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Evaluation et compréhension des propriétés antifongiques de différentes propolis
Thèse CIFRE: Auriane Dudoit
Définition: « substance résineuse récoltée par les abeilles sur les écorces et bourgeons de certains arbres et arbustes ».
La propolis
• Assurer l’étanchéité de la ruche (réduction de l’entrée de la ruche et bouger les trous) pour en faciliter la climatisation • Réparation des rayons, fissures • Embaumement des cadavres des intrus • Aseptisation de la ruche
Type de propolis Origine géographique Origine botanique Principaux constituants références
Peuplier
Ambrée à brune
Europe, Amérique du nord,
régions non tropicales de l’Asie,
Nouvelle-Zélande
Populus spp. et
principalement P. nigra
L.
Flavones, flavanones, acides
phénols et ses esters et
sesquiterpenes
[11-12, 44,
83]
Verte du Brésil Zone tropicale du Brésil
Baccharis spp.
principalement B.
dracunculifolia DC.
Derivés prénylés de l’acide
coumarique
Acides diterpeniques
Lignanes
[10, 77-78,
91]
Bouleau Nord de la Russie Betula verrucosa Flavones, flavonols, flavonones
et sesquiterpenes [87]
Propolis Rouge Cuba, Brésil, Mexique Dalbergia
ecastophyllum
Isoflavones, isoflavanes,
flavonoides et benzophénones
isoprénylées
[5, 29, 80]
Propolis rouge Cuba, Venezuela Clusia rosea
Isoflavones, isoflavanes,
flavonoides et benzophénones
isoprénylées
[46, 108,
110]
Méditerranéenne Sicile, Grèce, Malte, crête,
Turquie
Famille des
Cupressacea
Acides diterpeniques et
principalement de type labdane
[84-86,
113]
Pacifique Zone pacifique (Taiwan,
Okinawa, Indonésie) Macaranga tanarius Prényl-flavanones
[24, 57,
109]
Les types de propolis les plus répandues et leur source botanique spécifique avec leurs principales familles de composés polyphénoliques
Activités :
antibactérienne
antifongique
antivirale
antiparasitaire
antioxydante
anesthésiante
organo-protectrice (foie, reins, etc.)
en cancérologie
immuno-modulatrice
autres …
Les propriétés pharmaco-biologiques de la propolis
Cardinault et al. 2012 Phytothérapie
Mais quasi exclusivement sur des pathogènes humains
P5 Propolis verte
(Baccharis dracunculifolia)
P3 Propolis verte
(Baccharis dracunculifolia)
P6 Propolis rouge
(Dalbergia ecastophyllum)
Echantillonnage à disposition
P4 Propolis brune
(Populus nigra)
P1 Propolis brune
(Populus balsamifera )
P2 Propolis brune
(Populus nigra)
6
Profils chromatographiques des 6 extraits de propolis
P5 Propolis verte (Baccharis dracunculifolia)
P3 Propolis verte (Baccharis dracunculifolia)
P4 Propolis brune (Populus nigra)
P1 Propolis brune (Populus balsamifera L.)
P2 Propolis brune (Populus nigra)
P6 Propolis rouge (Dalbergia ecastophyllum)
Origine France
Origine Brésil
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
-50
100
200
300
400
500AURIANE1 #73 [modif ied by Grabulos] P2-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU
min
WVL:280 nm
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
-50
100
200
300AURIANE1 #79 [modif ied by Grabulos] P3-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU
min
WVL:280 nm
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
-50
100
200
350AURIANE1 #82 [modif ied by Grabulos] P5-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU
min
WVL:280 nm
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
-20
50
100
180AURIANE1 #85 [modif ied by Grabulos] P6-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU
min
WVL:280 nm
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
-100
200
400
700AURIANE1 #70 [modif ied by Grabulos] P1-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU
min
WVL:280 nm
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100
-100
125
250
375
600AURIANE1 #76 [modif ied by Grabulos] P4-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU
min
WVL:280 nm
Rappel des objectifs
- Caractérisation chimiques des composés d’intérêts
- Sélectionner une méthode d’extraction de ces composés d’intérêts compatible avec la réglementation
- Sélectionner sur des bases microbiologiques une variété de propolis présentant
une bonne activité antifongique
- Identifier / caractériser les fractions associées à ces effets antifongiques
- Incorporer la fraction active dans une forme utilisable commercialement pour le
traitement des fruits en post-récolte
Matrices et souches d’étude
Colletotrichum musae Botrytis cinerea Monilinia laxa
PLAN
1 • Cadre règlementaire
2 • Exigences
3 • Lignes directrices
4 • Recherche bibliographique
5 • Montage du dossier
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 9
CADRE RÈGLEMENTAIRE
Règlement (CE) n° 1107/2009
Art. 23 Une substance active qui répond aux critères des «denrées alimentaires» définis à
l’art. 2 du règlement (CE) n° 178/2002 est considérée comme une substance de base.
Art. 4 Approbation lorsque toutes les évaluations pertinentes régissant l’utilisation de cette
substance à des fins autres que celles d’un produit phytopharmaceutique
montrent que la substance n’a pas d’effet nocif immédiat ou différé sur la santé
humaine ou animale ni d’effet inacceptable sur l’environnement. (dérogation)
Art. 5 Approbation valable pour une période illimitée. (dérogation)
Art. 6 Conditions et restrictions.
Art. 7 à 13 Procédure d’approbation : demande, dossiers, recevabilité de la demande, etc.
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 10
Accusé réception DGAl
(+45 jours)
Avis & résultats de l’Autorité (+3 mois)
Rapport d’examen
(+6 mois)
EXIGENCES
Substance de base
Document de travail SANCO/10363/2012
rev.9
Substance active
Règlement (CE) n° 544/2011
Règlement (CE) n° 283/2013
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 11
LIGNES DIRECTRICES
OCDE
Lignes directrices pour les essais de produits chimiques
Commission européenne
Règlement (CE) n°440/2008
OEPP
Normes PP1
SETAC
Procédures d’évaluation
Règlement (CE) n° 544/2011
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 12
RECHERCHE BIBLIOGRAPHIQUE
critèresfonctions
requêteserveur de bases
de donnéesrésultats
base de données
tri synthèse
dossier
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 13
MONTAGE DU DOSSIER
1. Purpose of the application
2. Identity of the substance/product as available on the market and predominant use
3. Uses of the substance and its product
4. Classification and labelling of the substance
5. Impact on human and animal health
6. Residues
7. Fate and behaviour in the environment
8. Effects on non-target species
9. Overall conclusions with respect of eligibility of the substance to be approved as basic substance
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 14
Exemple
5. IMPACT ON HUMAN AND ANIMAL HEALTH
2. Acute toxicity
4. Skin irritation
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 15
Exigences
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 16
SANCO/10363/2012 rev.9
Retranscription des points 1.a, 1.b et 2 de l’art. 23 du règlement (CE) n° 1107/2009
Règlement (CE) n° 544/2011
« Les essais relatifs à l’irritation cutanée aiguë doivent être effectués conformément à l’annexe du règlement (CE) n°440/2008, méthode B.4. »
Lignes directrices
Règlement (CE) n° 440/2008
(Annexe – méthode B.4) ≈ Ligne directrice TG 404
(OCDE)
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 17
Espèce animale lapins albinos
Application 0,5 mL sur 6 cm² durant 4 h
Observations cliniques érythème et œdème
Période d’observation ≤ 14 jours
Périodes des
observations cliniques
60 min, 24, 48 et 72 heures après l’enlèvement
du timbre
Critères et fonctions
propolis
(11)
propolis OR "bee glue" OR "hive dross" OR "CCRIS 8561" OR
"9009-62-5" OR "288-130-6" OR "85665-41-4" OR "eth* ext* of
propolis" OR "wat* ext* of propolis" OR "propolis powder" OR
"propolis ext*"
skin
(23)
skin$ OR dermal OR acne OR melanoma$ OR rosacea OR
dermatitis OR gale OR keratose$ OR psoriasis OR wart$ OR vitiligo
OR collagen OR dermis OR fibroblasts OR hypoderme OR elastin
OR epidermis OR keratinocyte$ OR melanocyte$ OR keratin OR
melanin OR sebaceous OR sweat
irritation irritate OR irritation OR irritancy
A_cobaye
(10)
guinea NEAR/0 pig$ OR rodent$ OR mice OR mouse OR rat OR
rats OR primate$ OR rabbit$ OR gerbil$ OR hamster$
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 18
Requêtes
propolis 26/02/2016 (6148)
propolis AND skin AND irritation 26/02/2016 0/7 (6148)
propolis:in title AND irrita* 08/03/2016 0/12 (6181)
propolis AND skin AND (dermocaustic
OR tox*) AND A_cobaye
08/03/2016 1/19 (6181)
propolis:in title AND skin:in title AND
(irritation OR dermocaustic OR *tox*)
AND A_cobaye
04/04/2016 1/9 (6252)
11*23*5*10 = 12 650 combinaisons de requêtes
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 19
Résultats
Ledón et al. 2002
• 2*6 lapins (NZ)
• 0,5 mL sur 4 cm² durant 24h
• érythème et œdème
• ≤ 3 jours
• 60 min et 48 h (?)
OCDE
• lapins albinos
• 0,5 mL sur 6 cm² durant 4 h
• érythème et œdème
• ≤ 14 jours
• 60 min, 24, 48 et 72 heures après l’enlèvement du timbre
Dossier
• Source
• Protocole
• Résultats
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 20
CONCLUSION
• Actuellement, sont terminés, les items:
• 5- Impact on human and animal health
• 8- Effects on non-target species
• Items à terminer :
• 2- Identity of the substance
• 3- Uses of the substance and its product
• 4- Classification and labelling of the substance
• 6- Residues
• 7- Fate and behaviour in the environment
• 9- Overall conclusions
Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 21
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