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Test de compatibilité au laboratoire

Test ultime au lit du malade

AHU Houda Romdhane CRTS Sousse Interprétation et validation des tests immuno-

hématologiques

20 Octobre 2016 Tabarka

Prélèvement Donneur Préparation Qualification

Biologique Distribution Transfusion Receveur

Etablissement de transfusion sanguine ETS

Etablissement de Soin ES

La sécurité transfusionnelle comporte un ensemble de mesures à

prendre en vue de prévenir les complications inhérentes à la

transfusion . Test de

compatibilité au laboratoire

Test ultime au lit du malade

Introduction

Introduction

Un ensemble d’examens immuno-hématologiques est nécessaire

avant toute transfusion de CGR:

GS ABO et RhD du patient

Phénotype Rhésus(C,c,E,e) et Kell(K)

Test de compatibilité au laboratoire

RAI.

Test de compatibilité au laboratoire ( Cross Match)

�Obligatoire avant toute transfusion de CGR :circulaire (49/05)

�Sérum du patient testé vis-à-vis des unités de CGR à transfuser

� Doit comporter, au minimum, un test à l’anti-globuline

Humaine(AGH).

�Permet de vérifier l’absence chez le receveur d’Ac reconnaissant

des Ag présents sur les GR à transfuser autres que les Ag ABO.

�Permet une distribution nominative du CGR

�Ne dispense en aucun cas du contrôle ultime au lit du malade

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

1. Prescription de la demande

2. Prélèvement

3. Réalisation pratique

4. Lecture et Interprétation

5. Durée de validité

6. Traçabilité

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Modalités pratiques

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

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1/ Prescription de la demande

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Formulaire de demande de produits sanguins (Circulaire 49/05).

N.B: Patient GS inconnu:

déterminer d’abord le GS !!!

Demande dûment remplie et accompagnée:

� d’une carte de GS

� d’un prélèvement sanguin.

• De moins de 72h/ Tube sec: sérum

EDTA: plasma

• Quantité suffisante

• Sérum hémolysé: non utilisé

• Ne pas prélever à partir de la branule.

• Étiqueter l’échantillon au chevet du malade

• L’étiquette doit comporter Nom, Prénom, Matricule/DDN.

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2/ le prélèvement

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

1. Vérification du GS du patients: EG

� Eviter les erreurs de prélèvement.

2. Choix des unités de CGR à tester:

� Règles immunologiques de la transfusion

� ATCD: historique transfusionnel et immuno-hématologique

du patient: GS,RAI,TCD…)

3. Vérification du GS de l’unité à tester:

� Eviter les erreurs d’étiquetage

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3/ Réalisation pratique: Etapes à respecter

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

4. Bien centrifuger l’échantillon: 4000tr/5-10min

5. Choix de la technique :

� TCI en respectant les bonnes pratiques de laboratoire.

6. Maintien de la chaine du froid:

� Laisser les CGR le moins de temps possible sur la paillasse

� Travailler prescription par prescription (Sécurisation de

l’identification)

7. Conserver les tubes pendant 7j à 4degré pour une éventuelle

réévaluation

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3/ Réalisation pratique: Etapes à respecter

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Donor RBCs (washed)

Patient serum

Pas d’ agglutination ~ compatible

Agglutination ~ incompatible

3/ Réalisation pratique: Principe LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Test indirect à l’anti-globuline humaine= Test de Coombs Indirect(TCI)

En tube

-1 goutte de la suspension

d’hématies du donneur à 3% en salin*

-2 gouttes du sérum à tester -Incubation à 37°C pendant 45 mn* -3 lavages -Ajout de l’AGH -Centrifugation 20 s à 1500 trs/mn -Lecture

En gel test : GDL

-50 μl de la suspension d’hématies du

donneur à 0.8 % en salin* -25 μl du sérum à étudier -Incubation à 37°C pendant 45 mn*

-Centrifugation 10’ à 800tr/mn -Lecture

12 * Si les hématies sont préparées dans une solution à basse force ionique (BFI): incubation

pendant 15 mn seulement

3/ Réalisation pratique: Technique= TCI

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

En tube En gel test

�3 lavages : risques:

-lavage insuffisant: neutralisation de l’AGH -Dissociation du complexe Ag-Ac

� AGH ajoutée secondairement sur le culot lavé

�Pas de lavage (diminution du temps d’analyse: important pour test de compatibilité)

�Standardisation: AGH présente dans le milieu de filtration( quantité identique pour tous les tests ) Evite toute erreur technique par omission de l’ajout de l’AGH

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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

En tube En gel test

�Recherche des agglutinats par agitation :

� agitation trop forte

Faux négatifs (dissociation des faibles agglutinats)

� agitation trop faible après une centrifugation très rapide

Faux positifs

�lecture directe sans agitation du support de réaction

�centrifugation standardisée .

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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

En tube En gel test

�Reproductibilité médiocre pour les Ac de faible titre

�Sensibilité moindre

� Relecture différée impossible

�Meilleure reproductibilité

�Sensibilité +++

�Relecture différée possible: sécurité d’attribution des résultats

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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

En tube En gel filtration (cotation Diamed)

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Les résultats sont exprimés en nombre de croix

4/ lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

En tube En gel filtration

(cotation Diamed)

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3/ Lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

� Absence d’agglutination � test de compatibilité négatif

� Joindre une Etiquette solidaire aux unités compatibles.

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4/ lecture et Interprétation

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

�Présence d’une réaction d’agglutination avec une ou plusieurs unités

� test de compatibilité positif.

�Toute unité positive est dite incompatible et ne pourra être délivrée

(sauf accord du responsable et dans des cas très particuliers d’auto Ac

sans allo Ac masqué)

�Distribution, livraison

� Un Cross match positif impose des explorations quant au

problème impliqué.

� le patient ne devrait pas être transfusé avant que la cause du

problème ne soit décidée → sélection de sang approprié.

� Quand une incompatibilité est détectée, les résultats du

témoin auto et la RAI devraient être passés en revue.

4/ lecture et interprétation

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

CM positif

Vraie agglutination

RAI, T auto TCD,élution

Phénotypage :éventuellement élargi pour R et D

Fausse agglutination

-Qualité de l’échantillon? -Respect des conditions opératoires?

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4/ lecture et interprétation

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

� Problème technique:

• Forte concentration de la suspension des CGR?

• Lavage non fait du culot globulaire?

• Problème de centrifugation des cartes?

� Problème mécanique:

• Phénomène de rouleaux?

• Prélèvement branule?

• Présence d'Artefacts: carte gel desséchée? Périmée?

4/ lecture et interprétation: Fausse agglutination

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Vraie Agglutination

RAI T auto

TCD

RAI Négative T auto Négatif

TCD Négatif

RAI positive T auto Négatif

TCD Négatif

RAI positive T auto positif

TCD Positif

Anticorps anti-privé test de compatiblité positif reproductible avec une seule unité

AlloAc identification →CGR compatibilisés dépourvus des Ag correspondants

Situation complexe Auto Ac ± Allo Ac

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4/ lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

3 se

mai

nes

3 m

ois

Taux de l’Ac

1èr

e tr

ansf

usio

n 3jours

CM négatif

CM négatif

Seuil de détection de l’Ac

TS° TS°

1èr épisode transfusionnel immunogène Réponse primaire

2ème épisode transfusionnel apportant le même Ag Réponse secondaire

2èm

e tr

ansf

usio

n

5/ Durée de Validité

valide trois jours (72h) après le prélèvement de l’échantillon.

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Date de la demande

Date de l’examen (CM)

N° du CGR

Date de péremption

Nom prénom

Matricule Service Date de l’annulation

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Registre de compatibilité si labo non informatisé:

6/ Traçabilité

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Avantages • Permet d’éviter les

incompatibilités ABO. • Permet de détecter:

� les Ac anti-privé � la majorité des AlloAc.

• Assure une sécurité immunologique immédiate.

Inconvénients • Ne prévient pas l’immunisation.

• Ne garantit pas la survie des CGR

• Ne permet pas de détecter:

-les AlloAc dont l’Ag correspondant n’est

pas porté par les hématies du

donneur.

-les anticorps de faible titre en

particulier si les hématies du donneur

sont hétérozygotes. 25

Intérêts et limites

LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE

Test ultime au lit du malade ( contrôle ultime pré- transfusionnel :CUPT)

Le test ultime au lit du malade ou Contrôle Ultime Pré-

Transfusionnel(C.U.P.T)

� Dernier verrou sécuritaire avant l’acte transfusionnel,

c’est une étape obligatoire et capitale

�Rempart aux dysfonctionnements possibles à tous les niveaux

de la chaine transfusionnelle

Introduction

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Permet d’éviter ce que nous redoutons tous: l’accident hémolytique

potentiellement mortel par incompatibilité ABO

Introduction

6 points clés

� Réalisé immédiatement avant chaque transfusion

� Au lit du malade en sa présence ( aucune des étapes ne doit

être effectuée en salle de soins)

� Ne concerne qu’un seul patient à la fois

� pour le même patient; à renouveler pour chaque CGR

� Obligatoire y compris en cas d’urgence vitale

� Réalisé par la personne qui pose la transfusion:

« je contrôle, je transfuse »

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

1. Le contrôle ultime de concordance Tous les PSL

2. Le contrôle ultime de compatibilité les CGR

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Obligatoire (Circulaire 49/2005)

Réalisé en deux étapes:

L’identité du patient Contrôle ultime de concordance

En interrogeant le patient ( si son état le permet): faire décliner nom, prénom et date de naissance

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Contrôle ultime de concordance

la carte de GS

la fiche transfusionnelle

-l’étiquette adhésive au PSL -l’étiquette solidaire de l’unité de sang à transfuser

Groupes sanguins

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Contrôle ultime de concordance

Numéro du PSL

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

�� GS identiques (Receveur/CGR) : TS° ISOGROUPE

Pratiquer le contrôle ultime de compatibilité

Conformité des règles transfusionnelles:

� GS différents (Receveur / CGR) : TS° NON ISOGROUPE

Vérifier qu’elle est compatible

Pratiquer le contrôle ultime de compatibilité.

Contrôle ultime de concordance

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Contrôle ultime de compatibilité

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

- Contrôle de compatibilité ABO :Epreuve globulaire � GS ABO du patient � GS ABO du CGR à transfuser

-Les Ag présents sur les GR sont révélés par les réactifs (Ac): �Anti-A (Bleu ) �Anti-B (jaune)

- Lecture : formation d’agglutinats visibles absence d’agglutinats

Principe Contrôle ultime de compatibilité

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Contrôle ultime de compatibilité

Lame ou

plaque

4 spatules

Dispositifs: Sérums tests liquides:

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

-Bien conservés à +4°C

-Non périmés

-Régulièrement contrôlés

-Nécessité d’une procédure validée,

pour la traçabilité

Contrôle ultime de compatibilité Sérums tests liquides:

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

receveur

Contrôle ultime de compatibilité Sérums tests liquides:

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Dispositif : SAFETY CARD AB Contrôle ultime de compatibilité

Sérums tests desséchés

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Règle d’interprétation

Protocole

Personne réalisant le test

Zones individualisées:

� Identification

� Manipulation

� Interprétation

� Décision

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Dispositif : SAFETY CARD AB

Ne jamais transfuser quand il y a pour le même réactif : � agglutination avec la poche � pas d’agglutination avec le patient

Règle:

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

NE JAMAIS DONNER L’Ag QUE LE RECEVEUR NE POSSEDE PAS

Transfusion ISO groupe Je transfuse

Réaction identique :

- même aspect

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

GS Patient: B GS culot: B

Je dois valider la compatibilité

Réaction NON identique :

Transfusion NON iso groupe COMPATIBLE Je transfuse

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

GS Patient: A GS culot: O

Transfusion NON iso groupe INCOMPATIBLE JE NE TRANSFUSE PAS

Réaction NON identique :

-Patient: ne possède aucun Ag sur ses GR, il a forcément les anti-A et anti-B dans son sérum - CGR apporte l’Ag B RISQUE D’HÉMOLYSE

Je dois valider la compatibilité

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

GS culot: B GS Patient: O

Difficultés d’interprétation Devant toute difficulté ou doute dans l’interprétation: - Bloquer la transfusion,

- Refaire le contrôle ,

- Demander l’avis du médecin responsable de la TS°

- Contacter le CRTS

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

« Chaloupage » trop énergique

Surface de réaction trop petite

Aspect

homogène

Agglutinats visible

TEST ULTIME AU LIT DU MALADE

Difficultés d’interprétation

Conclusion

� Le CM Permet, quand il est réalisé dans le respect des bonnes

pratiques de laboratoire, d’assurer une sécurité

immunologique immédiate optimale.

� Adapté à la Tunisie:

� Problème de disponibilité permanente d’un panel

discriminatif et équilibré .

� L’interprétation de La RAI nécessite un biologiste bien

informé.

Conclusion

� La sécurité transfusionnelle est la responsabilité à la fois des

centres de transfusion et des services transfuseurs.

� Le contrôle ultime au lit du malade est le dernier verrou de

sécurité et permet d’éviter les accidents par incompatibilité

ABO