3cours les méthodes de diagnostic des pathologies virales

LES VIRUSGENERALITES

METHODES DE DETECTION DES VIRUS

LES TRAITEMENTS

Objectifs

Pourquoi faire le diagnostic virologique ?Quels sont les méthodes de diagnostic?Quels sont les traitements?

POURQUOI FAIRE LE DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE?

virus généralités: Pr. Latifa Berrezouga

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Méthodes de détection des virus

- Dépistage des virus: don de sang, d’organes et de tissus- Suivi biologique des infections: VIH, VHB, VHC- Prise de mesures prophylactiques et contrôle des épidémies ex. grippe, Rotavirus et VRS en pédiatrie- Faire des études épidémiologiques (prévalence, réservoir du virus, transmission)- Prouver l’origine virale d’une infection - Prise de décisions thérapeutiques (développer des antiviraux)

QUELLES SONT LES MÉTHODESDE DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE ?


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Méthodes de détection des virus: Schéma général


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Méthodes de détection des virus: Le prélèvement

Choix du prélèvement: selon la cliniqueRecherche d’une porte d’entrée, sites de multiplication ou d’excrétion des virus

Le prélèvement doit être réalisé le plus tôt possible après le début des signes cliniques(multiplication du virus pendant la phase d’incubation)

Acheminement du prélèvement au laboratoire dans un milieu de transport, le plus rapidement possible Transmission des renseignements cliniques avec le prélèvement


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Méthodes de détection des virus: Sérologie

Diagnostic de Primo-infection

Apparition des anticorps entre 2 sérums d’un patient1 sérum précoce (négatif) et 1 sérum tardif (positif)

Définir le statut immunitaire vis-à-vis d’un virus1 seul sérumSavoir si un patient à déjà rencontré un virus précis (Ac positif) ou non (Ac négatif)


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Méthodes de détection des virus: Culture de virus


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Culture de virus : technique de référenceVirus ne peut se multiplier que dans des cellules vivantes

-Animal: culture du Coxsakievirus A-Œuf de poule embryonné: virus de la grippe- cellules en culture in vitro

Transport rapide du prélèvement au laboratoire, dans un milieu de transport, pour conserver le pouvoir infectieux du virus

Lignées cellulaires

Lignées primaires: lignée directement issue Sang, biopsie de peau ou d’organe

Inconvénients: Matériel en faible quantitéMélange de différents types cellulairesCes cellules ne peuvent être maintenues en culture que pendant quelques générations.

Avantage: proche de la réalité


Les cellules "immortalisées"

Lymphocytes B et Fibroblastes: infection par EBVet Virus SV40, respectivement.Fibroblaste primaire : 10-12 générations Fibroblaste humain immortalisé : 30-40 générations

Inconvénients: Seuls deux types cellulaires sont disponibles sous cette formeOn introduit des gènes à effet prolifératif et anti-apoptotique, modifiant donc ces activités cellulaires


Les cellules tumoralesDisponibles: cancers de tous les types cellulairesDivision rapide, conservation des cultures pendant très longtempsInconvénients: mutations



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Méthodes de détection des virus: Directe: Culture cellulaire

exemple

17virus généralités: Pr. Latifa Berrezouga

Milieu de culture

eau ions minéraux , pH autour de 7,2% source de carbone et d’énergie (glucose, pyruvate par exemple) de facteurs de croissance:-Les acides aminés essentiels- les vitamines- des acides gras comme l’acide arachidonique des gaz:-Le dioxygène les cellules étant aérobies - Le dioxyde de carbone 5%, 37°C

Méthodes de détection des virus: Culture cellulaire


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Cellules dissociées déposées sur une surface solide


Les cellules en culture sont :Hors interaction avec les autres types cellulairesDans un milieu dont les facteurs de croissance ne sont pas forcément les bonsHors de leur contexte matricielEn monocouche au lieu d’un contexte 3D

Méthodes de détection des virus: Directe: Culture cellulaire


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Méthodes de détection des virus: Directe: Culture de virus

Détection d’un ECP (effet cytopathique) au microscope

Temps d’apparition de l’ECP:-24h pour un EBV (Epstein Barr virus)- 2-3 jours pour un HSV -4-5 jours pour un VZV-10-15 jours pour un CMV

Détection précoce par des anticorps monoclonaux à 24-48h de culturePar ELISAPar IF


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ECP: Effet Cytopathique


- Monocouche de cellules humaines sensibles(détection d’un effet cytotoxique. Ex. Herpes-Tapis bactériens (plages de lyse causées par lesvirus bactériophages)-Tissus ex vivo (ex. morceaux d’amygdales contenant des lymphocytes pour étude du VIH - œufs embryonnés pour culture du virus influenzae


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Autres méthodes PCR PCR: Polymerase Chain Reaction

Méthodes de détection des virus: Directe: PCR: Réaction de polymérisation en chaine

Une photocopieuse à ADN


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PCR: Réaction de polymérisation en chaineAmplification de l’ADN viral


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PCR: Réaction de polymérisation en chaine

Diagnostic direct: détection du génome


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PCR: Réaction de polymérisation en chaine

PCR quantitative: détection du génomeCharge virale nb de copies de génome viral par ml de plasma

QUELLES SONT LES PRINCIPALES APPLICATIONS

DU DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE ?


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Diagnostic des pathologies virales sévères

- HSV dans LCR (liquide cépalorachidien): Méningo-encéphalite (urgence)- CMV: PCR quantitative en cas de dons d’organes (greffés de rein)- VIH: PCR qualitative: dépistage du VIH chez le nouveau-né- PCR quantitative: quantifier la charge virale pour le suivi thérapeutique - VHC: Sérologie + PCR


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Structure détectée Méthode Applications

Virus complet Culture virale HSV, VZV, Entérovirus, adénovirus

Protéines virales(antigènes)

Diagnostic « direct » Rotavirus, adénovirus, VRS, virus de la

grippe, HSV, CMV, VZV

Acides nucléiques viraux

Biologie moléculaire HIV, HCV, HBV, V. respiratoires

V. opportunistes,V. neurotropes

Méthodes de détection des virus: Applications

HSV: Herpes s Smplex virus, VZV: virus de la Varicelle et du Zona, VRS: Virus respiratoireSyncitiale, CMV: Cytomegalovirus,


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Méthodes de détection des virus: microscopie électronique à transmission

Chaque année, 90% au moins de la population souffre d'une maladie virale

Au moins 60% des maladies infectieuses sont imputables aux virus

Le nombre d'agents antiviraux est relativement peu élevé

Les antibiotiques sont inefficaces contre les virus

Les récents produits ciblent l’infection à VIH Ils visent toutes les phases du cycle viral

Les antiviraux

Les antiviraux

-Utiliser des doses optimales oAssocier plusieurs antiviraux (ex. VIH), pour augmenter l’efficacité du traitement,diminuer la toxicité des médicaments et prévenir l’émergence de mutantsrésistants- Mettre en route le traitement le plus rapidement possible


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Les antivirauxLes antiviraux doivent bloquer la réplication du virus sans atteindre le Métabolisme cellulaire

Les antiviraux ont un effet virostatique (et pas virucide)Ils agissent sur des virus en cours de réplicationIls n’ont pas d’action sur les virus en phase de latenceIls agissent sur quelques virus: virus des hépatites, VIH, herpesvirusLa variabilité génétique des virus est un problème à l’origine de l’émergence de mutants résistants

33virus généralités: Pr. Latifa BerrezougaVirus: cibles des antiviraux aux différentes étapes de La réplication virale

Les antiviraux

Les antiviraux


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Les vaccins

BCG: Bacille de Calmette et Guerrin (vaccin contre la tuberculose), HBV: vaccin contre le Virus de l’hépatite B, DTC: vaccin contre la Diphtérie, Tétanos et Coqueluche, PO: vaccin contre la poliomyélite

QU’EST-CE QUE VOUS CONSIDÉREZ COMME CONNAISSANCE GÉNÉRALE ?

Education

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