BIO1540 Lab 4 : Mitose

Objectifs du laboratoire

• Visualiser l’ADN grâce à une technique de coloration

• Identifier et comparer les stades du cycle cellulaire sur des échantillons animaux et végétaux.

• Déterminer la durée relative de chacune des phases du cycle cellulaire

Phases de la mitose

chromosomes condensés (visibles)Membrane nucléaire se dégrade (mais présente)

Chromosomes non visiblesNucléole présent

Chromosomes visiblesMembrane nucléaire a disparu

Comptés comme “prophase”

Phases de la mitose

Cytocinèse

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Chromosomes alignés au niveau de la plaque équatoriale

Les chromatides soeurs se séparent et commencent à migrer vers les pôles

Les chromosomes disparaissent et une nouvelle membrane nucléaire se formeCytoplasme se divise

Les cellules filles se séparent

Programme du lab 4:

• Coloration de la racine de fève (Vicia faba)• Identification et comptage des stades

mitotiques:– blastula de corégone (Coregonus clupeaformis)– racine d’oignon (Allium cepa)– Préparation de la racine de fève (Vicia faba) -

méthode ‘squash’• Entrée des données de la classe

Préparation de la racine de fève (Vicia faba)

Matériel fourni: • Racines de fèves fixées dans du fixatif Carnoy-lebrun

(stoppe les processus cellulaires et préserve les tissus).• Protocole détaillé de la coloration dans le manuel de

laboratoire• Étape 1: Inscrivez votre nom sur le microtube avant de

commencer la procédure de coloration. • Étape 2: Ôtez le fixatif en utilisant la pipette en plastique.

Jetez le liquide dans la poubelle de déchets liquides. Utilisez le cure-dent pour maintenir la racine dans le tube si nécessaire.

Préparation de Vicia faba

• Étape 3: Rinçages– Rincez les racines une fois dans de l’alcool (EtOH)

95% puis enlevez l’alcool à l’aide de la pipette.

• Étape 4: Hydrolyse– Ajoutez du HCl 1N préchauffé aux racines.– Incubez à 60°C pendant 10 minutes précises.– Ôtez le HCl puis ajoutez délicatement de l’eau

glacée pour arrêter l’hydrolyse

Préparation de Vicia faba

• Étape 5: Coloration• Jetez l’eau de l’étape 4• Ajoutez du colorant de Feulgen – Attention il

colore quasiment tout instantanément.• Colorez pendant 30-40 minutes.• Ôtez le colorant en utilisant la pipette en plastique

et rincez 2-3 fois avec de l’eau distillée.• Conservez les racines colorées dans de l’eau (ne

laissez pas sécher)

Préparation de Vicia faba

• Étape 6 : écrasement de la racine• Ajoutez 1 goutte d’acide acétique sur la lame• Déposez une racine• A l’aide d’une lame de rasoir, coupez 2mm de

l’extrémité foncée de la racine. Jetez le reste• Montez avec une lamelle

www.npc.edu/Bio105/media/m1_l6-05.gif

Étape 7: ÉcrasementPressez fermement en appliquant une pression verticale.Ne faites pas glisser la lamelle latéralement.Vérifiez sous le microscope que la préparation et correcte et pressez à nouveau si nécessaire

Préparation de Vicia faba

Évaluation de la préparation

• Montrez votre préparation à votre démonstrateur / trice

• Présentez une photo de votre préparation pour être évaluée (luminosité, balance des couleurs, mise au point….).

• Choisissez votre meilleure image.

Comptage des cellules

• Sous l’objectif 40x, comptez le nombre de cellules dans chacune des phases du cycle cellulaire.

• Comptez au moins 50 cellules (prenez une photo au 40X et comptez à l’écran)

• Répétez le comptage deux autres fois ou jusqu’à ce que le nombre final de cellules = 150 pour chaque spécimen.

Comptage des cellules

• Entrez vos résultats au fur et à mesure dans les feuilles Excel sur les ordinateurs

• Commencez par une des deux lames préparées (soit l’oignon ou la corégone) puis observez votre préparation de racine de haricot.

40 min

Pointe de racine d’oignon (Allium cepa)

www.karlloren.com/ biopsy/images/mitosis.jpg

Attention, les lames sont épaisses

Blastula de corégone (Coregonus clupeaformis)

30 min

Évaluation du La4• Questionnaire pré-lab• Note technique: compte pour 20% de la note. Vous serez évalué(e) sur:

• Propreté• Bonne utilisation du microscope• Bonne qualité de l’écrasement de la racine de fève• Bonne qualité de la photo montrée à votre démonstrateur / trice

• Rapport de laboratoire

N’oubliez pas:– Les liquides vont dans le Becher de déchets– Les lames vont dans la poubelle de verre brisé

Portez vos lunettes de sécurité

Report Lab 4: voir instructions sur le site web des laboratoires

• Report – 3 Pages• Page de titre• Un graphique à barre sur deux panneaux

présentant le % de cellules dans chacun des stades du cycle cellulaire, ceci pour les 3 organismes:

• Panneau supérieur: données de la classe plus l’erreur type (affichées sur le site web des labs)

• Panneau du inférieur: vos propres mesures (calculez le % de cellules dans chacun des stades)

Panneau supérieur:Données de la classe (moyenne PLUS erreur type)

Panneau inférieur:Données personnelles

2

3

1 2 3 4 5

clé des symboles

1

Axe des X: Stades du cycle cellulaire

Axe

des

Y:

Pou

rcen

tage

de

cellu

les

Graphique sur deux panneaux:Même règles qu’un graphique sur un panneau sauf:

Les deux graphiques partagent le même axe Y.

Les 2 axes X ont des marques de division

mais l’étiquette est seulement présentée sur l’axe du bas.

La même échelle est présentée sur les deux panneaux

Ceci n’est pas ungraphique parfaitjuste un exemple.Graphique fait à la mainSur papier millimétréN’oubliez pas la légende.

série 1série 2série 3

1

2

3

4

N’oubliez pas la légende sous le graphique

Rapport du lab 4 (suite)

• Page 3. Conclusion basée sur les données du graphe:– Brève comparaison de la longueur des phases du cycle

cellulaire entre les 3 organismes, entre les données de la classe et personnelles

– Répondez à la question: En vous basant sur vos observations durant le laboratoire, comment pourriez-vous évaluer la durée relative de chacun des stades du cycle cellulaire pour chacune des 3 espèces observées ?

• Texte de la page 3: maximum 2/3 de page (12 pts, interligne 1.5 = 15 lignes).

Rapport du lab 4 (fin)

Les données combinées seront postées demain sur le site web

DATE DE REMISE: Dans une semaine.