Evaluation et compréhension des propriétés antifongiques ... · - Identifier / caractériser les fractions associées à ces effets antifongiques - Incorporer la fraction active

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Evaluation et compréhension des propriétés antifongiques de différentes propolis

Thèse CIFRE: Auriane Dudoit

Définition: « substance résineuse récoltée par les abeilles sur les écorces et bourgeons de certains arbres et arbustes ».

La propolis

• Assurer l’étanchéité de la ruche (réduction de l’entrée de la ruche et bouger les trous) pour en faciliter la climatisation • Réparation des rayons, fissures • Embaumement des cadavres des intrus • Aseptisation de la ruche

Type de propolis Origine géographique Origine botanique Principaux constituants références

Peuplier

Ambrée à brune

Europe, Amérique du nord,

régions non tropicales de l’Asie,

Nouvelle-Zélande

Populus spp. et

principalement P. nigra

L.

Flavones, flavanones, acides

phénols et ses esters et

sesquiterpenes

[11-12, 44,

83]

Verte du Brésil Zone tropicale du Brésil

Baccharis spp.

principalement B.

dracunculifolia DC.

Derivés prénylés de l’acide

coumarique

Acides diterpeniques

Lignanes

[10, 77-78,

91]

Bouleau Nord de la Russie Betula verrucosa Flavones, flavonols, flavonones

et sesquiterpenes [87]

Propolis Rouge Cuba, Brésil, Mexique Dalbergia

ecastophyllum

Isoflavones, isoflavanes,

flavonoides et benzophénones

isoprénylées

[5, 29, 80]

Propolis rouge Cuba, Venezuela Clusia rosea

Isoflavones, isoflavanes,

flavonoides et benzophénones

isoprénylées

[46, 108,

110]

Méditerranéenne Sicile, Grèce, Malte, crête,

Turquie

Famille des

Cupressacea

Acides diterpeniques et

principalement de type labdane

[84-86,

113]

Pacifique Zone pacifique (Taiwan,

Okinawa, Indonésie) Macaranga tanarius Prényl-flavanones

[24, 57,

109]

Les types de propolis les plus répandues et leur source botanique spécifique avec leurs principales familles de composés polyphénoliques

Activités :

antibactérienne

antifongique

antivirale

antiparasitaire

antioxydante

anesthésiante

organo-protectrice (foie, reins, etc.)

en cancérologie

immuno-modulatrice

autres …

Les propriétés pharmaco-biologiques de la propolis

Cardinault et al. 2012 Phytothérapie

Mais quasi exclusivement sur des pathogènes humains

P5 Propolis verte

(Baccharis dracunculifolia)

P3 Propolis verte

(Baccharis dracunculifolia)

P6 Propolis rouge

(Dalbergia ecastophyllum)

Echantillonnage à disposition

P4 Propolis brune

(Populus nigra)

P1 Propolis brune

(Populus balsamifera )

P2 Propolis brune

(Populus nigra)

6

Profils chromatographiques des 6 extraits de propolis

P5 Propolis verte (Baccharis dracunculifolia)

P3 Propolis verte (Baccharis dracunculifolia)

P4 Propolis brune (Populus nigra)

P1 Propolis brune (Populus balsamifera L.)

P2 Propolis brune (Populus nigra)

P6 Propolis rouge (Dalbergia ecastophyllum)

Origine France

Origine Brésil

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

-50

100

200

300

400

500AURIANE1 #73 [modif ied by Grabulos] P2-b 28/10/14 UV_VIS_1mAU

min

WVL:280 nm

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

-50

100

200


min

WVL:280 nm

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

-50

100

200


min

WVL:280 nm

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

-20

50

100


min

WVL:280 nm

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

-100

200

400


min

WVL:280 nm

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

-100

125

250

375


min

WVL:280 nm

Rappel des objectifs

- Caractérisation chimiques des composés d’intérêts

- Sélectionner une méthode d’extraction de ces composés d’intérêts compatible avec la réglementation

- Sélectionner sur des bases microbiologiques une variété de propolis présentant

une bonne activité antifongique

- Identifier / caractériser les fractions associées à ces effets antifongiques

- Incorporer la fraction active dans une forme utilisable commercialement pour le

traitement des fruits en post-récolte

Matrices et souches d’étude

Colletotrichum musae Botrytis cinerea Monilinia laxa

PROPOLIS

Demande d’approbation en tant que substance

de base

PLAN

1 • Cadre règlementaire

2 • Exigences

3 • Lignes directrices

4 • Recherche bibliographique

5 • Montage du dossier

Montage du dossier BSA Propolis - Jason CHANG LAM 9

CADRE RÈGLEMENTAIRE

Règlement (CE) n° 1107/2009

Art. 23 Une substance active qui répond aux critères des «denrées alimentaires» définis à

l’art. 2 du règlement (CE) n° 178/2002 est considérée comme une substance de base.

Art. 4 Approbation lorsque toutes les évaluations pertinentes régissant l’utilisation de cette

substance à des fins autres que celles d’un produit phytopharmaceutique

montrent que la substance n’a pas d’effet nocif immédiat ou différé sur la santé

humaine ou animale ni d’effet inacceptable sur l’environnement. (dérogation)

Art. 5 Approbation valable pour une période illimitée. (dérogation)

Art. 6 Conditions et restrictions.

Art. 7 à 13 Procédure d’approbation : demande, dossiers, recevabilité de la demande, etc.


Accusé réception DGAl

(+45 jours)

Avis & résultats de l’Autorité (+3 mois)

Rapport d’examen

(+6 mois)

EXIGENCES

Substance de base

Document de travail SANCO/10363/2012

rev.9

Substance active




LIGNES DIRECTRICES

OCDE

Lignes directrices pour les essais de produits chimiques

Commission européenne

Règlement (CE) n°440/2008

OEPP

Normes PP1

SETAC

Procédures d’évaluation



RECHERCHE BIBLIOGRAPHIQUE

critèresfonctions

requêteserveur de bases

de donnéesrésultats

base de données

tri synthèse

dossier


MONTAGE DU DOSSIER

1. Purpose of the application

2. Identity of the substance/product as available on the market and predominant use

3. Uses of the substance and its product

4. Classification and labelling of the substance

5. Impact on human and animal health

6. Residues

7. Fate and behaviour in the environment

8. Effects on non-target species

9. Overall conclusions with respect of eligibility of the substance to be approved as basic substance


Exemple

5. IMPACT ON HUMAN AND ANIMAL HEALTH

2. Acute toxicity

4. Skin irritation


Exigences


SANCO/10363/2012 rev.9

Retranscription des points 1.a, 1.b et 2 de l’art. 23 du règlement (CE) n° 1107/2009


« Les essais relatifs à l’irritation cutanée aiguë doivent être effectués conformément à l’annexe du règlement (CE) n°440/2008, méthode B.4. »

Lignes directrices


(Annexe – méthode B.4) ≈ Ligne directrice TG 404

(OCDE)


Espèce animale lapins albinos

Application 0,5 mL sur 6 cm² durant 4 h

Observations cliniques érythème et œdème

Période d’observation ≤ 14 jours

Périodes des

observations cliniques

60 min, 24, 48 et 72 heures après l’enlèvement

du timbre

Critères et fonctions

propolis

(11)

propolis OR "bee glue" OR "hive dross" OR "CCRIS 8561" OR

"9009-62-5" OR "288-130-6" OR "85665-41-4" OR "eth* ext* of

propolis" OR "wat* ext* of propolis" OR "propolis powder" OR

"propolis ext*"

skin

(23)

skin$ OR dermal OR acne OR melanoma$ OR rosacea OR

dermatitis OR gale OR keratose$ OR psoriasis OR wart$ OR vitiligo

OR collagen OR dermis OR fibroblasts OR hypoderme OR elastin

OR epidermis OR keratinocyte$ OR melanocyte$ OR keratin OR

melanin OR sebaceous OR sweat

irritation irritate OR irritation OR irritancy

A_cobaye

(10)

guinea NEAR/0 pig$ OR rodent$ OR mice OR mouse OR rat OR

rats OR primate$ OR rabbit$ OR gerbil$ OR hamster$


Requêtes

propolis 26/02/2016 (6148)

propolis AND skin AND irritation 26/02/2016 0/7 (6148)

propolis:in title AND irrita* 08/03/2016 0/12 (6181)

propolis AND skin AND (dermocaustic

OR tox*) AND A_cobaye

08/03/2016 1/19 (6181)

propolis:in title AND skin:in title AND

(irritation OR dermocaustic OR *tox*)

AND A_cobaye

04/04/2016 1/9 (6252)

11*23*5*10 = 12 650 combinaisons de requêtes


Résultats

Ledón et al. 2002

• 2*6 lapins (NZ)

• 0,5 mL sur 4 cm² durant 24h

• érythème et œdème

• ≤ 3 jours

• 60 min et 48 h (?)

OCDE

• lapins albinos

• 0,5 mL sur 6 cm² durant 4 h

• érythème et œdème

• ≤ 14 jours

• 60 min, 24, 48 et 72 heures après l’enlèvement du timbre

Dossier

• Source

• Protocole

• Résultats


CONCLUSION

• Actuellement, sont terminés, les items:

• 5- Impact on human and animal health

• 8- Effects on non-target species

• Items à terminer :

• 2- Identity of the substance

• 3- Uses of the substance and its product

• 4- Classification and labelling of the substance

• 6- Residues

• 7- Fate and behaviour in the environment

• 9- Overall conclusions


Documents

Evaluation et compréhension des propriétés antifongiques ... · - Identifier / caractériser les fractions associées à ces effets antifongiques - Incorporer la fraction active