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1DESCLI2009, Phnom Penh
ET01 & ET02Introduction aux techniques
immunologiques (Immunochimie)
Adrien Six (adrien.six@upmc.fr) Phnom PenhUniversité Pierre et Marie Curie septembre 2009
DES de Biologie MédicaleEnseignement d’Immunologie
2DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
3DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Réaction antigène/anticorps
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Réaction antigène/anticorps
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Production d’anticorps
monoclonaux
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Précipitation en milieu liquide
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Précipitation interfaciale
Techniquedu “ring test”(test qualitatif)
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Diffusion unidimensionnelle
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Diffusion simple bidimensionnelle
Technique de Mancini
Immunodiffusion radiale
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Précipitation en milieu solideTechnique d’Ouchterlony
Immunodiffusiondouble
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Immunoélectrophorèse (Grabar/Williams)Combine électrophorèse et immunodiffusion double:1. Séparation électrophorétique
d’une source d’antigènes selon leur charge
2. Immunodiffusion radiale des antigènes séparés
3. Immunodiffusion d’une source d’anticorps déposée dans une gouttière sur l’un ou l’autre des côtés des antigènes séparés
4. Formation éventuelle d’arcs de précipitation
Analyse qualitative
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Immunoélectrophorèse en fusée
- Analyse quantitative- Nécessité que l’Ag soit chargé négativement
Technique de Laurell:
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Immunoélectrophorèse bidimensionnelle
Analyse qualitative & quantitative
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Réaction d’agglutination
Qualitatif: très sensible; Quantitatif: peu précis
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Test de Coombs directRecherche d’anticorps anti-Rhésus chez le nouveau-né
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Test de Coombs indirectRecherche d’anticorps anti-Rhésus chez la mère
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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RIA/ELISA
RadioImmunoAssay/Enzyme-linked ImmunoSorbentAssay
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ELISA indirect
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ELISA sandwich
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ELISA compétitif
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ELISpot
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Immunoprécipitation
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Western blot1
2
3
4
5
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Immunofluorescence - principe
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Immunofluorescence - exemple
Coupe de pancréas:Anticorps « vert » dirigé contre GAD (glutamic acid decarboxylase) marque les cellules β des îlots de LangerhansAnticorps « orange » dirigé contre l’hormone glucagon marque les cellules α
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Cytométrie de flux (1)
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Cytométrie de flux (2)
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Cytométrie de flux (3)
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Tri cellulaire par « panning »
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Tri cellulaire par cytométrie
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Tri cellulaire magnétique
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Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Sensibilité des techniques de détection
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PCR-ELISA
A. VanderBorght et al. (1999) J.Immunol.Methods 223:47.
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Immuno-PCR
M. C. Case et al. (1999) J.Immunol.Methods 223:93.
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Panama-blot
D. Stahl et al. (2000) J.Immunol.Methods 240:1.
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Immunoproteomics
Francisco J. Quintana, Peter H. Hagedorn, Gad Elizur, Yifat Merbl, Eytan
Domany, and Irun R. Cohen. Functional immunomics: Microarray
analysis of IgG autoantibody repertoirespredicts the future response of mice to
induced diabetes.PNAS 101:14615-14621, 2004.
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