Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de
losInhibidores de la cadena de transporte de electrones y de
losdesacoplantes.
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los cambios
de pH producidos por las levaduras.2. Que el alumno describa las
vas por las cuales la glucosa genera los cambios de pH.3. Que el
alumno interprete el efecto de los inhibidores y losdesacoplantes
sobre la salida de protones.
INTRODUCCION
las levaduras tienen un ncleo en donde reside la informacin
gentica de la clula, mitocondrias en donde se lleva a cabo la
sntesis de ATP y un retculo endoplsmico y aparato de Golgi que se
encargan de la sntesis de protenas cuya localizacin final es la
membrana plasmtica o el exterior. A nivel de la membrana plasmtica,
las levaduras tienen una ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del
ATP con el bombeo de protones hacia afuera de la clula.
Como resultado de la actividad de la ATPasa de H+ en la
levadura, se genera un gradiente electroqumico de protones que se
utiliza para impulsar el transporte de nutrientes al interior de la
clula, proceso catalizado por sistemas de transporte llamados
simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la
importancia de esta enzima en la economa celular y en la
energizacin de la membrana celular, basta decir que la ATPasa de H+
consume hasta un 25 % del ATP que se sintetiza en la clula.
HiptesisSi las levaduras consumen glucosa, se observar una
disminucin progresiva de su concentracin en el medio de cultivo con
el tiempo y cambios en el pH extracelular.
Material Tres vasos de precipitado de 100 ml. Pipeta de 10 ml.
Potencimetro. Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/ml. Solucin de glucosa
(10%) para una concentracin final de1%. Agua destilada.
Mtodo
Experimento.
1 .Se prepar una solucin de levadura con concentracin al 10% en
50ml de agua destilada, as como una solucin de glucosa al 10% en
50ml de agua destilada.
2. Se determin el Ph de la solucin de lavadura, posteriormente
el Ph de la solucin de glucosa, asi como su peso. Las mediciones de
Ph y peso se determinaron dos veces mas con un intervalo de
3min.
3. se adiciono 5ml de la solucin de glucosa a la solucin de
levadura, se tom su peso.
4. Se determin el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y
luego cada 10 minutos 2 veces ms.
Anlisis de resultados1. Se elabor una grfica con los resultados
de cada uno de los experimentos; utilizando los valores de las
lecturas de pH vs. Tiempo.
2. Analizar el significado de los cambios de pH en el
experimento control.
Los cambios de pH en lo solucin de levadura-glucosa se debe a la
protonacin de la glucosa, efecto sucedido por la reaccin de
levadura, la cual a nivel celular es encargada de los acoplamientos
de hidrolisis del ATP, el cual funciona como motor de bombeo de
protones H+ hacia a fuera de la clula.
La liberacin de H+ por la accin de la formacin de ATP, acto
conseguido por la ATP sintasa ubicado en la mitocondria de la
levadura, al obtener los H+ de la glucosa para la formacin de ATP
as como el bombeo se genera un gradiente electroqumico de protones
que se utiliza para impulsar el transporte de nutrientes al
interior de la clula. Tambin se observ que de la misma forma el
peso de la solucin disminua con el tiempo debido a la liberacin de
CO2 durante la fermentacin alcohlica sucedida en la solucin.
Referencias1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in
yeast. Arch Biochem Biophys. 1975; 167:397-409.
2. Pardo JP. La ATPasa de H+ de la membrana plasmtica de los
hongos. Mensaje Bioqumico.
