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Exemple de démarche d’une recherche expérimentale
Jean MantzService d’Anesthésie Réanimation SMUR, INSERM U676
Hôpital Beaujon
Impact Factors
2001: Pain: 4,54
Anesthesiology: 3,38
Anaesthesia: 2,37
Anesth Analg: 2,27
Br J Anaesth: 2, 20
Pathophysiology of neuronal death: excitotoxicity
Cell death:
Ca/calmodulin kinase
PKC
NO synthase
PLA2
Calpains
Free radicals
Lipid peroxydation
DNA damage
Proteolysis
VOCC
NMDA-R
AMPA-R
GLUm-R
Na+
Ca++
Ca++
Ca++stores
PLC
cAMP
cGMP
Hypothèse de départ
• Le glutamate joue un rôle fondamental dans la mort neuronale ischémique
• Les anesthésiques volatils ont un effet neuroprotecteur in vitro et in vivo.
• Cet effet pourrait être transitoire et ne concerner que la mort neuronale par nécrose (non apoptotique).
Question
• Les anesthésiques préviennent-ils ou retardent-ils simplement la mort neuronale ischémique ?
But de l’étude
• Etudier les effets des anesthésiques (isoflurane) sur la mort neuronale retardée après lésion ischémique neuronale.
• Tester l’hypothèse d’une action sur la transmission glutamatergique (réduction)
Choix du modèle expérimental
• Destiné à répondre à la question posée (et non l’inverse!...)
• In vivo vs in vitro • La culture de tranche organotypique d’hippocampe.
– Modèle in vitro– Préserve les connexions physiologiques interneuronales– Contient du glutamate– Permet de tester des effets à long terme (plusieurs jours ou
semaines)
Méthodes
Durée de l’ischémie: 45 min
Effets d’un Placebo (saline) vs MK 801 (10 µM) vs Isoflurane (1%, 30 min) sur la mort neuronale induite par l’ischémie ou une charge de glutamate
Pickard L et al. Neuropharmacology 2001; 41: 700-13
Sullivan BL et al.Anesthesiology 2002; 96: 189-95
Conclusion
Quelques commentaires
• Les objectifs sont atteints• Le choix du modèle• La rigueur méthodologique• La netteté des effets• Les concentrations faibles
d’isoflurane• La concision de la discussion
Absence de dose-réponse
Absence de calcul de puissance
Absence d’exploration de la mort apoptotique
Limites du modèle:
- pertinence clinique
- durée d’observation
Points forts Points faibles
Severe incomplete cerebral ischemia (10 min)
Lecture critique d’un article scientifique: les points essentiels
• La question est-elle clairement posée?• La méthode est-elle adaptée aux objectifs ?• La population étudiée est-elle clairement identifiée ?• La population témoin est-elle clairement identifiée ?• La taille des échantillons est-elle adaptée ?• Les variables analysées sont-elles clairement identifiées ?• Le choix des variables est-il adapté aux objectifs ?• La durée de suivi est-elle suffisante ?• Les méthodes statistiques sont-elles appropriées ?• Les résultats sont-ils présentés de façon claire, détaillée et objective ?• Les conclusions sont-elles valides ?• L’impact de l’article est-il réel ?
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