Numeration des gr

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La numération des globules rouges

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But 

• Déterminer le nombre de globules rouges présents dans un volume de sang total, soit le nombre de GR contenus dans un litre de sang

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Principe 

• Le comptage au microscope optique à l’état frais des GR contenus dans un volume précis de sang dilué. Le diluant utilisé prévient la lyse des GR et des GB, mais ces derniers sont normalement si peu nombreux par rapport aux GR qu’ils n’interfèrent pas dans les résultats.

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Réactifs 

Liquide de dilution :• Solution de marcano : sulfate de Na

cristallisé………….5g• Formol…………………………………….1ml• Eau distillée……………………………..qsp 100ml• Ou le soluté physiologique à 0,85g /dl • L’échantillon sanguin : sang veineux recueilli

sur EDTA.

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Matériel Pipette de dilution modèle Potain à GR : elle comporte à la partie supérieure un renflement contenant une bille de verre rouge, on adapte ces pipettes un tube de caoutchouc terminé par un embout buccal.L’hématimètre de malassezLamellesMicroscope

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Technique • Bien agiter le flacon de sang.• Aspirer le sang jusqu’au repère 2 de la

pipette de Potain.• Essuyer l’extrémité inferieure de la pipette

avec un tampon de gaze ou un papier filtre afin d’éviter la contamination du diluant par le sang.

• Aspirer le liquide de dilution jusqu’au repère 101, en position verticale (pour éviter la formation de bulles d’air et de ne pas passer le repère 101), on obtient une dilution au 1/200.

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• Enlever le tubule de caoutchouc et bloquer la pipette entre le pouce et l’index.

• Homogénéiser, en agitant fortement en position horizontale.

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• Appliquer la lamelle sur l’hématimètre • Rejeter les 3à5 premières gouttes (ne

contenant que le diluant), appliquer légèrement la pipette entre l’hématimètre et la lamelle, puis soulever légèrement l’index qui bouche l’extrémité supérieure de la pipette de manière à laisser couler le mélange lentement sous la lamelle qui se remplie par capillarité.

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• Laisser reposer 2à3 mn pour permettre aux globules de se déposer.

• Vérifier au faible grossissement (10x) la répartition homogène des globules, sinon recommencer.

• A l’objectif 40x, faire la numération des GR dans 4 rectangles quadrillés (l’écart entre eux ne doit pas dépasser 20 éléments).

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CalculGR par mm3=N/4 X 200 X100 N=le nombre d’éléments compté

dans les4 rectangles. 200=le coefficient de dilution. 100=le nombre de rectangles de

l’hématimètre.

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Exemple 

o Rectangle 1 :198o Rectangle 2 :202o Rectangle3 :216o Rectangle 4 :196N=812 N/4 = 203 x200 x 100

=4.060.000/mm3

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Valeurs normales 

Homme………………….4,5 à 5,5 x 106/mm3

Femme………………… 4,0 à 5,0 x 106/mm3

Nouveau-né……………..4,0 à 6,0 x 106/mm3

Enfant d’un an………….3,6 à 5,2 x 106/mm3

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Variations physiologiques 

• Les femmes ont un nombre de GR inferieur à celui des hommes, mais sans différence significative avant la puberté ou après la ménopause.

• il est possible que cette différence soit causée par l’effet inhibiteur des œstrogènes sur l’érythropoïèse plutôt que par les pertes menstruelles si celles-ci sont normales.

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Variations physiologiques (suite)

• Les sujets qui vivent en altitude ont un nombre de GR et un taux d’hémoglobine plus élevés que ceux qui habitent au niveau de la mer.

• Des efforts physiques intenses produisent une augmentation des GR.

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Valeurs pathologiques

• On trouve une augmentation des GR dans les polyglobulies et dans les hémoconcentration (diminution du volume plasmatique, chez les brulés par exemple).

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• Une diminution des GR est observée dans la majorité des anémies, soit par hémorragie, par hémolyse, par carence (fer, vitamine B12, acide folique, etc.)ou par insuffisance de l’érythropoïèse.

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Merci pour votre attention