View
103
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
• Le test E.L.I.S.A. est un test immunologique ; il permet de détecter des anticorps sécrétés en réponse à une infection.
• Il est utilisé pour le dépistage du SIDA avec un second test de confirmation par immuno-transfert (Western-blot)
• Nous allons détecter la présence d’anticorps anti-BSA ( Bovine sérum albumine) dans le sérum d’un lapin
La première étape : le « cotting » a été réalisée par le fournisseur; il s’agit
de tapisser le fond des puits avec la BSA par effet électrostatique
Deuxième étape:on verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits
On verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits
On verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits
Si le lapin est « contaminé », son sérum possède des anticorps anti-BSA
Si le lapin est « contaminé », son sérum possède des anticorps anti-BSA
Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la BSA qui tapisse le fond
du puits.
Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la BSA qui tapisse le fond
du puits. On vide ensuite le puits d’un
geste rapide.
Puis le puits est lavé avec une solution tampon twin pour
enlever les quelques anticorps non fixés.
Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est
couplé à une enzyme: la
péroxydase.
Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est
couplé à une enzyme: la
péroxydase.
Les anticorps de détection se fixent aux anticorps anti-
BSA.
Les anticorps de détection se fixent aux anticorps anti-
BSA.
Le puits est vidé et lavé deux fois avec le
tampon twin
Le puits est vidé et lavé deux fois avec le
tampon twin
Quatrième étape:On verse dans le puits la
solution révélatrice contenant le substrat de la péroxydase:
le TMB ( tétra-méthyl-benzidine).
Le TMB se colore en bleu en présence de
l’enzyme
Le TMB se colore en bleu en présence de l’enzymeLa coloration bleue indique donc la présence d’anticorps
anti BSA. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la
concentration d’anticorps anti-BSA ; cette méthode permet donc un dosage par colorimétrie
Recommended