur (mg) 5,0030 5,0030 5,0030 5,0030 5,0030 5,0030

Ac. Propionique (mg)* 1,0685 1,0352 1,0329 1,0383 1,0485 1,0515

Teneur mesurée dans l'échantillon dopé (mg/kg) 1083,7 1056,3 1056,1 1059,5 1078,7 1073,0

Teneur mesurée dans l'échantillon non dopé (mg/kg) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

donc il y a dans la PE avant dopage (mg) 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000

=> dans l'échantillon dopé, il y a en théorie (mg/kg) 1014,8 1021,0 1023,1 1021,0 1029,4 1021,0

Taux de récupération (%) 106,8 103,5 103,2 103,8 104,8 105,1

* Résultat donné par le GC en ayant introduit dans le logiciel les valeurs calculées pour L1 à L5 comme levels de calibration.

Série n° 1 : résultats des dopés


Solution de dopage = solution mère des solutions de contrôle



L01 9,36 46979 7,63 3156 0,2408

L02 9,36 41555 7,62 6198 0,4809

L03 9,36 39191 7,61 12162 0,9532

L04 9,36 41729 7,60 27047 1,9430

L05 9,36 40603 7,60 54047 3,9441

C1 9,36 43043 7,61 8421 0,6171

C2 9,36 39292 7,60 38670 2,9275

non dopé 9,36 38314 non détecté 0 0,0000

dopé 1 9,36 37139 7,61 11906 0,9832

dopé 2 9,36 37448 7,61 12108 0,9913

dopé 3 9,36 38338 7,61 12596 1,0066

dopé 4 9,36 38015 7,61 12050 0,9727

dopé 5 9,36 36513 7,61 11909 0,9996

dopé 6 9,36 38379 7,61 12413 0,9916

C1 9,36 41708 7,62 8127 0,6149

C2 9,36 41217 7,60 39959 2,8845



Standard interne Acide propionique



98,2 mg

99,94 %

50 ml

1,9628 mg/ml

calculée mesurée écart (%) accepté0,2454 0,2408 -1,9 oui

0,4907 0,4809 -2,0 oui

0,9814 0,9532 -2,9 oui

1,9628 1,9430 -1,0 oui

3,9256 3,9441 0,5 oui

247,2 mg

99,94 %

50 ml

4,9410 mg/ml




C2 2,9646 2,9275 -1,3 oui

C1 0,5929 0,6149 3,7 oui

C2 2,9646 2,8845 -2,7 oui




pureté (%) :

volume :



ac.propionique (mg)







pureté (%) :

volume :

ac.propionique (mg)








préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 4,88 4,92 4,90 4,91 4,89 4,90















L01 9,38 36307 7,65 2394 0,2433

L02 9,38 35581 7,64 4919 0,4668

L03 9,39 39668 7,64 11931 0,9690

L04 9,38 37107 7,63 22567 1,9192

L05 9,39 37607 7,62 47239 3,9218

C1 9,39 37530 7,64 6386 0,5654

C2 9,39 36662 7,63 34880 2,9799

blanc méthode non détecté 0 non détecté 0 0,0000


dopé 1 9,38 36037 7,63 11599 1,0342

dopé 2 9,38 35789 7,63 11065 0,9951

dopé 3 9,38 35458 7,63 11094 1,0065

dopé 4 9,38 36816 7,63 11176 0,9777

dopé 5 9,38 36990 7,63 11204 0,9756

dopé 6 9,38 35049 7,63 10854 0,9966

C1 9,38 38378 7,64 6539 0,5661

C2 9,37 36953 7,61 35075 2,9731






97,6 mg

99,94 %

50 ml

1,9508 mg/ml


0,4877 0,4668 -4,3 oui

0,9754 0,9690 -0,7 oui

1,9508 1,9192 -1,6 oui

3,9017 3,9218 0,5 oui

246,2 mg

99,94 %

50 ml

4,9210 mg/ml



calculée mesurée écart (%) acceptéC1 0,5905 0,5654 -4,3 oui

C2 2,9526 2,9799 0,9 oui

C1 0,5905 0,5661 -4,1 oui

C2 2,9526 2,9731 0,7 oui




pureté (%) :

volume :



ac.propionique (mg)







pureté (%) :

volume :

ac.propionique (mg)








préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,01 4,98 5,02 5,02 5,01 5,01















L01 9,37 37972 7,64 3132 0,2831

L02 9,37 36818 7,63 6310 0,5447

L03 9,37 35570 7,63 12840 1,1024

L04 9,37 35411 7,62 26907 2,2759

L05 9,37 34609 7,60 52985 4,5445

C1 9,37 34824 7,62 6720 0,6082

C2 9,37 34743 7,61 37263 3,1957



dopé 1 9,36 34165 7,62 11637 1,0425

dopé 2 9,36 33558 7,62 11731 1,0689

dopé 3 9,36 32970 7,62 11476 1,0644

dopé 4 9,37 33091 7,62 11410 1,0549

dopé 5 9,36 31929 7,62 10859 1,0409

dopé 6 9,36 33432 7,61 11354 1,0396

C1 9,36 37154 7,62 7046 0,5984

C2 9,37 35671 7,61 37491 3,1326






113,5 mg

99,94 %

50 ml

2,2686 mg/ml


0,5672 0,5447 -4,0 oui

1,1343 1,1024 -2,8 oui

2,2686 2,2759 0,3 oui

4,5373 4,5445 0,2 oui

259,8 mg

99,94 %

50 ml

5,1929 mg/ml




C2 3,1157 3,1957 2,6 oui

C1 0,6231 0,5984 -4,0 oui

C2 3,1157 3,1326 0,5 oui




pureté (%) :

volume :



ac.propionique (mg)







pureté (%) :

volume :

ac.propionique (mg)








préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 4,99 5,01 5,02 4,98 5,00 4,99















L01 9,32 40249 7,59 3036 0,2754

L02 9,32 37847 7,58 5694 0,5051

L03 9,31 34028 7,57 10680 1,0055

L04 9,31 38461 7,56 24180 1,9694

L05 9,32 34624 7,56 46391 4,1470

C1 9,31 40995 7,57 7124 0,5765

C2 9,32 41786 7,56 39687 2,9525


toast non dopé 1 9,31 33562 7,55 32329 2,9939

toast non dopé 2 9,31 36717 7,56 35203 2,9801

toast non dopé 3 9,31 37021 7,55 36027 3,0241

toast dopé 1 9,31 36459 7,55 49422 4,1950

toast dopé 2 9,31 40721 7,55 54191 4,1192

toast dopé 3 9,31 37527 7,55 50846 4,1930

C1 9,32 43009 7,57 7683 0,5914

C2 9,32 44368 7,56 42862 3,0025

burger non dopé 1 9,32 33957 7,57 18258 1,9607

burger non dopé 2 9,31 40110 7,56 21308 1,6710

pita non dopé 1 9,3 38362 7,56 15801 1,3057

pita non dopé 2 9,32 32310 7,57 12557 1,2344

C1 9,31 40415 7,57 7140 0,5854

C2 9,31 38341 7,55 37136 3,0101






102,6 mg

99,94 %

50 ml

2,0508 mg/ml


0,5127 0,5051 -1,5 oui

1,0254 1,0055 -1,9 oui

2,0508 1,9694 -4,0 oui

4,1015 4,1470 1,1 oui

258,8 mg

99,94 %

50 ml

5,1729 mg/ml




C2 3,1037 2,9525 -4,9 oui

C1 0,6207 0,5914 -4,7 oui

C2 3,1037 3,0025 -3,3 oui

C1 0,6207 0,5854 -5,7 oui

C2 3,1037 3,0101 -3,0 oui

pureté (%) :






volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



nature de l'échantillon et norme N° échantillonprise d'essai

(g)

Ac. Propionique

(mg)*

Teneur en Ac.

Propionique (mg/kg)

LOQ sur base du L1

(mg/kg)

pain toast (emballé tranché) toast non dopé 1 5,03 2,9939 2976,0254,8



pain burger (emballé tranché) burger non dopé 1 5,01 1,6907 1687,3255,8

pain burger (emballé tranché) burger non dopé 2 5,00 1,6710 1671,0256,3

pain pita (emballé) pita non dopé 1 5,14 1,3057 1270,1249,4

pain pita (emballé) pita non dopé 2 5,00 1,2344 1234,4256,3


Teneur moyenne du pain toast = 2981,5 mg/kg (valeur utilisée pour le calcul des rendements des dopés)


Série n° 5 : résultats des non dopés



nature de l'échantillonpain toast

(emballé tranché)

pain toast

(emballé tranché)

pain toast

(emballé tranché)

numéro de l'échantillon toast dopé 1 toast dopé 2 toast dopé 3

prise d'essai (g) 5,03 5,00 5,06

volume de solution de dopage ajouté (ml) 1,00 1,00 1,00

soit en acide propionique pur (mg) 5,1729 5,1729 5,1729

Ac. Propionique (mg)* 4,1950 4,1192 4,1930

Teneur mesurée dans l'échantillon dopé (mg/kg) 4170,0 4119,2 4143,3

Teneur mesurée dans l'échantillon non dopé (mg/kg) 2981,5 2981,5 2981,5

donc il y a dans la PE avant dopage (mg) 14,997 14,907 15,086

=> dans l'échantillon dopé, il y a en théorie (mg/kg) 4009,9 4016,0 4003,8

Taux de récupération (%) 104,0 102,6 103,5







L01 9,26 53761 7,52 3981 0,2662

L02 9,26 55648 7,52 8337 0,4900

L03 9,26 41912 7,52 13513 0,9997

L04 9,26 54059 7,51 35846 2,0059

L05 9,26 48347 7,50 66698 4,1219

C1 9,27 42043 7,53 42043 0,6242

C2 9,27 49079 7,51 49080 3,0011


Sand. non dopé 9,27 60834 non détecté 0 0,0000

Sand. dopé 1 9,27 54071 7,51 54253 3,0109

Sand. dopé 2 9,28 550,36 7,52 57480 3,1321

Sand. dopé 3 9,28 56952 7,52 57397 3,0240

Sand. dopé 4 9,28 59750 7,52 61217 3,0735

Sand. dopé 5 9,28 59759 7,52 61164 3,0704

Sand. dopé 6 9,28 56606 7,52 58722 3,1114

C1 9,29 47097 7,55 9085 0,6172

C2 9,29 39345 7,54 39909 3,0433

Pain complet 1 9,29 42067 7,55 13968 1,0275

Pain complet 2 9,29 33325 7,55 11222 1,0420

Pain complet 3 9,30 43498 7,50 14657 1,0427

Toast 1 9,30 55559 7,54 53656 2,8998

Toast 2 9,29 47075 7,54 46054 2,9368

Toast 3 9,29 44959 7,54 44112 2,9453

C1 9,30 47641 7,56 9207 0,6183

C2 9,29 47192 7,53 48131 3,0597






102,4 mg

99,94 %

50 ml

2,0468 mg/ml


0,5117 0,4900 -4,2 oui

1,0234 0,9997 -2,3 oui

2,0468 2,0059 -2,0 oui

4,0935 4,1219 0,7 oui

250,0 mg

99,94 %

50 ml

4,9970 mg/ml




C2 2,9982 3,0011 0,1 oui

C1 0,5996 0,6172 2,9 oui

C2 2,9982 3,0433 1,5 oui

C1 0,5996 0,6183 3,1 oui

C2 2,9982 3,0597 2,1 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :







(g)

Ac. Propionique

(mg)*

Teneur en Ac.

Propionique (mg/kg)

LOQ sur base du L1

(mg/kg)

mini-sandwiches Carrefour Sand. non dopé 4,99 0,0000 0,0256,9

pain complet Boerkens Pain complet 1 5,08 1,0275 1011,3252,3



paint toast Carrefour Toast 1 5,01 2,8998 2894,0255,8









préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

numéro de l'échantillon Sand. dopé 1 Sand. dopé 2 Sand. dopé 3 Sand. dopé 4 Sand. dopé 5 Sand. dopé 6

prise d'essai (g) 5,01 5,00 5,00 5,04 5,00 5,01















L01 9,29 69058 7,56 4766 0,2440

L02 9,29 47869 7,56 7257 0,4983

L03 9,29 40030 7,55 12290 0,9768

L04 9,29 48407 7,54 31678 2,0463

L05 9,29 54458 7,53 71068 4,0493

C1 9,29 43663 7,55 8083 0,6014

C2 9,28 41463 7,53 41245 3,0941



Sand. dopé 1 9,28 54101 7,52 56016 3,2193

Sand. dopé 2 9,28 47028 7,52 49731 3,2873

Sand. dopé 3 9,28 47638 7,52 50020 3,2643

Sand. dopé 4 9,28 64196 7,52 54882 3,1432

Sand. dopé 5 9,28 37574 7,52 40390 3,3410

Sand. dopé 6 9,28 55496 7,51 57054 3,1967

C1 9,28 65129 7,54 11952 0,5965

C2 9,28 44650 7,53 42719 2,9772

Pain complet 1 9,28 51516 7,54 16799 1,0355

Pain complet 2 9,28 55643 7,53 18690 1,0656

Pain complet 3 9,28 42541 7,54 14635 1,0906

Toast 1 9,28 43015 7,52 43134 3,1188

Toast 2 9,28 48340 7,52 48584 3,1258

Toast 3 9,28 33504 7,52 33205 3,0828

C1 9,28 47517 7,54 9066 0,6189

C2 9,28 44274 7,52 43415 3,0506






101,3 mg

99,94 %

50 ml

2,0248 mg/ml


0,5062 0,4983 -1,6 oui

1,0124 0,9768 -3,5 oui

2,0248 2,0463 1,1 oui

4,0496 4,0493 0,0 oui

254,5 mg

99,94 %

50 ml

5,0869 mg/ml




C2 3,0522 3,0941 1,4 oui

C1 0,6104 0,5965 -2,3 oui

C2 3,0522 2,9772 -2,5 oui

C1 0,6104 0,6189 1,4 oui

C2 3,0522 3,0506 -0,1 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :







(g)

Ac. Propionique

(mg)*

Teneur en Ac.

Propionique (mg/kg)

LOQ sur base du L1

(mg/kg)














préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,10 5,01 5,01 4,99 5,03 5,00















L01 9,25 53398 7,52 3796 0,2508

L02 9,25 37965 7,52 5762 0,4828

L03 9,25 38875 7,51 12569 0,9763

L04 9,25 47795 7,50 31143 1,9205

L05 9,25 33637 7,49 46135 3,9913

C1 9,25 31644 7,51 5836 0,5767

C2 9,25 48620 7,49 51064 3,0672



Sand. dopé 1 9,25 38229 7,49 37399 2,8601

Sand. dopé 2 9,25 48947 7,49 48014 2,8677

Sand. dopé 3 9,25 27938 7,50 27727 2,9009

Sand. dopé 4 9,25 39146 7,49 38469 2,8728

Sand. dopé 5 9,25 43259 7,49 43179 2,9172

Sand. dopé 6 9,25 22841 7,50 22496 2,8791

C1 9,24 41622 7,51 7711 0,5791

C2 9,25 43968 7,49 45524 3,0244

Pain complet 1 9,24 37184 7,50 12087 0,9812

Pain complet 2 9,25 39631 7,50 12937 0,9852

Pain complet 3 9,24 36569 7,50 12492 1,0288

C1 9,25 54661 7,51 9831 0,5636

C2 9,24 51364 7,49 51983 2,9572






99,0 mg

99,94 %

50 ml

1,9788 mg/ml


0,4947 0,4828 -2,4 oui

0,9894 0,9763 -1,3 oui

1,9788 1,9205 -2,9 oui

3,9576 3,9913 0,9 oui

249,4 mg

99,94 %

50 ml

4,9850 mg/ml




C2 2,9910 3,0672 2,5 oui

C1 0,5982 0,5791 -3,2 oui

C2 2,9910 3,0244 1,1 oui

C1 0,5982 0,5636 -5,8 oui

C2 2,9910 2,9572 -1,1 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :







(g)

Ac. Propionique

(mg)*

Teneur en Ac.

Propionique (mg/kg)

LOQ sur base du L1

(mg/kg)











préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,00 5,01 5,00 5,00 5,01 5,00















L01 9,25 39014 7,52 3064 0,2797

L02 9,25 35378 7,52 5652 0,5150

L03 9,25 55320 7,51 17972 0,9933

L04 9,25 54579 7,50 37243 2,0288

L05 9,25 57407 7,49 82383 4,2093

C1 9,25 45143 7,51 8480 0,5964

C2 9,26 41436 7,50 42727 3,0392



Sand. dopé 1 9,25 46687 7,49 46638 2,9459

Sand. dopé 2 9,25 20222 7,50 20966 3,0555

Sand. dopé 3 9,25 23922 7,50 24687 3,0415

Sand. dopé 4 9,25 45215 7,49 44740 2,9185

Sand. dopé 5 9,26 346 7,54 288 2,4624

Sand. dopé 6 9,24 63866 7,48 62626 2,8927

C1 9,25 39071 7,51 7811 0,6313

C2 9,23 48660 7,48 46796 2,8380

Toast 1 9,22 53600 7,47 51704 2,8465

Toast 2 9,22 46004 7,46 43996 2,8225

Toast 3 9,22 56253 7,46 51107 2,6840

C1 9,22 51037 7,49 9823 0,6097

C2 9,22 47434 7,47 47688 2,9645






104,3 mg

99,94 %

50 ml

2,0847 mg/ml


0,5212 0,5150 -1,2 oui

1,0424 0,9933 -4,7 oui

2,0847 2,0288 -2,7 oui

4,1695 4,2093 1,0 oui

253,0 mg

99,94 %

50 ml

5,0570 mg/ml




C2 3,0342 3,0392 0,2 oui

C1 0,6068 0,6313 4,0 oui

C2 3,0342 2,8380 -6,5 oui

C1 0,6068 0,6097 0,5 oui

C2 3,0342 2,9645 -2,3 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :







(g)

Ac. Propionique

(mg)*

Teneur en Ac.

Propionique (mg/kg)

LOQ sur base du L1

(mg/kg)


toast Carrefour Toast 1 5,01 2,8465 2840,8255,8









préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,00 4,99 4,97 5,00 5,01 5,16













Problème à l'injection (pics 20 fois plus petits que normalement) => ne pas tenir compte de ce résultat.



L01 8,73 36643 7,03 2761 0,2530

L02 8,74 34706 7,03 5374 0,4827

L03 8,74 37057 7,02 11646 0,9435

L04 8,73 28726 7,01 19100 1,9568

L05 8,73 39983 7,00 54125 3,9474

C1 8,74 30771 7,03 6121 0,6101

C2 8,74 44030 7,01 44779 2,9745


Sand. dopé 1 8,73 55530 7,02 9231 0,5157

Sand. dopé 2 8,73 59097 7,02 9789 0,5140

Sand. dopé 3 8,73 55544 7,02 9305 0,5194

Sand. dopé 4 8,73 49205 7,02 8496 0,5343

Sand. dopé 5 8,73 60904 7,02 10306 0,5243

Sand. dopé 6 8,73 57023 7,02 9818 0,5328

C1 8,73 48339 7,02 9598 0,6091

C2 8,73 55956 7,00 56651 2,9611






98,8 mg

99,50 %

50 ml

1,9661 mg/ml


0,4915 0,4827 -1,8 oui

0,9831 0,9435 -4,0 oui

1,9661 1,9568 -0,5 oui

3,9322 3,9474 0,4 oui

255,4 mg

99,50 %

50 ml

5,0825 mg/ml




C2 3,0495 2,9745 -2,5 oui

C1 0,6099 0,6091 -0,1 oui

C2 3,0495 2,9611 -2,9 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :








préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,03 5,00 5,04 5,06 5,06 5,00















L01 8,71 60158 7,01 4876 0,2659

L02 8,70 46634 7,00 7853 0,5311

L03 8,71 39043 6,99 13445 1,0654

L04 8,70 56911 6,98 39637 2,1345

L05 8,70 50922 6,97 71847 4,3037

C1 8,70 54702 6,99 10466 0,6007

C2 8,70 70612 6,96 69060 2,9894


Sand. dopé 1 8,69 59136 6,99 9432 0,5041

Sand. dopé 2 8,69 48832 6,99 8190 0,5290

Sand. dopé 3 8,70 52309 6,99 8456 0,5106

Sand. dopé 4 8,70 45416 6,99 7584 0,5269

Sand. dopé 5 8,69 73468 6,98 11889 0,5112

Sand. dopé 6 8,69 60074 6,98 9775 0,5139

C1 8,69 52652 6,99 9847 0,5876

C2 8,69 53462 6,96 52461 2,9992






107,9 mg

99,50 %

50 ml

2,1472 mg/ml


0,5368 0,5311 -1,1 oui

1,0736 1,0654 -0,8 oui

2,1472 2,1345 -0,6 oui

4,2944 4,3037 0,2 oui

250,0 mg

99,50 %

50 ml

4,9750 mg/ml




C2 2,9850 2,9894 0,1 oui

C1 0,5970 0,5876 -1,6 oui

C2 2,9850 2,9992 0,5 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :








préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,04 5,02 5,00 5,00 5,00 5,02















L01 8,70 48400 7,01 4165 0,2704

L02 8,70 50497 7,00 8885 0,5350

L03 8,71 51629 0,70 18010 1,0440

L04 8,71 32037 0,70 24021 2,2246

L05 8,71 44864 6,97 65833 4,3374

C1 8,70 51104 7,00 10243 0,6071

C2 8,70 55584 6,97 55930 2,9796


Sand. dopé 1 8,70 36310 7,00 5893 0,4949

Sand. dopé 2 8,70 43885 6,99 7329 0,5087

Sand. dopé 3 8,70 48117 6,99 8048 0,5094

Sand. dopé 4 8,69 54801 6,99 8898 0,4950

Sand. dopé 5 8,69 56501 6,99 9297 0,5015

Sand. dopé 6 8,70 50580 6,99 8223 0,4956

C1 8,70 50985 6,99 10123 0,6015

C2 8,69 63325 6,96 63197 2,9553






109,3 mg

99,50 %

50 ml

2,1751 mg/ml


0,5438 0,5350 -1,6 oui

1,0875 1,0440 -4,0 oui

2,1751 2,2246 2,3 oui

4,3501 4,3374 -0,3 oui

250,9 mg

99,50 %

50 ml

4,9929 mg/ml




C2 2,9957 2,9796 -0,5 oui

C1 0,5991 0,6015 0,4 oui

C2 2,9957 2,9553 -1,4 oui

pureté (%) :

volume :


ac.propionique (mg)



volume :


ac.propionique (mg)








pureté (%) :








préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés

sandwiches

préemballés


prise d'essai (g) 5,06 5,09 4,99 5,04 5,02 5,00














5. Spécificité

La spécificité de la méthode est basée uniquement sur le temps de rétention.

L'identification de l’acide propionique dans la solution d’échantillon se fait en comparant le temps de

rétention avec ceux des solutions de contrôle l’encadrant. Les temps de rétention ne peuvent différer de plus

de 0,9 %.

Cet écart a été déterminé de manière empirique :

Comme le montrent les 2 chromatogrammes ci-dessous, un tout petit pic peut être présent dans la matrice,

juste avant l’acide propionique (voir dans le zoom du chromatogramme du non dopé à 7,521 min).

Sandwich non dopé : vue d’ensemble (en haut) et zoom (en bas)

Pas d’acide propionique à 7,61 min – acide isovalérique (SI) à 9,360 min.

Pic présent dans certains pains, bien séparé du pic d’acide propionique (voir chromatogramme du dopé).


5. Spécificité

En cas de présence de ce pic, les essais de validation ont montré qu’il était parfaitement séparé du pic

d’acide propionique (voir dans le zoom du chromatogramme du dopé).

L'écart acceptable de 0,9 % sur le temps de rétention, introduit dans le logiciel pour l'identification du pic

d'acide propionique, est suffisamment petit que pour ne pas confondre ce petit pic présent dans la matrice

avec l'acide propionique, et suffisamment grand pour palier aux légères variations du temps de rétention

d'une injection à l'autre (l'écart maximum observé est de 0,04 min, soit environ 0,5 % du temps de rétention).

A noter également que les blancs méthode n'ont présenté aucun pic ayant un S/N>10 (paramètre introduit

dans le logiciel pour l'intégration des pics) dans la fenêtre du temps de rétention de l’acide propionique (voir

données brutes de chaque série).

Sandwich dopé à 1000 mg/kg : vue d’ensemble (en haut) et zoom (en bas)

acide propionique à 7,612 min – acide isovalérique (SI) à 9,361 min.

Mise en évidence de la bonne séparation entre le pic d’acide propionique et un petit pic (présent dans certains pains) qui le précède.


Teneur en acide propionique et ses sels (mg/kg) = X (mg) x 5 / P (g) x 1000

où

X = résultat obtenu à partir de la courbe d'étalonnage (mg)

P = prise d'essai (g) = 5 g (selon le mode opératoire)

6.1 Détermination de la LOQ

Selon le mode opératoire, si X est équivalent au plus petit niveau d'étalonnage alors X = 0,250 mg

D'où LOQ = 0,250 x 5 / 5 x 1000 = 250 mg/kg

La LOQ de la méthode est donc de 250 mg/kg, soit 1/4 de la norme la plus stricte.

D'où LOQ = 0,125 x 5 / 5 x 1000 = 125 mg/kg

La LOD de la méthode est donc de 125 mg/kg, soit 1/8 de la norme la plus stricte.

6. LOD & LOQ

En se basant sur nos définitions de la LOD et de la LOQ, on peut les déterminer à partir de la formule du calcul de

la teneur en acide propionique et du mode opératoire de la méthode.

Formule :

6.2 Détermination de la LOD

Selon le mode opératoire, si X est équivalent à la moitié du plus petit niveau d'étalonnage alors X = 0,125 mg


Level 1 : vue d’ensemble (en haut) et zoom (en bas)

acide propionique à 7,627 min – acide isovalérique (SI) à 9,364 min.

6.3 Aspect pratique de la LOD et de la LOQ

Après ces déterminations théoriques des LOD et LOQ, nous pouvons montrer que la méthode permet réellement de

les atteindre : sur base d'un chromatogramme du level le plus petit (level 1 ci-dessous), on peut constater que

l'intensité du signal obtenu est bien supérieure au bruit de fond et est parfaitement exploitable. La spécificité de la

méthode ayant été précédemment démontrée, on peut conclure que :

- un échantillon qui contiendrait 250 mg/kg (LOD), et qui donnerait donc un signal équivalent à celui ci-dessous est

bien quantifiable.

- un échantillon qui contiendrait 125 mg/kg (LOQ), et qui donnerait donc un signal deux fois plus petit que ci-

dessous, est tout à fait détectable.

6. LOD & LOQ


écart (%) Level 1 Level 2 Level 3 Level 4 Level 5

Série n° 1 3,1 -4,4 -1,4 -3,4 1,0

Série n° 2 -1,9 -2,0 -2,9 -1,0 0,5

Série n° 3 -0,2 -4,3 -0,7 -1,6 0,5

Série n° 4 -0,2 -4,0 -2,8 0,3 0,2

Série n° 5 7,4 -1,5 -1,9 -4,0 1,1

Série n° 6 4,0 -4,2 -2,3 -2,0 0,7

Série n° 7 -3,6 -1,6 -3,5 1,1 0,0

Série n° 8 1,4 -2,4 -1,3 -2,9 0,9

Série n° 9 7,3 -1,2 -4,7 -2,7 1,0

Série n° 10 2,9 -1,8 -4,0 -0,5 0,4

Série n° 11 -0,9 -1,1 -0,8 -0,6 0,2

Série n° 12 -0,5 -1,6 -4,0 2,3 -0,3

7. Etalonnage

Comme prévu au point 1.6 Etalonnage, cinq niveaux sont réalisés (le rejet d’un des points d'étalonnage est autorisé

à condition que cela ne soit ni le premier ni le dernier).

Le modèle de réponse obtenu est linéaire.

Pour les 12 séries effectuées, l'écart maximum de 10 % entre la valeur mesurée et la valeur théorique de chaque

niveau a été respecté, et donc aucun point d'étalonnage n'a été rejeté. L'écart maximum observé est de 7,4 %.

Récapitulatif des écarts obtenus entre la valeur mesurée et la valeur théorique de chaque niveau d'étalonnage.


7. Etalonnage

Exemple de droite d'étalonnage obtenue.


Rendement (%) Série 1 Série 2 Série 3 Série 4 Série 6 Série 7 Série 8 Série 9

dopé 1 106,8 99,5 105,1 100,4 100,4 105,5 95,6 97,1

dopé 2 103,5 100,3 101,1 102,9 104,5 107,7 95,9 100,7

dopé 3 103,2 101,9 102,3 102,5 100,9 107,0 97,0 100,2

dopé 4 103,8 98,4 99,3 101,6 102,5 103,0 96,0 96,2

dopé 5 104,8 101,2 99,1 100,2 102,4 109,5 97,5 81,2*

dopé 6 105,1 100,3 101,3 100,1 103,8 104,7 96,3 95,3

Moyenne 104,5 100,3 101,4 101,3 102,4 106,2 96,4 97,9

SD 1,33 1,21 2,18 1,23 1,58 2,30 0,73 2,42

Rendement (%) Série 10 Série 11 Série 12

dopé 1 101,5 101,3 99,1

dopé 2 101,1 106,3 101,9

dopé 3 102,2 102,6 102,0

dopé 4 105,1 105,9 99,1

dopé 5 103,2 102,8 100,4 101,7 %

dopé 6 104,8 103,3 99,3

Moyenne 103,0 103,7 100,3

SD 1,70 1,98 1,37

8. Justesse

Niveau : 1000 mg/kg Niveau : 3000 mg/kg

* Problème à l'injection (pics 20 fois plus petits que normalement) => ne pas tenir compte de ce résultat.

8.1 Evaluation de la justesse à partir des rendements mesurés pour les matrices blanches dopées

En l'absence de CRM, la justesse peut être évaluée en dopant les échantillons.

Les 3 niveaux étudiés sont :

- 500 mg/kg (moitié de la norme la plus basse)

- 1000 mg/kg (norme pour les pains préemballés non découpés)

- 3000 mg/kg (norme des pains préemballés prédécoupés)

Pour chacune de ces concentrations, conformément au tableau présenté au point 1.7 Justesse, le rendement

de récupération devra être compris entre 80% et 110%.

Niveau : 500 mg/kg

Pour information : rendement

moyen des 12 séries :


Chaque rendement obtenu est bien compris entre 80 et 110 %. Le plus petit rendement observé est de 95,3 %

tandis que le plus élevé est de 107,7 %. Le rendement moyen est de 101,7 %.

8. Justesse

90

95

100

105

110

115

1 2 3 4 5 6

Ren

dem

en

t (%

)

Rendements sur matrice blanche dopée

Série1

Série2

Série3

Série4

Série6

Série7

Série8

Série9

Série 10

Série 11

Série 12


8. Justesse

Série1

Série2 Série3

Série4

0

20

40

60

80

100

120

1 2

3

4

5

6

Ren

dem

en

t (%

)

Rendements sur matrice blanche dopée à 1000 mg/kg

Série1

Série2

Série3

Série4

Série6

Série7 Série8

Série9

0

20

40

60

80

100

120

1

2

3

4

5

6

Ren

dem

en

t (%

) Rendements sur matrice blanche dopée à 3000 mg/kg

Série6

Série7

Série8

Série9


8. Justesse

Série 10

Série 11

Série 12

0

20

40

60

80

100

120

1

2

3

4

5

6

Ren

dem

en

t (%

)

Rendements sur matrice blanche dopée à 500 mg/kg

Série 10

Série 11

Série 12


Les résultats sont les suivants :

LFSAL 1

LFSAL 2

LFSAL 3

SGS

C'est pourquoi nous avons envoyé la moitié du pain toast au laboratoire SGS Agrilab - Agro Food Service.

De plus, les 3 rendements obtenus sur le pain toast dopé (teneur "naturelle" de 3000 mgkg; dopage de +1000

mg/kg) sont également compris entre 80 et 110 % : 104,0 % - 102,6 % - 103,5 %.

Ces rendements sont similaires à ceux obtenus pour les matrices blanches dopées. Cependant, ces essais ne

démontrent pas que l'extraction est totale mais juste répétable : en effet, même si l'extraction des propionates

intrinsèques à la matrice n'était que de 50 %, pour peu que cette extraction soit répétable, comme on a montré

auparavant que la récupération d'un ajout dosé est totale, les rendements finaux d'une matrice non blanche

dopée seraient aussi proches de 100 %. On ne peut donc toujours pas parler ici d'une évalutation quantitave

de la justesse.

A défaut d'avoir trouvé un CRM ou un test interlaboratoire, la meilleure façon d'évaluer la justesse d'une

méthode est finalement d'analyser un échantillon contenant l'analyte recherché et de comparer le résultat du

laboratoire avec celui d'un laboratoire tiers accrédité pour le couple analyte/matrice concerné.

Teneur (mg/kg)

2976,0

3155

2980,1

2988,2

IM (%)

12,04

12,04

12,04

25

0,23

0,49

-0,49

1270,1

1234,4

2981,5

1679,2

1252,3

2976,0

8. Justesse

Suite à l'audit interne, nous avons analysé des matrices non blanches afin de vérifier d'une part que l'on arrive

bien à extraire les propionates présents intrinsèquement dans la matrice (ce qui est différent de la récupération

d'un ajout dosé), et d'autre part que cette extraction est complète.

-0,18

-0,05

pain pita (emballé)

nature de l'échantillon

8.2 Evaluation de la justesse à partir de matrices non blanches (série n°5)

8.2.1 Approche qualitative

Comme annoncé sur les emballages des 3 matrices, de l'acide propionique ou un de ses sels a été retrouvé

dans chacune des matrices. Les teneurs trouvées sont relativements élevées et montrent que l'extraction

semble répétable (écart par rapport à la moyenne < 2%) :

8.2.2 Approche quantitative

Teneur en Ac.

Propionique (mg/kg)

Teneur moyenne en

Ac. Propionique

(mg/kg)

Ecart par rapport à la

moyenne (%)

2980,1

2988,2

1687,3

1671,0

pain toast (emballé tranché)

pain burger (emballé tranché)

1,43

-1,43

IM (mg/kg)

358,3

358,8

359,8

789


8. Justesse

Extrait du rapport d'analyse du pain toast anlysé par un laboratoire accrédité (SGS).

Mails précisant l'incertitude de mesure sur le résultat du rapport ci-dessus.


1 2 3

LFSAL 2976,0 2980,1 2988,2

SGS 3155,0 3155,0 3155,0

SGS-IM 2366,3 2366,3 2366,3

SGS+IM 3943,8 3943,8 3943,8

avec :

m 1 : résultat du laboratoire 1 U 1 : incertitude du laboratoire 1

m 2 : résultat du laboratoire 2 U 2 : incertitude du laboratoire 2

IM (mg/kg) | m1-m2 |

LFSAL 1 358,3 179 <

LFSAL 2 358,8 175 <

LFSAL 3 359,8 167 <

SGS 789

Comment comparer les résultats de deux laboratoire ?

En application de notre procédure LAB00 P180 Validation des méthodes d'analyse v02, les résultats des deux

laboratoires ne seront pas significativement différents si la condition suivante est satisfaite :

Selon l'auditeur technique Belac, la justesse du laboratoire peut être démontrée si ses résultats sont compris

dans l'intervalle définit par les résultats du laboratoire accrédité. D'après ce critère, comme le montre le

graphique ci-dessous, la justesse de la méthode est démontrée.

8. Justesse

Appliqué à nos résultats, la condition est satisfaite (voir ci-dessous). D'après ce critère, les résultats du LFSAL

et du laboratoire accrédité SGS ne sont donc pas significativement différents.

3155

Teneur (mg/kg) √(U12 + U2

2)

866

867

867

2976,0

2980,1

2988,2

2976 2980 2988

1500

2000

2500

3000

3500

4000

4500

Ten

eu

r (m

g/k

g)

Comparaison des résultats du LFSAL et de SGS

SGS + IM (3944)

SGS - IM (2366)

SGS (3155)


Résumé des résultats obtenus sur l'analyse d'un pain complet Boerkens :

Série n°6 Série n°7 Série n°8

Jour 17/06/2011 17/06/2011 20/06/2011

Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne De Tandt Thierry

Essai 1 1011,3 1029,3 981,2

Essai 2 1042,0 1063,5 985,2

Essai 3 1030,3 1086,3 1028,8

Répétabilité = 67,8 mg/kg

Reproductibilité intra-laboratoire = 102,2 mg/kg

Résumé des résultats obtenus sur l'analyse d'un pain toast Carrefour :


Jour 17/06/2011 17/06/2011 22/06/2011

Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne M-C Offermanne

Essai 1 2894,0 3112,6 2840,8

Essai 2 2925,1 3119,6 2822,5

Essai 3 2939,4 3076,6 2884,0






A chaque niveau, la répétabilité et la reproductibilité a été calculée : à partir de 3 séries de 3 essais sur des

matrices non blanches pour les 2 niveaux correspondants aux normes légales; à partir de 3 séries de 6

essais sur une matrice blanche dopée pour le niveau correspondant à la moitié de la norme la plus basse

(pas de matrice contenant "naturellement" cette teneur disponible). Le résumé se trouve ci-dessous et le

détail des calculs se trouvent dans les 3 pages suivantes.

Critère d'évaluation : vérifier que le %RSDr et/ou le %RSDRW calculés sont inférieurs ou égaux aux valeurs

maximales admissibles découlant de l'équation d'Horwitz.


Résumé des résultats obtenus sur l'analyse des mini-sandwiches La Lorraine dopés à 500 mg/kg :


Jour 10/10/2012 06/11/2012 19/11/2012


Essai 1 505,2 493,6 493,4

Essai 2 508,3 495,5 490,5

Essai 3 504,2 497,5 500,3

Essai 4 502,2 497,5 495,3

Essai 5 502,2 497,5 497,3

Essai 6 508,3 495,5 499,3



max. %RSDRw= CV = 2(1-0.5logC)

avec :

CV = coefficient de variation (sous des conditions de reproductibilité)

C = concentration exprimée en puissance de 10 (par exemple 1 mg/g = 10-3

)

max. %RSDr = 2(1-0.5logC)

x 2/3

avec:

max. %RSDr = déviation standard relative maximale sous des conditions de répétabilité

Niveau C LFSAL Horwitz LFSAL Horwitz

500 mg/kg 0,0005 0,56 4,19 1,16 6,28

1000 mg/kg 0,001 2,35 3,77 3,55 5,66

3000 mg/kg 0,003 0,89 3,20 4,49 4,79

Evaluation de la répétabilité et de la reproductibilité du laboratoire

Vérifier que la %RSDr et/ou %RSDRW déterminées sont inférieures ou égales à la valeur maximale

admissibles découlant de l’équation d’Horwitz :

%RSDr %RSDRw

Les valeurs obtenues par le laboratoire sont acceptables car inférieures à celles issuent de l'équation

d'Horwitz.




Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB23 P012 Validation des méthodes analytiques. Série 6 (u-moyenne)²

1011,3 2,74E+02

Paramètre de validation de méthode pour un seul niveau de concentration 1042,0 2,00E+02

1030,3 5,92E+00

Analyse : Dosage de l'acide propionique et ses sels dans le pain mg/kg

Moyenne

mg/kg

Série 1 3 9 3083,600 1027,86667 0,62 480,12667 série 7 (u-moyenne)²

Série 2 3 9 3179,100 1059,70000 963,76 1646,16000 1029,3 9,24E+02

Série 3 3 9 2995,200 998,40000 915,40 1394,24000 1063,5 1,44E+01

Série 4 1086,3 7,08E+02

nb de série (p) 3

somme des sommes des (u-moyenne)² = 3520,5267

nombre total de résultats = 9

somme totale des résultats: 9257,9000 mg/kg série 8 (u-moyenne)²

moyenne totale = 1028,6556 mg/kg 981,2 2,96E+02

somme (ni) - p 6 985,2 1,74E+02

var. de répétabilité: s²j ( r ) = 5,87E+02 1028,8 9,24E+02

coeff. de variation de répétabilité (%) = 2,35

nombre moyen par séries: 3,00

variance inter séries s²j(g) = 7,44E+02 ( = 0 si < 0)

variance de fidélité intermédiaire s²j ( FI ) ou de reproductibilité: 1,33E+03

3,55 ni(mi-mp)² série 9 (u-moyenne)²

1,867037037 5639,335556

67,82 mg/kg 2891,272593

102,15 mg/kg 2746,195926

k (n-1)dl =

84,13 mg/kg

2,306 Nombre de dl = Valeur de k pour (n-1) dl

(table t)8


Unités des données encodées :

SérieNb de

résultats (n)n² total résultats (u) (moysér - moytot)²

somme des

(u-moyenne)²

Coeff. De variation de fidélité intermédiaire CVj ( FI ) ou de

reproductibilité en % =

Répétabilité r [2,8*Sj(r)]

Reproductibilité R [2,8*Sj(FI)]

2,306

Incertitude de mesure élargie (basée sur fidélité intermédiaire) =

Niveau : 1000 mg/kg



2894,0 6,50E+02


2939,4 3,96E+02

Analyse : Dosage de l'acide propionique et ses sels dans le pain mg/kg

Moyenne

mg/kg


Série 2 3 9 9308,800 3102,93333 21244,68 1064,66667 3112,6 9,34E+01

Série 3 3119,6 2,78E+02

Série 4 3 9 8547,300 2849,10000 11680,81 1994,46000 3076,6 6,93E+02

nb de série (p) 3

somme des sommes des (u-moyenne)² = 4136,7467



moyenne totale = 2957,1778 mg/kg

somme (ni) - p 6

var. de répétabilité: s²j ( r ) = 6,89E+02

coeff. de variation de répétabilité (%) = 0,89

nombre moyen par séries: 3,00

variance inter séries s²j(g) = 1,69E+04 ( = 0 si < 0)


4,49 ni(mi-mp)² série 9 (u-moyenne)²

4258,844815 103035,3089 2840,8 68,89

73,52 mg/kg 63734,04593 2822,5 707,56

371,80 mg/kg 2884,0 1218,01

k (n-1)dl = 35042,41815

306,21 mg/kg


(table t)8



SérieNb de


somme des

(u-moyenne)²





2,306


Niveau : 3000 mg/kg



505,2 2,41E-02


504,2 7,18E-01

Analyse : Dosage de l'acide propionique et ses sels dans le pain mg/kg 502,2 8,07E+00

502,2 8,07E+00

Moyenne 508,3 1,02E+01

mg/kg


Série 2 6 36 2977,087 496,18124 8,43 13,01242 493,6 6,92E+00

Série 3 6 36 2976,040 496,00667 9,47 68,96948 495,5 4,40E-01

Série 4 497,5 1,74E+00

nb de série (p) 3 497,5 1,74E+00

497,5 1,74E+00

somme des sommes des (u-moyenne)² = 119,1646 495,5 4,40E-01



moyenne totale = 499,0838 mg/kg 493,4 6,95E+00

somme (ni) - p 15 490,5 3,07E+01

var. de répétabilité: s²j ( r ) = 7,94E+00 500,3 1,84E+01

coeff. de variation de répétabilité (%) = 0,56 495,3 4,61E-01

nombre moyen par séries: 6,00 497,3 1,67E+00

variance inter séries s²j(g) = 2,55E+01 ( = 0 si < 0) 499,3 1,08E+01


1,16 ni(mi-mp)² série (u-moyenne)²

214,545411 321,9095423

7,89 mg/kg 50,55037352

16,19 mg/kg 56,81375779

k (n-1)dl =

12,20 mg/kg


(table t)17



SérieNb de


somme des

(u-moyenne)²





2,110


Niveau : 500 mg/kg


Résumé des résultats obtenus sur l'analyse de sandwiches La Lorraine :

Série n°1 Série n°2 Série n°3 Série n°4

Jour 09/05/2011 10/05/2011 12/05/2011 12/05/2011

Analyste Dupuche Nathalie De Tandt Thierry Monisse Isabelle Stany Delbrouck

Essai 1 106,8 99,5 105,1 100,4

Essai 2 103,5 100,3 101,1 102,9

Essai 3 103,2 101,9 102,3 102,5

Essai 4 103,8 98,4 99,3 101,6

Essai 5 104,8 101,2 99,1 100,2

Essai 6 105,1 100,3 101,3 100,1

Incertitude de mesure élargie = 7 %

Résumé des résultats obtenus sur l'analyse de Sandwiches Carrefour :

Série n°6 Série n°7 Série n°8 Série n°9

Jour 17/06/2011 17/06/2011 20/06/2011 22/06/2011

Analyste De Tandt Thierry M-C Offermanne De Tandt Thierry M-C Offermanne

Essai 1 100,4 105,5 95,6 97,1

Essai 2 104,5 107,7 95,9 100,7

Essai 3 100,9 107,0 97,0 100,2

Essai 4 102,5 103,0 96,0 96,2

Essai 5 102,4 109,5 97,5 81,2*

Essai 6 103,8 104,7 96,3 95,3

*Problème à l'injection (pics 20 fois plus petits que normalement) => ne pas tenir compte de ce résultat.

Incertitude de mesure élargie = 12,04 %


Le résumé se trouve ci-dessous et le détail des calculs se trouvent dans les 2 pages suivantes.



Comme il n'y a pas de correction par le rendement sur le résultat analytique, l'incertitude de mesure de la méthode

est calculée sur base de l'approche TOP-DOWN. Elle est déterminée aux niveaux correspondant aux 2 normes

légales en vigueur.

Pour chaque norme légale, l'incertitude de mesure est calculée sur base de 4 séries de 6 essais d'une matrice

blanche dopée au niveau correspondant.


Résumé des résultats obtenus sur l'analyse de Sandwiches Carrefour :


Jour 10/10/2012 06/11/2012 19/11/2012


Essai 1 101,5 101,3 99,1

Essai 2 101,1 106,3 101,9

Essai 3 102,2 102,6 102,0

Essai 4 105,1 105,9 99,1

Essai 5 103,2 102,8 100,4

Essai 6 104,8 103,3 99,3

Incertitude de mesure élargie = 7,83 %




Pour plus d'information sur ce formulaire, se référer à la procédure LAB P508 Détermination de l'incertitude de mesure pour les analyses chimiques quantitatives.

Calcul pratique de l'incertitude de mesure suivant l'approche TOP-DOWN Nr. Experience

x : résultats mesurés

calcul de la variance d'intra-reproductibilité %uRw2 Cdopage : valeur du dopage

bias %bias %bias2

A partir d'un échantillon de contrôle de matrice identique Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 1 106,786 100,0000 -6,79 -6,35 40,38

2 103,458 100,0000 -3,46 -3,34 11,17

déviation standard de la carte de contrôle, échantillon matrice identique : sRw (= sCC) 2,174 101,857 2,135 = RSDCC, est pour une valeur suffisament

grande, une bonne estimation de RSDRw

3 103,228 100,0000 -3,23 -3,13 9,78

variance d'incertitude intra-rep : %uRw2

4,56 RSDRw2

4 103,768 100,0000 -3,77 -3,63 13,18

6.3.15 104,787 100,0000 -4,79 -4,57 20,87

6 105,087 100,0000 -5,09 -4,84 23,43

Calcul de la justesse / bias (combinaison quadratique) 7 99,493 100,0000 0,51 0,51 0,26

8 100,313 100,0000 -0,31 -0,31 0,10

A partir d'expériences de recouvrement Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques 9 101,861 100,0000 -1,86 -1,83 3,34

10 98,431 100,0000 1,57 1,59 2,54

Données des expériences de recouvrement11 101,153 100,0000 -1,15 -1,14 1,30

carré moyen relatif du biais : %MSbias 7,30 somme des carrés moyens12 100,343 100,0000 -0,34 -0,34 0,12

incertitude sur le dopage (spiking) par pesée et/ou volume : %udopage 0,63 13 105,079 100,0000 -5,08 -4,83 23,37

variance de la mesure d'incertitude sur le dopage (spiking): %udopage2 0,40 svt petit vis-à-vis de %Msbias 14 101,107 100,0000 -1,11 -1,09 1,20

Incertitude sur la solution/réactif de dopage %uCref,dopage 0,010 99,94 0,01 à partir du certificat fournisseur 15 102,265 100,0000 -2,26 -2,21 4,90

variance de la mesure d'incertitude solution/réactif dopage : %uCref,dopage2

0,00svt petit vis-à-vis de %Msbias 16 99,339 100,0000 0,66 0,67 0,44

varaince de l'incertitude sur le biais : %ubias2 7,70 MSbias + %ubelast

2 + %uCref,belast

2

17 99,125 100,0000 0,87 0,88 0,78

6.4.318 101,259 100,0000 -1,26 -1,24 1,55

19 100,378 100,0000 -0,38 -0,38 0,14

20 102,920 100,0000 -2,92 -2,84 8,05

Indiquer ici la précision de la balance utilisée le cas échéant dans le processus de dopage 21 102,486 100,0000 -2,49 -2,43 5,89

précision (mg) pesée (mg) %ub2

22 101,572 100,0000 -1,57 -1,55 2,39

0,1 250 0,0016 23 100,224 100,0000 -0,22 -0,22 0,05

Indiquer ici la (micro)pipette utilisée le cas échéant pour préparer la solution de dopage et/ou doper. 24 100,099 100,0000 -0,10 -0,10 0,01

volume de bias volume pipette (ml) répétabilité (précision, écart-type) pipettage (ml)somme des carrés des bias : %Sbias 175,24

la pipettenombre de mesures :

n 24

(ml) uv %uv2

up %up2 somme des carrés moyens : %MSbias 7,30

1,00 0,006 0,360 0,0020 0,040

somme %uv2

0,360 somme %up2

0,040

%udopage2 : 0,40 Volume

%udopage : 0,63

50-200

calcul de l'incertitude de mesure relative élargie %U 100-1000

Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques

variance sur l'incertitude de mesure du bias : %ubias2

7,70

variance sur l'incertitude intra-reproductibilité : %uRw2

4,56

combinaison des variances de l'incertitude : %uc2 12,26 %ubias

2 + %uRw

2

mesure d'incertitude combinée : %uc 3,50

mesure d'incertitude relative élargie %U 7,00 2 * %uc

6.5

Calculs Bottom-up de %udopage (incertitude sur le dopage)

Error limit : ±

micropipette Eppendorf volume variable (µl)


uv

1,2

6,0

Std deviation

up

0,4

2,0

Niveau : 1000 mg/kg

Niveau : 1000 mg/kg






bias %bias %bias2


2 104,466 100,0000 -4,47 -4,28 18,28



3 100,861 100,0000 -0,86 -0,85 0,73


18,55 RSDRw2

4 102,512 100,0000 -2,51 -2,45 6,00

6.3.15 102,408 100,0000 -2,41 -2,35 5,53

6 103,776 100,0000 -3,78 -3,64 13,24

Calcul de la justesse / bias (combinaison quadratique) 7 105,476 100,0000 -5,48 -5,19 26,95

8 107,704 100,0000 -7,70 -7,15 51,16


10 102,983 100,0000 -2,98 -2,90 8,39



incertitude sur le dopage (spiking) par pesée et/ou volume : %udopage 0,34 13 95,623 100,0000 4,38 4,58 20,95

variance de la mesure d'incertitude sur le dopage (spiking): %udopage2 0,12 svt petit vis-à-vis de %Msbias 14 95,877 100,0000 4,12 4,30 18,49

Incertitude sur la solution/réactif de dopage %uCref,dopage 0,010 99,94 0,01 à partir du certificat fournisseur 15 96,987 100,0000 3,01 3,11 9,65




2 + %uCref,belast

2

17 97,532 100,0000 2,47 2,53 6,40

6.4.318 96,259 100,0000 3,74 3,89 15,11

19 97,091 100,0000 2,91 3,00 8,98

20 100,703 100,0000 -0,70 -0,70 0,49

Indiquer ici la précision de la balance utilisée le cas échéant dans le processus de dopage 21 100,241 100,0000 -0,24 -0,24 0,06


22 96,187 100,0000 3,81 3,96 15,71

0,1 250 0,0016 23 95,337 100,0000 4,66 4,89 23,92

Indiquer ici la (micro)pipette utilisée le cas échéant pour préparer la solution de dopage et/ou doper.somme des carrés des bias : %Sbias 404,54

volume de bias volume pipette (ml) répétabilité (précision, écart-type) pipettage (ml)nombre de mesures :

n 23

la pipette somme des carrés moyens : %MSbias 17,59

(ml) uv %uv2

up %up2

3,00 0,010 0,111 0,0021 0,005

somme %uv2

0,111 somme %up2

0,005 Volume

%udopage2 : 0,12

%udopage : 0,34 50-200

100-1000

calcul de l'incertitude de mesure relative élargie %U

Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques Volume


17,71 0,5 ml


18,55 1 ml


2 + %uRw

22 ml

mesure d'incertitude combinée : %uc 6,02 2,5 ml

mesure d'incertitude relative élargie %U 12,04 2 * %uc 3 ml

6.5

Std deviationError limit : ±




Error limit : ± Std deviation

uv up

1,2 0,4

6,0 2,0

pipette en verre classe A/AS (ml)

0,01

up

0,0011

0,0015

0,0019

0,0019

0,0021

uv

0,005

0,007

0,01

0,01

Niveau : 3000 mg/kg

Niveau : 3000 mg/kg






bias %bias %bias2


2 101,131 100,0000 -1,13 -1,12 1,25



3 102,194 100,0000 -2,19 -2,15 4,61


4,59 RSDRw2

4 105,125 100,0000 -5,13 -4,88 23,77

6.3.15 103,158 100,0000 -3,16 -3,06 9,37

6 104,830 100,0000 -4,83 -4,61 21,23

Calcul de la justesse / bias (combinaison quadratique) 7 101,327 100,0000 -1,33 -1,31 1,71

8 106,332 100,0000 -6,33 -5,95 35,46


10 105,910 100,0000 -5,91 -5,58 31,13



incertitude sur le dopage (spiking) par pesée et/ou volume : %udopage 1,27 13 99,121 100,0000 0,88 0,89 0,79

variance de la mesure d'incertitude sur le dopage (spiking): %udopage2 1,60 svt petit vis-à-vis de %Msbias 14 101,885 100,0000 -1,88 -1,85 3,42

Incertitude sur la solution/réactif de dopage %uCref,dopage 0,010 99,94 0,01 à partir du certificat fournisseur 15 102,025 100,0000 -2,02 -1,98 3,94




2 + %uCref,belast

2

17 100,443 100,0000 -0,44 -0,44 0,19

6.4.318 99,261 100,0000 0,74 0,74 0,55

somme des carrés des bias : %Sbias 164,22

nombre de mesures : n 18

Indiquer ici la précision de la balance utilisée le cas échéant dans le processus de dopage somme des carrés moyens : %MSbias 9,12


0,1 250 0,0016

Indiquer ici la (micro)pipette utilisée le cas échéant pour préparer la solution de dopage et/ou doper.

volume de bias volume pipette (ml) répétabilité (précision, écart-type) pipettage (ml) Volume

la pipette

(ml) uv %uv2

up %up2 50-200

0,50 0,006 1,440 0,0020 0,160 100-1000

somme %uv2

1,440 somme %up2

0,160

%udopage2 : 1,60

%udopage : 1,27

calcul de l'incertitude de mesure relative élargie %U

Paramètre Valeur abs. Niveau Relatif % remarques


10,73


4,59


2 + %uRw

2

mesure d'incertitude combinée : %uc 3,91

mesure d'incertitude relative élargie %U 7,83 2 * %uc

6.5

1,2 0,4

6,0 2,0




Error limit : ± Std deviation

uv up

Niveau : 500 mg/kg

Niveau : 500 mg/kg


Conclusion :

Sur base des résultats des essais de validation, tous les critères prérequis étant respectés, la méthode proposée

permet la détermination de l'acide propionique dans le pain sur un domaine couvrant les 2 normes existantes (1000

et 3000 mg/kg). L'incertitude de mesure élargie associée à l'analyse est de 7,83 % à 500 mg/kg, de 7,00 % à 1000

mg/kg et de 12,04 % à 3000 mg/kg. La LOQ de la méthode est de 250 mg/kg et la LOD est de 125 mg/kg.

Reproductibilité intra-

laboratoire

Incertitude de mesure élargie

entre 80 et 110 %

Domaine de validation

Spécificité

125 mg/kg

0,5 %

95,3 %

LOD

Etalonnage

Modèle mathématique

Nombre de niveaux d'étalonnage

7,4 %

5

linéaire

11. Conclusion

Ecart maximum observé sur l'étalonnage

Gamme de quantification

Rendement le plus bas observé

LOD

Critère sur le rendement

La méthode MET-LFSAL-122 "DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDE PROPIONIQUE ET SES SELS DANS

LE PAIN" présente, sur base des essais de validation, les indicateurs de prestation suivants :

Ecart maximum observé sur le temps de rétention

Matrice pain

Critère sur l'étalonnage ± 10 %

Critère sur l'identification par temps de rétention ± 0,9 %

250 à 4000 mg/kg

Rendement le plus haut observé

à 500 mg/kg 7,83 %

à 3000 mg/kg 12,04 %

107,7 %

Rendement moyen obtenu 101,7 %

LOQ 250 mg/kg

à 1000 mg/kg 67,8 mg/kg

à 1000 mg/kg 102,2 mg/kg

à 1000 mg/kg 7,00 %

Justesse

non significativement différentComparaison résultat avec laboratoire accrédité

16,2 mg/kg

371,8 mg/kg

à 500 mg/kg

à 3000 mg/kg

Répétabilité

7,9 mg/kg

73,5 mg/kg

à 500 mg/kg

à 3000 mg/kg

LOQ


Documents

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION...de ces 3 matrices. Ces essais nous montreront également si la méthode est applicable, du point de vue de l'effet de matrice, à des types