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Atazanavir REYATAZ
• Inhibiteur de protéase autorisé par la FDA et en évaluation en Europe, l ’Atazanavir (BMS), en prise journalière unique se présente comme incontournable dans le traitement des sujets séropositifs ou atteints de sida, plusieurs études ont montré son efficacité et sa tolérance
STEKELOROM Aurelien ([email protected])
MARCQ Julien ([email protected])
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1. HIV1
• Sida maladie décrite pour la première fois en 1981
• Atteint tout d ’abord plus particulièrement les homosexuels et les sujets recevant de nombreuses transfusions sanguines comme les hémophiles
• La maladie est due à la chute du nombre de certains lymphocytes T (CD4)
• Le virus est un rétrovirus, virus à ARN qui pour se multiplier devront s ’intégrer dans l ’ADN de la cellule-hôte
• Etant donné que l ’ARN simple brin ne peut pas s ’intégrer dans un ADN double brin, l ’ARN devra obligatoirement être transformé en ADN par un enzyme viral,
la rétrotranscriptase (RT)
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2. Schéma récapitulatif de l ’infection avec les cibles thérapeutiques
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5. Empêcher l ’action de la protéase
Utilisation d ’inhibiteur de protéase
– VIH synthétise une fois son patrimoine génétique intégré un long polypeptide non fonctionnel précurseur de différentes protéines structurales et enzymatiques essentielles pour former les particules virales
– Les inhibiteurs de protéase ressemblent à la chaîne protéique que la protéase doit cliver, ils se fixent au même site catalytique et le bloque
– Ces inhibiteurs ne guérissent pas le SIDA, ils ont seulement le rôle de diminuer la charge virale
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6. Evolution de la recherche
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7. Evolution du marché des médicaments anti-HIV en milliards de Dollars
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
2002 2007 2012
Protéase inhNRTINNRTIFusion inh
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8. Le marché mondial des médicaments anti-HIV en une prise quotidienne
Médicaments Classe Approbation Propriétaire
Didanosine VIDEX NRTI Novembre 2000 BMS
Tenofovir VIREAD NRTI Octobre 2001 Gileadsciences
Lamivudine EPIVIR NRTI Juin 2002 GSK
Stavudine ZERIT NRTI Decembre 2002 BMS
Emtricitabine EMTRIVA NRTI Juillet 2003 Gileadsciences
Efavirenz SUSTIVA NNRTI Fevrier 2002 BMS
Atazanavir REYATAZ PI Juin 2003 BMS
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1. Structure 3D de la protéase d ’HIV1
•Enzyme avec 2 sous-unités symétriques
•C ’est une aspartyl-protéase
•2 stratégies pour développer des inhibiteurs de protéases du VIH-1:
•inhibiteurs ciblant le centre actif (Atazanavir)
•inhibiteurs de la dimérisation empêchant la formation de la forme active dimérique de la protéase en interagissant avec le feuillet béta-antiparallèle formé entre les extrémités N- et C- terminales des deux monomères
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•HIV protéase est codée par le gène pol situé en 5 ’
•gag-pol traduit sous la forme d ’un précurseur Pr p180 qui donnera naissance à :
p66-p51 rétrotranscriptase
p32 intégrase
p12 protéase
•
2. Origine génétique
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•Le précurseur Pr p55 donnera naissance aux protéines de structure p17, p24 et p7
•Le précurseur Pr gp160 sera le précurseur des gp120 et gp41 de l ’enveloppe
•Le précurseur Pr p180 engendrera 3 protéines enzymatiques protéase / intégrase / RT
•Le clivage protéolytique se font sur des sites particuliers: Phe-Pro ou Tyr-Pro qui sont des sites d ’attaques inhabituels des protéases humaines, spécifique des protéases rétrovirales soit on aura des inhibiteurs spécifiques du virus et on limitera ainsi les effets indésirables
On a là, le point de départ du mécanisme d ’action de l ’inhibiteur de protéase et de sa synthèse
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1. L ’arrivée des inhibiteurs de protéase dans l ’arsenal thérapeutique anti-HIV
• 1987 Zidovudine RETROVIR (AZT)
• ~1990 association 2NRTI + 1IP
• puis NNRTI + 2NRTI = 2NRTI + 1IP
• Début 2003 6 IP:– Saquinavir INVIRASE Roche– Indinavir CRIXIVAN Merck– Ritonavir NORVIR Abbott– Nelfinavir VIRACEPT Pfizer– Amprenavir AGENERASE Vertex– Lopinavir / Ritonavir KALETRA Abbott
Multiples doses journalières et beaucoup d ’effets indésirables
D ’un point de vue Design, l ’inh de protéase mime l ’état de transition de la réaction de clivage du peptide catalysé par la protéase de HIV1
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(3 S,8 S,9 S,12 S )-3,12-Bis(1,1-dimethylethyl)-8-hydroxy-4,11-dioxo-9-(phenylmethyl)-6-[[4-(2-pyridinyl)phenyl]methyl]-2,5,6,10,13-pentaazatetradecanedioic acid dimethyl ester
2. Structure chimique de l ’Atazanavir
PM:802.9
Poudre cristalline jaune pâle
Solubilité dans l ’eau faible (4 à 5 mg/ml)
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Présentation 3D de l ’Atazanavir dans le site actif de la protéase: Donnée recueillie par docking
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• L ’activité biologique d ’un peptide dépend de sa structure 3D
• La substitution du Calpha de l ’acide aminé par un N donne naissance à un acide aza-aminé
Cela entraîne une modification de la structure tridimensionnelle du peptide parent
3. La structure aza-peptidique et sa fonction
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• L ’activité biologique d ’un peptide dépend de sa structure 3D
• La substitution du Calpha de l ’acide aminé par un N donne naissance à un acide aza-aminé
Cela entraîne une modification de la structure tridimensionnelle du peptide parent
-perte du Calpha asymétrique
-perte de la libre rotation Calpha-C
L ’acide aza-aminé entraîne une perte de chiralité et une réduction de flexibilité du peptide
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• 1963 Hess et al.
modification de l ’AT2 en y ajoutant un acide Aza-aminé
-réduction d ’activité
-mais augmentation de la durée d ’action
• 1972 Niedrich et al.
analogue aza de l ’oxytocin
-perte ou augmentation de l ’éfficacité de l ’hormone peptidique dépendant du lieu d ’incorporation du résidu aza-aminé
• 1996 Fässler et al.
Les dérivés aza-peptidiques permettaient une potentialisation de l ’activité inhibitrice de protéase en exerçant une haute activité antivirale
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4. Mode d ’action d ’un inhibiteur de protéase
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5. Relations structures activités
• inhibiteur pseudo-symétrique
• P ’1 poche hydrophobe: importance primordiale du substituant en 1
• Substituant en 1 est de type bis-aryl combinant une excellente activité antiviral contre le wild-type ou le HIV mutant
• Importance de cette substitution en 1:– composé 1: Bonne disponibilité oral
mais faible activité inhibitrice– composé 2: Haut potentiel inhibiteur
mais faible disponibilité oral
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1996
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• CGP73547: Atazanavir
R3= Pyridine
R2= B
R1= B
meilleur C90 (Concentration dans le sang à 90 ’)
IC50 26nM
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• Les données de l ’inhibition enzymatique pour le dérivé biphenyl 22a nous confirme que des résidus à rigidité conformationelle sont intéressantes
• Le remplacement d ’un ou des deux substituants Valine par une tert-leucine augmente l ’activité antiviral de façon importante (24a et 25a)
• Les dérivés tert-leucine nous montre des niveaux plasmatiques intéressants après administration orale, intéressant encore en augmentant l ’hydrophilie par remplacement du 4-biphenyl par un 4-heterocycle-phenyl
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• Dans le cas d ’une pyridine, le dérivé bis-valine nous montre déjà une bonne biodisponibilité oral (22b), mais en substituant un ou même les deux par une tert-leucine on augmente l ’activité inhibitrice mais surtout l ’absorption oral (31,8µM pour Atazanavir CGP 73547)
L ’utilisation de Bis tert-leucine et la présence d ’un benzyl substitué
par un hétérocycle représente la meilleure
combinaison entre puissance antivirale et biodisponibilité orale
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6. Synthèse chimique de l ’Atazanavir
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Docking de l ’Atazanavir dans le site actif de la protéase
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Recherche dans la RCSB Protein Data Bank• Sélection de l ’inhibiteur de protéase cristallisé (CGP 53820) dans la protéase
du VIH1
• Récupération via Internet des fichiers contenant l ’ensemble des coordonnées tridimensionnelles des ligands et des résidus constituants la protéine
Extraction de CGP et localisation du site actif• Visualisation en 3D de la protéine sur SYBYL 6.9.1 2004
• Extraction du ligand et localisation du site actif
• Etude des acides aminés formant le site actif et identification de l ’Asp 25 pris comme référence, liaison hydrogène avec l ’OH
Docking à l ’aide du logiciel Gold• Atazanavir (ou CGP 73547) a été positionné dans le site actif de la protéase
• Alignement sur le CGP 53820 inhibiteur de référence
• Optimisation de la structure
• Docking de l ’Atazanavir dans la protéase
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Etude de l ’environnement du site actif et des liaisons hydrophobes et hydrogènes induites par l ’inhibiteur
dans la protéase
• Sélection d ’une sphère de 5Å autour du site actif
• Visualisation des intéractions par liaisons hydrogènes entre les acides aminés de la protéase et des éléments chimiques de l ’Atazanavir, identification de ces AA
• De même pour les intéractions hydrophobes
• Utilisation de Molcad, calcul des surfaces de Connolly (surface accessible au solvant)
• Surface tridimensionnelle visualisation parfaite des poches hydrophobes
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ATZATZ
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Etude des liaisons hydrophobes entre le
tertiobutyle et les acides aminés Ile 47, 50, 84, Val 32 et Ala
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Ile47 (B)
Ile50 (A)
Ile84 (B)
Val32 (B)
Ala28 (B)
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Etude des liaisons hydrophobes entre la
phenyl - pyridine et les acides aminés Ile 50,
84, Pro 81, Leu 23, 10 et Val 82
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Leu10 (B)
Ile50 (A)
Ile84 (B)
Pro81 (B)
Val82 (B)
Leu23 (B)
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Etude des liaisons hydrophobes entre le
tertiobutyl et les acides aminés Ile 47,
50, 84 et Val 32
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Ile84 (A)Val32 (A)
Ile47 (A)
Ile50 (B)
Ala28 (A)
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Etude des liaisons hydrophobes entre le groupement phenyl et les acides aminés Pro
81 et Val 82
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Pro81 (A)
Val82 (A)
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Des études basées sur les données rayons X du complexe enzyme / inhibiteur de l ’aza-dipeptide CGP 53820 nous montre que les dérivés 4- benzyl substitués avait des interactions additionnelles importantes avec Arg8
Visualisation de la liaison de l ’OH de l ’hydroxyethylhydrazine avec l ’Asp25
Gly48 (B)Asp29 (B)
Gly27 (B)
Asp25 (A)
Asp30 (A)
Asp29(A)Arg8 (B)
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• Association avec 2NRTI
• 67% des patients ont une charge virale <400 copies HIV RNA/ml contre 62%
avec Efavirenz (NNRTI) au bout de 48 semaines
2. Etude comparative avec un NNRTI
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• Association avec 2NRTI
• 67% des patients ont une charge virale <400 copies HIV RNA/ml contre 59% avec Nelfinavir au bout de 48 semaines
3. Etude comparative avec un autre inhibiteur de protéase
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Etude des concentrations plasmatiques d ’Atazanavir (400mg dose) réalisée chez patients adultes infecté par le VIH (n=13)
Tmax ~2,5h
•Gélule à prendre avec un repas important (>700kcal, ~35g de lipides, ~30g de protéines)
1. Pharmacocinétique
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• 86% de liaison aux protéines plasmatiques et cette fixation est indépendante de la concentration
• ~86% de fixation à l ’albumine
• détection dans le LCR ratio LCR/plasma ~0.0025
• Métabolisation par monooxygénation et dioxygénation sont les biotransformations majeures, aussi de façon beaucoup moindre glucuronidation, désalkylation…
• 2 métabolites d ’Atazanavir dans le plasma ont été caractérisés, ils sont sans activité anti-viral
• Métabolisation hépatique Cyp3A4
• Elimination à 79% dans les fèces et 13% dans les urines, 20% de la molécule est retrouvé inchangé
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L ’administration d ’Atazanavir/Ritonavir 300/100mg augmente la Cmax de 18%, AUC de 103% et Cmin de 671%
administration:
Avec Ritonavir Sans Ritonavir
Cmax 6129ng/l 5199ng/l
AUC 57039ng.h/ml 28000ng.h/ml
Cmin 1227ng/ml 160ng/ml
L ’Atazanavir est boosté par le Ritonavir
2. Interactions médicamenteuses
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Atazanavir est contre-indiqué avec les médicaments ayant une forte dépendance au Cyp3A4
3. Contres - indications
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Très intéressant au niveau du métabolisme lipidique:
Augmentation HDL
Diminution des LDL
Diminution du cholestérol total
Diminution des triglycérides
5. Avantages sur le bilan lipidique
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6. Posologies et coûts
• Dose et administration
400 mg/j soit 2 gélules de 200mg ingestion en une seule fois à prendre en mangeant
Existe en 100, 150 et 200mg
Il est indiqué exclusivement en combinaison avec d ’autres agents antirétroviraux
(ATU: 1 gélule de 200mg d ’Atazanavir + 100mg de Ritonavir )
• Coût
coût mensuel Atazanavir 1 gélule 200mg 700$ + 50$ pour 100mg de Ritonavir
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Atazanavir est simple à administrer et relativement bien toléré: la tolérance détermine en partie l ’observance, condition essentielle à
une efficacité soutenue
Chaque augmentation de 10% de l ’observance correspond à une réduction de 28% d ’évolution
vers un SIDA
VII. Conclusion
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VIII. Bibliographie
• J. Med. Chem. 1996, 39, 3203-3216
• J. Med. Chem. 1998, 41, 3387-3401
• Nejm. Volume 338, Number 18
• Nature reviews. Volume 2, Novembre 2003
• Acta Chim. Slov. 2002, 49, 649-662
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IX. Remerciements
Professeur André TARTAR
(tuteur)
Professeur Philippe CHAVATTE (modélisation moléculaire)
