ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Amplification du gène de l’Interleukine-6 et pronostic dans les glioblastomes

A. Tchirkov1, T. Khalil1, E. Chautard1, K. Mokhtari2, L. Veronese1, B. Irthum1, P. Vago1, J.L. Kemeny1,

P. Verrelle1

1 EA3846, Université d'Auvergne, Centre Jean Perrin / CHU, Clermont-Ferrand2 Neuropathologie, Pitié-Salpétrière, Paris

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Récidive à l’intérieur du volume irradié

Optimisation de la radiothérapie

Irradiation (photons, neutrons) à faiblesfaibles dose et débit de dose

Identification puis neutralisation de nouvelles cibles biologiques potentiellement impliquées dans la radiorésistance : la voie de l'Interleukine-6, le couple Télomère/Télomérase

Médiane de survie : Médiane de survie :

inférieure à 1 aninférieure à 1 an

Glioblastome (GBM)Glioblastome (GBM)

Radiosensibilisation des tumeurs gliales : approche cellulaire et moléculaire.

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Pourquoi l'Interleukine-6 ?

Elle est secrétée par les cellules de glioblastome (Van Meir et al., 1990).

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

7p15

28 aa 184 aa

Séquences codant pour la protéine mature

5kb

27kDa

L’IL-6 : rôle dans la progression tumoraleL’IL-6 : rôle dans la progression tumorale

Prolifération cellulaire

MAPK

Immuno-suppression locale

Perte de la fonction de présentation de l’antigène par les cellules dendritiques

Angiogénèse VEGFBlocage de l’apoptose

STAT3 AKT

Mcl-1

(Menetrier-Caux et al., 1998)

(Cohen et al., 1996)

GBM (Goswami et al., 1998)Mélanome (Lu et al., 1996)

Rein (Mizutami et al., 1995)Prostate (Borsellino et al., 1999)Myélome (Puthier et al., 1999)Pancréas (Yoshiharu et al., 2001)Col utérin (Wei et al., 2001)

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

La voie de signalisation IL-6

gp

130 gp

80

IL-6

gp

130

Ras /MAPK

prolifération cellulaire(MM

)pSTAT3

PI-3KpAKT

Inhibition de l ’apoptose

Mcl1-L et BclXL

JAK/STAT

p p

VEGF

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Expression de l ’IL-6 et grade de malignité dans les tumeurs gliales

2-micro

IL-6

165 pb

120 pb

Ech 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Ech 1 2 3 4 5 6 7 8 9

2-micro

IL-6

165 pb

120 pb

glioblastomes

Autres gliomes

P<0,001

Journal of Neurosurgery, 2001

n=51

n=28

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Expression de l ’IL-6 et grade de malignité dans les tumeurs gliales

2-micro

2-micro

IL-6

IL-6

HES RT-PCR IHC anticorps anti-IL6

GBM négatif

GBM positif

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

L’IL-6 est-elle impliquée dans la radiorésistance

des GBM ?

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

• L'irradiation freine la prolifération de la lignée G5 mais n'a pas d'effet sur la fraction IL-6 positive.

• Ces résultats suggèrent un rôle potentiel de la fraction cellulaire IL-6 positive au sein de la lignée G5 dans la radiorésistance.

Journal of Neuro-Oncology, 2002

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

La surexpression de l’IL-6 dans les GBM est-elle

associée à une amplification du gène ?

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Dosage du gène de l’IL-6 :Dosage du gène de l’IL-6 :PCR en temps réel (SYBRGreen I)PCR en temps réel (SYBRGreen I)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

17 19 21 23 25 27

Flu

ore

sce

nc

e

PCR cycle

ADN GBM5

ADN normal

ADN GBM5/-globin

ADN normal/-globin

5,105,10

63 207

12 184

12 933

12 367

IL-6IL-6

-globin-globin

Ratio

1,051,05Ratio

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Amplification du gène de l’IL-6Amplification du gène de l’IL-6dans les glioblastomesdans les glioblastomes

British Journal of Cancer, 2001

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Amplification du gène de l’IL-6Amplification du gène de l’IL-6

• Recherche négative dans les gliomes de grade II (9) et III (8)

• Amplification retrouvée dans 40% des GBM, corrélée à l'expression

recherche par FISH recherche par FISH sur coupes congelées sur coupes congelées

dans 53 gliomesdans 53 gliomes

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Survie médiane : 6 mois vs 22 mois

British Journal of Cancer, 2007

Amplification du gène de l’IL-6Amplification du gène de l’IL-6

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

Perspectives 3 axes de recherche

Confirmation des résultats sur une série plus importante

Étude de l'amplicon incluant le gène de l'IL-6 (7p21)EGFR, Twist, …

Étude génomique et transcriptomique comparative de la population avec versus sans amplification du gène IL-6

Étude des effets de la neutralisation de la voie IL-6 sur la radiosensibilité des GBM.

ANOCEF, Toulouse, Mai 2007

EA 3846 – Université d’Auvergne

Centre Jean Perrin – Clermont Ferrand

Pierre VERRELLE

Andréï TCHIRKOV

Toufic KHALIL

Bernard IRTHUM

Jean-Louis KEMENY

Patrick MERLE

Henri JANICOT

Emmanuel CHAUTARD

UMR CNRS 144

Institut Curie - Paris

Charles DECRAENE

Jean-Paul THIERY

Département d’Immunologie

Centre Jean Perrin – Clermont Ferrand

Jacques CHASSAGNE

Laboratoire de Neuropathologie Pitié-alpétrière, Paris

Karima Mokhtari