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RESUMEN
Con el objetivo de evaluar la actividad acaricida o acción garrapaticida del extracto alcohólico de
la hoja del árbol del Nim (Azaridachtina indica), en el control de una alta infestación de
ectoparásitos) agente causal de algunas enfermedades en los canes como: Erliquiosis Canina,
la sarna demodécica, la Borrelia burgdorferi (la enfermedad de Lyme) y Anaplasma
phagocytophilum entres otras, se analizaron los efectos a diferentes dosis.La Técnica Canina se
comenzó a utilizar en nuestro país en el año 1962 para desplegar una importante tarea el
esclarecimiento de hechos delictivos, los canes que se preparan para esta especialidad son de
diferentes razas como: Pastor Alemán, Coker Spanish, Springer, Labradores etc. Estos
animales son afectados en gran medida por ectoparásitos que pueden ser fatales para los
mismos ya que inciden directamente en la pérdida de peso, en la aparición de anemias
y enfermedades agudas, crónicas o incluso, la muerte es por ello la necesidad de realizar una
investigación encaminada a determinar el impacto y el resultado que tendría desde el punto de
vista económico, social, científico y operativo por lo que nos dimos a la tarea de producir un
producto totalmente natural y este fue el extracto alcohólico del árbol del Neem para
contrarrestar la plaga de los ectoparásitos en las unidades antes mencionadas. En
este investigación se llevó a cabo un estudio con el objetivo de corroborar la actividad
ascaricida del árbol del Neem (Azharidacta indica)
La investigación se realizó con el objetivo de determinar las características microbiológicas y
fisicoquímicas del extracto alcohólico del las hojas del árbol de Nim, obtenido por el método de
percolación, así como su efectividad ante la presencia de ectoparásitos (garrapatas) y su acción
terapéutica a diferentes concentraciones en lesiones cutáneas producidas por ectoparásitos en
canes de unidades de la Técnica Canina del MININT.
Las investigaciones microbiológicas demostraron que el extracto alcohólico del árbol del Nim,
cumple con los indicadores de calidad establecidos para su uso en formulaciones farmacéuticas
de Ministerio de Salud Pública. Se analizó la composición físico-química del componente
principal (azadirachtina) en las muestras irradiadas a través de la cromatografía liquida de alta
resolución (CLAR), no mostrando cambios significativos en la concentración con coeficientes de
variaciones del 2,1 %. La prueba de ANOVA indicó valor superior a 0,05, por lo que los
resultados medios no varían en cada nivel irradiado. En el ensayo terapéutico “in vivo”,
utilizando 20 hembras y 20 machos, divididos en tres grupos experimentales, bañándolos con
concentraciones del biopreparado al 5%, 10% y 20% demostraron que el extracto alcohólico de
hojas del árbol del Nim es efectivo en los tres ensayos, lográndose la recuperación de las
lesiones a los 5 días con una concentración al 20% del biopreparado. Es de destacar la
disminución de las poblaciones de garrapatas y Démodex en la piel de los animales. La
formulación del biopreparado al 10 %, desde el punto de vista clínico, toxicológico y económico,
mostró ser la dosis más adecuada, determinando además la acción terapéutica del extracto
alcohólico de la hoja del árbol del Nim en la recuperación de las lesiones producidas por
ectoparásitos en los canes del MININT. La novedad científica del presente trabajo radica en
que por 1ra vez se cuenta con un producto alternativo de la medicina verde en el MININT para
contrarrestar la presencia de estos ácaros en la masa canina.arribando a la conclusión de que
es precisamente la azadiractina la sustancia o el componente responsable de esta acción
obteniéndose resultados satisfactorio con una respuesta rápida y eficaz al contar con un
tratamiento totalmente alternativo que pudiese reemplazar la utilización de productos
medicamentosos mostrando ahorro a la economía del país.La aplicación del extracto alcohólico
del árbol del Nim cada 7 días al 10 %, a razón de 10ml/L de agua fue eficiente en el control de
la garrapata en nuestras unidades.
Palabras claves: huella olorosa, Odorología
Antecedentes
El árbol Nim (Azaridachta indica A Juss), constituye en la actualidad un recurso biológico de gran
valor, con aplicaciones en la Medicina Veterinaria, la salud humana y la agricultura, destacándose
por sus propiedades acaricidas y su efecto para combatir insectos dañinos.(Estrada, 2012).En
algunas partes del sureste de Asia, particularmente en Camboya y Vietnam, los suaves retoños
del Nim son ingeridos como alimentos. Incluso ligeramente cocido, el sabor es absolutamente
amargo y el platillo no es disfrutado por todos los consumidores, aunque crean que es saludable.
(Funk et al., 2007)
La azaridactina (del grupo de los tetraidroterpenoides conocidos como limonoides), es uno de los
2 principios biocidas más estudiados y de mayor concentración en la semilla y las hojas del árbol
de Nim, a partir de los 3-4 años de edad un árbol produce alrededor de 50 kg al año, lo que da una
idea de su potencial como fuente de sustancias biocidas. La azaridactina se considera un
fitotóxico de amplio espectro, de bajo efecto residual, sin toxicidad para los seres humanos y el
medio ambiente (Guerra et al., 2005). Existe evidencia científica que demuestra que el Nim es
muy efectivo en el tratamiento de la sarna, pero esa evidencia todavía no se ha corroborado. El
Nim es recomendado a quienes sean sensibles a la permetrina, un insecticida que puede ser
irritante.En Cuba, el Instituto Nacional de Investigaciones Fundamentales de la AgriculturaTropical
(INIFAT), conjuntamente con otras instituciones, ha estado ejecutando un programa de
investigaciones para conocer su utilidad en la producción agropecuaria. Hoy día, se sabe que
productos derivados del Neem pueden afectar más de 200 especies de insectos, además de
garrapatas, nematodos, hongos, bacteria y también algunos virus. Además los compuestos
hallados en la semilla, corteza y hojas del árbol han sido propuestos como antiséptico, antifebriles,
antinflamatorios, antivirales y fungicida..En la década de 1980 comienza el proceso de
establecimiento del árbol del Nim como cultivo económico en Cuba, el cual iba a ser destinado
principalmente a la elaboración de bioinsecticidas y productos de uso pecuario. Actualmente
crecen en el país 800 mil árboles, de los cuales el 45 % están en producción, correspondiendo a
las plantaciones comerciales un 75 % (Roig., 1998).
La producción total se estima en unas 3000 t de frutas, y hasta el 2005 se pretendía alcanzar la
cifra de un millón de árboles. Se suponía que estas plantaciones produjeran progresivamente
hasta el año indicado unas 2 500 t de frutas, equivalentes a 800 t de semilla seca, que constituiría
la materia prima para la elaboración de bioinsecticidas y otros productos (Roig., 2008). Muchas
de las propiedades mencionadas no tienen respaldo científico, pero su renombre está basado en
el conocimiento tradicional y anecdótico de la medicina ayurvédica. Todas las partes del árbol son
utilizadas para preparar diferentes remedios y el aceite del nim es usado para preparar
cosméticos (champú, bálsamos, jabón y cremas). Además del uso medicinal, los árboles de nim
se cultivan para disminuir la desertificación y se cree es un buen absorbente del dióxido de
carbono.
El principal interés de los científicos es investigar su posible propiedad insecticida. Muchos de los metabolitos secundarios del árbol tienen actividad biológica, pero la azadiractina es considerada de mayor importancia ecológica. Los estudios han demostrado que afecta las actividades de numerosas especies, actúa interrumpiendo el ciclo vital del insecto. Las investigaciones han aumentado en el pasado, así como el deseo de conseguir un pesticida efectivo y seguro y parece ser que el nim tendrá importancia en el control de plagas.
Como planta medicinal se emplea para:
Soriasis: se utiliza el aceite de las semillas y el extracto de las hojas del Neem, disminuye la comezón y el dolor.
Diabetes: por vía oral extracto de Neem reduce los requerimientos de insulina entre un 30% y 50% a las personas que son insulinodependientes.
SIDA: se han reportado resultados de pruebas in vitro para prevenir el SIDA. Cáncer: polisacáridos y limonoides se han encontrado en la corteza, hojas y aceite de Neem, lo
cual reduce los tumores y el cáncer. Afecciones cardiacas.-controla las arritmias cardiacas y también retrasa la coagulación de la
sangre. Herpes: existen pruebas en Alemania que demuestran que los extractos del Neem son tóxicos al
virus del herpes. Trastornos dentales: de igual manera, en Alemania se ha encontrado que el extracto del Neem
previene las caries entre otros trastornos dentales. Dermatología: es efectivo contra el acné, salpullido, caspa. Alergias: inhibe reacciones alérgicas cuando se aplica externamente. Úlceras: el extracto del Neem acelera la cicatrización de lesiones gástricas y duodenales. Encefalitis: acerca de esto se sabe que en Japón ayudo cuando hubo un brote en niños. Control natal (hombres): existen pruebas en la India y en los Estados Unidos de que los extractos
del Neem reducen la fertilidad en monos sin inhibir la libido o la producción de los espermatozoides.
Control natal (mujeres): se utiliza como lubricante vaginal el aceite del Neem. Hepatitis: en Estados Unidos se ha demostrado que es efectivo contra el virus que causa la
hepatitis b. Hongos: el Neem es tóxico para los hongos que atacan a los humanos como la Cándida, el que
causa el pie de atleta y de la boca. Malaria: las hojas tienen un ingrediente activo el cual es tóxico a la malaria.
Parásitos externos: el Neem mata muy rápido parásitos externos. Repelente de insectos: hay estudios que demuestran que un componente del Neem es más
efectivo que los químicos.
El árbol Nim constituye en la actualidad un recurso biológico de gran valor, con aplicaciones para la medicina veterinaria, salud humana y agricultura en general, destacándose, entre otras, sus propiedades insecticidas y acaricidas (Sáez, 2003)
De acuerdo con lo reportado en la literatura mundial, el Nim contiene un grupo variado de sustancias bioactivas con alto efecto biológico, entre las que se destaca la azadiractina, además de otras importantes, como son la salanina y la nimbina. La acción específica del conjunto de estas sustancias, produce en los insectos distintos efectos, como el de repelente, antialimentario, esterilizante, repelente a la ovoposición, insecticida, y regulador del crecimiento (Bandyopadhyay., et al. 2004)
El Nim actúa como una cortisona, alterando la conducta de los procesos vitales de los insectos. Los extractos del Nim actúan, en los insectos, como antialimentario, inhibidor de crecimiento, prolonga las etapas inmaduras y ocasiona la muerte, disminuye la fecundidad, la ovoposición y los niveles de proteínas y aminoácidos en la hemolinfa, interfiriendo en la síntesis de quitina (Nasir, E. & S. I. Ali (eds). 1980-2005. Fl. Pakistan Univ. of Karachi, Karachi).
El extracto del Nim es eficaz contra pulgones, mosca blanca, ácaros, parásitos de todos las especie de plantas y animales domésticos (caballos, oveja, vacas, perros, gatos y cerdos), la biomasa de Nim tiene 136 albuminoides y más, qué simultáneamente actúan contra los parásitos externos, en ellos no se desarrolla la resistencia contra el producto (Guerrero ., et al. 2004).
Las pulgas, los piojos, las garrapatas y otros ectoparásitos de los animales son fácilmente combatidos cuando se utiliza el polvo de hojas secas en forma de extracto acuoso, o alcohólicos de semillas del Nim y las fórmulas enriquecidas y han demostrado no ser tóxico desde el punto de vista oral y dérmico en los mamíferos (Brechel y Fernández 1995).
Introducción:
El estado de salud, como elemento indisoluble del bienestar animal, es fundamental para la
expresión del potencial productivo de cualquier especie. Cualquier perturbación conduce, directa o
indirectamente, a su disminución, tanto en cantidad como en calidad (Fajardo et al., 2013)
Existen varios métodos para controlar los ácaros, el más común es el tratamiento con acaricidas
químicos (Turtón, 2009); sin embargo, en la actualidad se presentan numerosas desventajas, entre
las cuales, la más importante, es la aparición creciente de poblaciones de ácaros resistentes al efecto
tóxico de los medios químicos (Araque et al., 2014).
Es así, como la resistencia de diferentes especies de garrapatas a los productos garrapaticidas existe
en la mayor parte de las regiones del mundo, donde se ha realizado control químico y es
consecuencia de su uso inadecuado (Pereira et al.,2008).
En la actualidad son varias las enfermedades trasmitidas a los canes por picazos de garrapatas,
entre las que se encuentran la Babesiosis y la Erliquiosis como las más frecuentes, que han sido
definidas como infecto-contagiosas de curso agudo, subclínico o crónico (Handule et al., 2002).
Estas afectan a todas las razas de perros y se diagnostica más comúnmente a finales de verano o
principios de otoño; sin embargo en lugares endémicos se puede diagnosticar todo el año, incluso en
periodos dónde no haya garrapatas, en este periodo la mascota cursará con una infección crónica, la
cual afecta el bienestar, y la salud de los canes así como la respuesta a la labor que realizan, (Suárez
et al., 2007).
Especial importancia se ha dado a la búsqueda de sustancias acaricidas, teniendo en cuenta que los
ácaros han desarrollado una elevada resistencia a los fármacos que se comercializan en el mercado
mundial, (Maurya et al., 2006).
Se ha comprobado en la práctica, la posibilidad de producir, por medios artesanales y a través de
tecnologías industriales, productos bioinsecticidas derivados del árbol del Nim, que son efectivos
contra una gama considerable de especies de insectos, ácaros y nematodos, que constituyen plagas
de importancia económica en la agricultura cubana, reconociéndose la efectividad de estos
insecticidas de origen biológico a nivel internacional en más de 360 especies (Estrada, 2003).
El árbol Nim (Azadirachta indica A Juss), constituye en la actualidad un recurso biológico de gran
valor, con aplicaciones en la Medicina Veterinaria, la salud humana y la agricultura, destacándose por
sus propiedades acaricidas y su efecto para combatir insectos dañinos, (Estrada, 2012).
Socialmente es importante el control en la salud de los animales, y en este caso para los caninos,
pues sano prestan un mejor servicio a la población, actividad para la que están diseñados, por lo
8cual se sentirán satisfechos con el trabajo desplegados por los compañeros de la Técnica Canina.
Además esos canes cuando llegan al final del período de vida útil se utilizan como mascotas y se
debe tener la certeza que se van sin ningún problema epizootiológico, sin la posibilidad de trasmitir
enfermedades al hombre.
Problema
El problema de investigación fue la intensidad y extensidad de infestación de garrapatas ,asi como la
presentación de lesiones cutáneas producidas por ectoparásitos, en poblaciones caninas de las
unidades del MININT, afectando la salud y los servicios.
Novedad científica
La determinación de la acción garrapaticida y terapéutica del extracto alcohólico de la hoja del árbol
del Nim en lesiones cutáneas producidas por ectoparásitos, constituye un tratamiento alternativo, que
por primera vez se aplica en las unidades caninas del MININT.
Objetivo general:
Determinar las características microbiológicas y fisicoquímicas del extracto alcohólico del las hojas del
árbol de Nim, obtenido por el método de percolación y su acción terapéutica a diferentes
concentraciones para contrarrestar la presencia de garrapatas y las lesiones cutáneas producidas por
ectoparásitos en canes de unidades de la Técnica Canina del MININT.
Objetivos específicos:
Caracterizar el extracto alcohólico del árbol del Nim desde el punto de vista microbiológico y físico-
químico.
Determinar la efectividad terapéutica y económica del extracto alcohólico de las hojas del árbol del
Nim en tres concentraciones, en lesiones cutáneas en canes.
Fundamentacion
El presente proyecto se realizo con el fin de mostrar la efectividad que ha alcanzado la producción
de fitofármacos de origen natural en la provincia de Granma en la aplicación contra los
ectoparásitos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Ubicación y momento del desarrollo de la investigación estudio
El estudio se realizó durante el año 2015- 2016 en las Secciones Provinciales de la Técnica Canina
de las provincias Granma, luego lo extendimos a otras provincias vecinas , perteneciente al MININT,
Cuba.
Criterios para la selección de los animales
Se utilizaron 30 canes de la raza pastor alemán: 15 hembras y 15 machos, con un peso corporal
promedio entre 28-32 kg, con presencia de garrapatas y lesiones cutáneas de variada intensidad
producidas por ácaros.
Población, muestra y muestreo
Las muestras fueron colectadas de tres regiones anatómicas diferentes de la economía animal (dorso,
tórax y extremidades anteriores y posteriores). Cada raspado se realizó en un área de piel de
aproximadamente 1cm2. Las muestras se tomaron antes del tratamiento y se conservaron en solución
de KOH al 10 %, durante 15 min, a temperatura ambiente y fueron trasladadas posteriormente hacia
el laboratorio de Parasitología de la Clínica Veterinaria de la Técnica Canina de la provincia de
Holguín, donde se realizó la identificación por el método directo, utilizando un Microscopio
Estereoscopio marca “Orion”de procedencia China.
Selección del material para la obtención del extracto alcohólico
De la planta Azadirachta indica fueron seleccionadas las hojas y su recolección se realizó en horas
tempranas de la mañana (8:00-9:00 AM) del mes de agosto del 2014, a temperatura ambiental entre
29-32°C y una humedad relativa del 85 %. Las hojas se acopiaron y fueron sometidas a un secado
de forma natural en la azotea de dicho laboratorio, posteriormente en un molino de martillo se
pulverizaron.
Procedimientos y métodos para la obtención y preparación del extracto alcohólico
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La densidad relativa del extracto se determinó según establece la USP35 y NF30, utilizando un micropicnómetro“BRAND WERTHEIM” de 0,382 mL, de fabricación Alemana.
Determinación de pH del extracto del Azadirachta Indica
Este parámetro fue determinado por el método potenciométrico, según lo establecido en la NC 90-13-13 empleando un pH-metro (Crison, modelo “GLP”), Unión Europea.
Diseño experimental
Experimento 1
Los canes con diagnóstico positivo a presencia de ectoparásitos y de lesiones causadas por estos fueron distribuidos de manera intencionada, buscando la homogeneidad en intensidad de la enfermedad y se conformaron cuatro grupos experimentales, de cinco animales cada uno, del sexo macho. Al grupo uno se le aplicó emulsión al 5%; al grupo 2, emulsión al 10 %; al grupo 3, emulsión al 20 %, mientras que al grupo control, se trató con emulsión de propilenglicol sin el extracto (IFA, placebo o matriz).
Experimento 2
Pa seleccionar los animales se utilizó el mismo procedimiento conformaron cuatro grupos experimentales, de 5res animales cada uno, del sexo hembras. Al grupo 1 se le aplicó emulsión del extracto al 5%; al grupo 2, emulsión del extracto al 10 %; al grupo 3, emulsión del extracto alcohólico al 20 % y al grupo control, emulsión de propilenglicol sin extracto (IFA, placebo o matriz).
Los tratamientos tópicos fueron aplicados dos veces al día, con un previo baño con agua y jabón. Los animales fueron observados diariamente, con el objetivo de controlar su evolución.
La duración de los tratamientos se extendió hasta lograr el criterio de recuperación de las lesiones y presencia de ectoparasitos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Extracto del Azadirachta Indica. Pruebas de control
En la tabla 2 se puede observar que los metabolitos secundarios obtenidos en el tamizaje fotoquímico (Terpenoides) poseen propiedades antibacterianas y antifúngicas
Tabla 2: Resultados del tamizaje de metabolitos secundarios
Tamizaje de metabolitos secundarios
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Cloruro férrico 5% Terpenoides De verde a negro
Propiedades antibacterianas y antifúngicas de los terpenoides
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Los resultados de esta investigación coinciden con lo reportado por Rajeev, (2009), el cual comprobó que las hojas del árbol del Nim poseen propiedades antibacterianas y que detiene el crecimiento de micobacterias, y que las hojas pulverizadas con un extracto acuoso eliminan la dermatitis, sarnas e infecciones semejantes. La investigación practicada está en relación con los estudios preliminares en laboratorios, que demuestran que el aceite y el extracto del Nim han tenido efectos significativos sobre varias cadenas de bacterias Gram positivos y Gram negativos, y que uno de los compuestos medicinales del Nim ha demostrado efectividad antibacteriana contra varios microorganismos como Staphilococcus aeureus,que causa la peritonitis, cistitis y meningitis, que es eliminada o puesta inactiva con dosis pequeñas de aceite del Nim. (Puri, 1999; Ibarra, 2003; Madruga, 2004). Resultados Esperados El análisis de los resultados obtenidos nos permitió arribar a las siguientes conclusiones:
Que los resultados obtenidos de los estudios microbiológicos y fisicoquímicos demuestren que
los indicadores se encuentran en los límites permisibles por el MINSAP para un producto de esta naturaleza (extracto alcohólico de hojas del árbol del Nim).
En la caracterización físico-químicamente el extracto alcohólico y sus variables irradiadas corroborar que el parámetro de mayor significación e incidencia sobre la calidad del producto es el índice de acidez o pH.
Demostrar cual formulación del extracto alcohólico mostró ser la dosis más adecuada desde el punto de vista clínico, toxicológico y económico, con la misma efectividad terapéutica.
Demostrar que el producto obtenido teniendo en cuenta que una de las sustancias encontradas en su principio activo es la azadiractina se considerada un fitotoxico de amplio espectro y de bajo efecto residual que no emite toxicidad para los seres humanos y el medio ambiente.
Demostrar que la acción específica del conjunto de estas sustancias presentes en su principio activo produce en los insectos distintos efectos, como el de repelente, antialimentario, esterilizante, repelente a la ovoposición, insecticida, y regulador del crecimiento.
Cronograma de Actividades o Planificación
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lanta
Procesdel Nim
os de trabm :
ajo de la innvestigacioon para laa obtenciónn dfel extraacto alcohó
ólico del árrbol
