Virus de l'h©patite a et e virus et marqueurs diagnostiques

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P. Lebray

Text of Virus de l'h©patite a et e virus et marqueurs diagnostiques

  • 1. Virus de lhpatite A et EVirus et marqueurs diagnostiquesVincent THIBAULTLaboratoire de Virologie Groupe HospitalierPiti-SalptrireAssistance Publique Hpitaux de Paris V.Thibault DU_janv.-11 1

2. Hpatites virales mode de transmission prfrentielparentralfco-oralBnon A, non B A 1965D1972 Vaccin 1977C E Vaccin 19901991 (Vaccin) F, G, TTV, autresV.Thibault DU_janv.-11 2 3. V.Thibault DU_janv.-11 3 4. Historique VHA Avant J.C.: La Jaunisse (Ikterus / kirrhos) 1745 : Cockayne, hpatites pidmiques 1908 : McDonald, "notion de virus" Reproduction de la maladie 1942 :Volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum Entit clinique : 1995 : Vaccin 17-18me sicle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA"infectious"-VHB recommandations1996 : "serum") Transmission nosocomiale (prparation vaccinale : variole, fivre jaune) Visualisation : 1973 (Feinstone)1999 : recommandations Dveloppement de la srologie : pidmiologie 1979 : culture (Provost et Hilleman) 1981... : Clonage, Squences nuclotidiques 1991 : Vaccination 2006 : Dclaration obligatoireV.Thibault DU_janv.-11 4 5. Virus de lhpatite AV.Thibault DU_janv.-11 5 6. Virus de lHpatite A Famille : Picornaviridae Capside(entrovirus type 72) Genre : hpatovirus Taille 27-32 nm27-32nm ARN (+) Non envelopp Structure icosadrique ARN simple brin, Vpg polarit positive li de faon covalente une protine Vpg V.Thibault DU_janv.-11 6 7. P1 prot. Capside P2 P3 0Structurales Non structurales7478 1B1C 1D 2A 2B2C 3 3C (PRO)3D (POL) AAAA-BVpg1A2.5kDa IRES 3 Traduction2A A-B (eIF-4G) poly- VP2 VP3 VP12B 2C3C (PRO) 3D (POL)protine VP42 227 AA ?VpgProtaseLiaison NTPHlicaseARNVP0PolymraseVP2VP3 VP1 Rplication VP42AVP2VP3 VP1X5 X12 VP4Protines de surface2AMaturation finale immunognicit V.Thibault DU_janv.-11 7 8. Cycle de multiplication du VHA en culture de cellulesAttachement LibrationRplication du gnome Espace+ de Disse-ir eTraduction cellulaSynthse +de la polyprotine - raneP3 MembMaturation P2Rticulum endoplasmiqueP1 Empaquetage Canalicule RelargagebiliaireV.Thibault DU_janv.-11 8 9. Hepatitis A Virus Suppresses RIG-I Mediated IRF-3 Activation ToBlock Induction of Beta Interferon**Seth et al. Cell Research (2006)16: 141-147Fensterl et al. JOURNAL OF VIROLOGY, Sept. 2005, p. 1096810977Yang et al. (2007) PNAS 104 :7253-7258V.Thibault DU_janv.-11 9 10. VHA : physiopathologie Absence deffet cytopathique direct : cytolyse rsultant du processus immun de dfense de lhte, mdiation cellulaire mdiation humoraleV.Thibault DU_janv.-11 10 11. Proprits Physiques du VHA Agents Stabilit ChaleurAutoclavage (121C, 20) Inactivation100CInactivation60C Stable 1 heuretemprature ambiante Stable 1 mois (selles, eaux, sols) Plusieurs jours sur surface sche 4 h. Sur les mains4CStable plusieurs moisCongelStable des mois ou annesAcide-base pH 1 : stable 5 h. PH 3-11 : stable au moins 30U.V. Inactivation ChimiquesChlore, ozone, Inactivationglutaraldhyde, iodeAlcool 70 3 : inactivation partielleV.Thibault DU_janv.-11 11 12. VHA et agents physiques ou chimiqueshttp://www.invs.sante.fr/publications/2009/guide_hepatite_aV.Thibault DU_janv.-11 12 13. Variabilit gntique P1 prot. Capside P2 P3 0 Structurales Non structurales 74781B1C 1D 2A 2B2C 3 3C (PRO)3D (POL) AAA A-BVpg1A2.5kDa Comparaison nuclotidique 7 Gnotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII Homme : gnotype I (90%), (III, II=VII) Singes : IV, V, VI Srotype unique Nombre limit dpitopes antigniques VP1, VP3 Tests immunologiques Vaccination (HM175, CR326) virus inactiv cultiv sur MRC-5 V.Thibault DU_janv.-11 13 14. Gnotypes et phylognieVP1/P2AGnotypes : >15% variationsSous types : 7.5% variations Daprs Nainan et al. 2006 Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79IV Nonhuman primate, PhilippinesV Nonhuman primate, KenyaVI Nonhuman primate, IndonesiaPhylogenetic analysis of 3,582 HAV isolatesin the VP1/P2B region (315-bp fragment). V.Thibault DU_janv.-11 14 15. Rpartition mondiale des gnotypesGnotypes infectant lhomme en noir , les singes en rouge.Souche PA21 (gnotype IIIA), isole dun singe Panamanian Owl en vert.Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7. V.Thibault DU_janv.-11 15 16. Application ltude de diffusion de Icertaines souches Diffusion du gnotype IIA en France partir dune origine Africaine IIDiversit gntique dun gnotype raredu virus de lhpatite A IIIPathologie Biologie, In Press, Availableonline 6 September 2010D. Desbois et al.V.Thibault DU_janv.-11 16 17. VHA : Paramtres BiologiquesAc anti-VHA = hpatite A ancienne ou vaccinationIgM anti-VHA = hpatite aigu A (clinique)protection contre rinfection Ag foie IgGSymptomes IctreVHA SellesIgMVHA Sang 0 1 234 56 7 8 91024SemainesV.Thibault DU_janv.-11 17 18. IgM HAV uniquement bon escient !1% 11 % 82 % Faux positifsRoque Afonso et al. CID 2006:42 -887 Alaska : test "rflexe" si Ig-VHA totales +Ig M HAV32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86) Vaccination : 8 20 % dIgM VHA + dans les 2 3 semaines suivant linjection NE RECHERCHER LIgM anti-VHA QUEN CAS DHEPATITE AIGUV.Thibault DU_janv.-11 18 19. Marqueurs biochimiques Diagnostic Transaminases (ALAT, ASAT) Bilirubine Phosphatase alcaline Facteurs de coagulationSrologie +++IgM anti VHA : infection rcenteIgG anti VHA : infection passe ou vaccinationIgM et IgG anti VHADiagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre dtudes]Virmie : techniques sensibles (105 v./mL)Recherche de virus dans les selles, prolonge, importante(109v./mL), pidmiologie Salive : IgG (ELISA)V.Thibault DU_janv.-11 19Gnome viral (RT-PCR) 20. Quantification de la virmie ? Limite de quantification11 Hpatites ANormann et al.,Journal of Medical Virology 72:1016 (2004) Hpatite fulminanteEvolution bnigne Fujiwara K et al.50 Hpatites A dont 19 fulminantes (10 OLT)J. Med Virol. 2011 Feb;83(2):201-7. Hpatite fulminante : Hepatitis A viral load in relation to-virmie (p=0.03) *severity of the infection.-bilirubine -(p=0.04) * 11 patients with fulminant hepatitis-age (p=0.09) 10 with severe acute hepatitis-gnotype non IA (p=0.09) 70 with self-limited acute hepatitisRezende et al., Hepatology 38:613-618 (2003)V.Thibault DU_janv.-11 20 21. Dure de la virmie: consquences cliniques et biologiques6-7 5-6 2-5 Log particules/mLSuivi de 13 patients : dure moyenne 95 jours Suivi de 27 patientsdont 2 avec rechute (1-2 mois)High and Persistent Excretion of Hepatitis ADuration of viremia in hepatitis A virusVirus in Immunocompetent Patients infection Tjon et al.Bower et al. Journal of Infectious DiseasesJournal of Medical Virology 78:13981405 (2006)2000;182:127V.Thibault DU_janv.-11 21 22. Hpatite A : le vaccin virus inactiv AVAXIM 160U suspension injectable seringue prremplie Virus de lhpatite A souche GBM cultive sur cellules diplodes humaines MRC- 5 , inactiv HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue Souche HM 175 du virus de lhpatite A cultive sur cellules humaines diplodes MRC5Le schma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie dun rappel (1 dose) 6 12 mois plus tard.Lapersistance des anticorps anti-VHA aprsvaccination nestactuellement pas connue . Les donnes disponibles suggrent la persistancedes anticorps anti-VHA un niveau protecteur au moins jusqu 20 ansaprs primo-immunisation.Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure ProphylaxisVictor et al. 2007 N Engl J Med 357;17V.Thibault DU_janv.-11 22 23. Difficults diagnostiques En routineAdresser prlvements auCentre national de rfrence du VHA Pr E DussaixLaboratoire de virologieHpital Paul Brousse 12-14 av Paul Vaillant Couturier94804 Villejuif cedex Tel : 01 45 59 37 21http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste V.Thibault DU_janv.-11 23 24. SRAS ?Hpatite E ?GrippeV.Thibault DU_janv.-11 24 25. Historique VHE Dcouverte dpendante de la connaissance des virus des hpatites 1955 : Inde, hpatite chez des personnes immunises contre leVHA, pidmie particulire. "NANBH" Entit clinique 1980 - similitude avec lhpatite A : Inde : prvalence de lhpatite A importante Epidmie : autre virus des hpatites, contamination par leau 1983 : reproduction de lhpatite non A-non B chez un volontaire immunis contre VHA (Balayan) Hpatite J36 J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm) Reproduction de linfection chez le singe (cynomolgus) Hpatite "non A - non B" transmission entrique (ENANB) 1990 : Reyes et al. clonage et squenage "VHE" 1991 : Tam et al. VHE 2000 : Panda et al. cDNA infectieuxV.Thibault DU_janv.-11 25 26. Coloured transmission electron micrograph of hepatitis E virus particles (purple)Holmberg, Lancet Vol 376 September 11, 2010V.Thibault DU_janv.-11 26 27. VHE Virus non enveloppSphrique (SRV) Famille : Hepeviridae Surface irrgulire Genre : HepevirusCapside 27-34 nmSymtrie icosadrique ARN simple brin hlice droite polarit + 7,5kbpoly-A extrmit 3Stabilit Au laboratoire : instable(-70 +8C)Dconglation/conglation Tractus GI : stable (pH)V.Thibault DU_janv.-11 27 28. Organisation gnomique Non structuralesStructurales7 200 nt ARN polarit + 3NC5 NC 2851097124Poly-AORF3MeTY ProP X Hel RdRp ORF2 Gnotypes 1-3Protines DIAGNOSTICimmunognesHtrognit gntiqueAu moins 4 groupes majeurs (