V.I.P · Diaporama réservé à l'usage interne des journées de restitution ExoMOD 2017 . Echantillonnage Mécanismes Proximaux Hémolymphe Liquide Marsupial Œuf Pulli Contrôle

Projet ExoMOD PEPS Réseau 2016

Sophie Beltran-Bech Christine Braquart-Varnier Julien Verdon INEE

Karim Arafah Sébastien Voisin

V.I.P.s Vivipary, Immune Priming and symbiosis

Les isopodes terrestres, modèle de choix pour l’étude du transfert maternel d’immunité – avantage de la viviparité et apports de l’endosymbiose

Philippe Bulet INSB

UMR 7267 Poitiers

Transfert Maternel d’Immunité

Effet Maternel dans lequel l’expérience pathogénique de la mère peut influencer le phénotype immunitaire de la descendance

Les descendants peuvent se défendre contre des pathogènes même si leur propre système immunitaire n’est pas encore suffisamment efficace.

Diaporama réservé à l'usage interne des journées de restitution ExoMOD 2017

Théories et Hypothèses

Démonstration d’une plasticité immunitaire : Ontogénique et Trans-Générationnel (TTGI)

Immunité chez les invertébrés Uniquement innée Pas d’immunité acquise pas de mémoire pas de plasticité immunitaire


Théorie de l’évolution des traits d’histoire de vie Plusieurs facteurs écologiques peuvent conduire à l’évolution du TTGI - Animaux à durée de vie longue : capacité de lutte aux infections et mémoire - Faible capacité de dispersion - Philopatrie : prévisibilité de leur environnement - …/…

Théories et Hypothèses


Les isopodes terrestres –

Modèle de choix en accord avec la théorie

Isopodes terrestres

[1] Vie longue : 3 à 10 ans

[2] Mode de vie terrestre = adaptations contre la dessiccation

[a] Agrégation

[b] Présence d’un Marsupium

[3] Marsupium = espace clos; les œufs baignent dans le liquide marsupial qui est en interaction avec l’hémolymphe, ~ utérus

[4] Itéropare = les femelles pondent plusieurs fois dans une même année


Entrée en reproduction = Vitellogenèse

exogène

Mise en place Marsupium

Accouplement

Cycle de reproduction d’Armadillidium vulgare

Mue parturielle

©UMR 7267

©UMR 7267 ©UMR 7267



Emergence des pulli

Gestation (1 mois)

Développement des œufs

Ponte des œufs dans Marsupium

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Grains de café

Pré-pulli (mancae)


Emergence des pulli

Gestation (1 mois)



©UMR 7267

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Emergence des pulli

Gestation (1 mois)




V.I.P.s Année 1 : Faisabilité /

Salmonella (103) Bacillus (103) LB

T0j T7j Grains de café / Pré-pulli

Mécanismes Ultimes

Mécanismes Proximaux

- Nombre d’œufs pondus, de pré-pulli ou de pulli émergés - Suivi des descendants: poids, survie et immunocompétence

Prélèvements : - Liquide Marsupial - Hémolymphe - Œufs ou Pré-pulli

- Activité Antimicrobienne des œufs, pré-pulli et pulli - Code-Barres des œufs, pré-pulli et pulli - Code-Barres de l’hémolymphe et du liquide marsupial de la mère

Prélèvement : - Pulli

©UMR 7267

©UMR 7267


Collectes des échantillons

(HL, LM, Œufs et Pulli)

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Signatures suivant

tissus et infections par B. m. versus S. t.

CODE-BARRE MALDI-TOF MS

Extraction des polypeptides

SPECTROMETRIE DE MASSE MALDI

Modèle d’étude TTGI B. megaterium

S. typhimurium

Empreintes MALDI MS

DEPOTS ECHANTILLONS

ACQUISITIONS SPECTRALES

TRAITEMENTS STATISTIQUES CODE-BARRE DIFFERENTIEL

Procédure d’analyses Mécanismes Proximaux


Echantillonnage Mécanismes Proximaux

Hémolymphe Liquide Marsupial Œuf Pulli Contrôle 3 3 12 6

Injection Bacillus 3 3 5 5

Injection Salmonella 3 4 9 6

Cohorte d’échantillons utilisée pour dresser les code-barres moléculaires


m/z 5262 (Armadillidine)

Spectres MALDI-MS (m/z 2000-20000) Code-Barre différentiel des hémolymphes



Signatures histologiques et infectieuses



Conditions exp. Hémolymphes Liquide marsupial Œufs

Pulli Stade grain Stade pré-pulli Stade grain Stade pré-pulli

Contrôles (Ctrl) 16 19 8 3 6 4 Infection B. megaterium 20 8 15 1 8 7

D ions : B. m. – Ctrl 4 -11 7 -2 2 3

Infection S. typhimurium 20 26 51 14 25 3

D ions : S. t. – Ctrl 4 7 43 11 19 -1

Signatures histologiques et infectieuses


Etude différentielle des ions inventoriés en fonction des matrices biologiques et des infections

Modulations des ions : En fonction des compartiments histologiques = code-barres « histo-spécifiques » En fonction de la nature du pathogène = code-barres « histo-infectieux »

Stade grain de café Code-barres modulés

par B. m.

Stade pré-pulli Code-barres modulés

par S. t.

Code-barres « histo-specifiques » du Liquide marsupial

Code-barres histo-infectieux


Conclusion


Etablissement de profils moléculaires propres aux différents compartiments histologiques : code-barres « histo-spécifiques »

Analyses statistiques des listes de polypeptides modulés

en fonction des stades histologiques et des infections : code-barres « histo-infectieux »

Possibilité de tracer l’évolution du PAM Armadillidine en 2D

(« histo-spécifiques » et « histo-infectieux ») Empreintes moléculaires polypeptidiques par MALDI en soutien

pour l’étude des mécanismes ultimes chez Armadillidum vulgare


Mécanismes Ultimes

Pas d’effet du traitement sur le nombre de descendants Effet du traitement sur le taux de survie des descendants à 3 mois


V.I.P.s Année 2 : Bilan

Faisabilité : Mécanismes proximaux : Mécanismes ultimes :


MERCI

Projet ExoMOD PEPS Réseau 2016

Membres participants et sympathisants du projet V.I.P.s


Documents

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