View
113
Download
3
Category
Preview:
Citation preview
Influence de la structure des chromosomes sur l’expression des gènes
Préparation et observation des chromosomes
Chromosomes polyténiques
Glandes salivaires de larves de troisième stade
Chez la drosophile: 4 paires de chromosomes
Glande salivaire
Corps gras
Intestin moyen
Caeca digestif
Proventricule
Oesophage
Corps gras
Ganglion ventral
Hémisphères cérébraux
Glandes salivaires
Disques imaginaux
Machoire
Glandes salivaires
Noyaux de cellules de glandes salivaires non éclatés (X100)
Bras droit du II
Bras droit du III
Bras gauche du III
IV
Bras gauche du II
X
Chromocentre
Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 coloration orcéine acétique)
X
3L3R 2R
2L
4
Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 vue en contraste de phase sans coloration)
W (B6, C2)
W
W
Carte de Bridges
Observation microscopephotonique
Observation microscopeelectronique
Observation de la région du gène white sur le chromosome X
Constriction (C) de la partie antérieure du chromosome X
Boucle de délétion
Partie délétée
Homologue
Appariement d’une délétion de la région des gèneszeste/white avec un chromosome normal
Délétions de la région white du chromosome X
Chromosome Xnon délété
Chromosome Xdélétion wN
Chromosome Xdélétion wpn
123
w
Inversion
Boucle d’inversion sur le chromosome X
Exemples d’inversion
Une inversion du chromosome X: In(I)wm4
Pour obtenir une bonne préparation de chromosomesde drosophile il faut :
Cultiver les mouches à basse température (19°/20°C)
Le milieu doit être enrichi par de la levure de boulangerie fraîche délayée dans un peu d’eau
Une faible densité d’individu pour ensemencer la culture (5 à 10 couples)
Prélever les larves avant leur immobilisation sur la paroi des flacons de culture, elles ne doivent pas présenter d’appendices antérieurs plumeux.
Choisir des larves femelles !!!
Glandes salivairesDisque labial
Disque prothoracique dorsal
Disque clypeo-labral
Disque patte T1Disque œil antenne
Disque patte T3
Lobe du cerveau
Disque patte T2Disque d’aile
ovaire
testicule
Nid d’histoblastedorsal antérieur
Nid d’histoblastedorsal postérieur
Disque génital
Tube de Malpighi
Ilots de cellules précurseursDe l’intestin adulte
Disque d’haltère
La Dissection
*Les larve de 3ème stade sont prélevées et déposées sur une lame de microscope dans du sérum physiologique.
*La larve est observée sur fond noir au grossissement x10 d’une loupe binoculaire
*Avec des pinces fines immobiliser la larve en la pinçant au tiers antérieur et avec une deuxième pince tirer sur la machoire
*Vous devez aboutir à la figure suivante
Dissection de la larve d’après : http://wwwusers.imaginet.fr/~pol/4chrgean.htm#Protocole
Glande salivaire
Corps gras
Intestin moyen
Caeca digestif
Proventricule
Oesophage
Corps gras
Ganglion ventral
Hémisphères cérébraux
Glandes salivaires
Disques imaginaux
Machoire
Dissection de la partie antérieure d’une larve de 3ème stade
*Les glandes salivaires se présentent sous la forme de deux tubesréunis en un canal unique au niveau de la mâchoire (voir photo).
*Les glandes sont souvent recouvertes de corps gras.
Glandes salivaires
Corps gras
*Prélever les deux glandes en essayant au maximum d’éliminer le corps gras ceci sans léser les glandes, les transporter sur une autre lame dans de l’acide acétique 45%, acide lactique, et laisser environ 30 secondes
*Remplacer l’acide acétique par la solution de coloration:orcéine/acide acétique/acide lactique (2g orcéine dans 50 ml acide acétique + 50ml acide lactique)
*Laisser colorer environ au moins 15 minutesCouvrir la préparation avec une lamelle
Eclatement des noyaux des cellules des glandes salivaires
Tapoter avec la pointe d’un crayon de papier sur la lamelle à l’endroit ou se trouve les glandes salivaires.
Taper fortement plusieurs fois sur la lamelle avec l’autre extrémité du crayon
Mettre la préparation sur du papier filtre et presser très fortement avec le pouce sur la lamelle en faisant attention à ce qu’elle ne glisse pas
Bras droit du II
Bras droit du III
Bras gauche du III
IV
Bras gauche du II
X
Chromocentre
Recommended