BIOCHIMIE, 1972, 54, 121-122.

Etude analytique des phospholipides du tissu adipeux humain.

Genev ibve DI COSTANZO et Yves GIUDICELLI.

L a b o r a t o i r e de P h y s i o l o g i e de la N u t r i t i o n , Un ivers i ld Par i s Vl, 1, rue V ic tor Cous in , Par i s V e.

U.E R. O d o n t o l o g i q u e - - 1, rue Maur ice A r n o u x - - 9 2 - M o n t r o u g e . (3 /12 /1971) .

INTRODUCTION.

Les phospholipides n 'avaient pus 6t6 jusqu 'h ce jour, h notre connaissance, dtudi6s de faqon approfondie duns le t issu adipeux humain. Pour tant ces consti- tuants, pr6sents h faible concentrat ion et synth6tis6s duns l 'adipocyte, peuvent ~tre alt6r6s duns les anoma- lies m6taboliques de ce t issu observ6es chez l 'homme. Une 6rude analyt ique des diff6rents phospholipides 6tait done le pr6alable indispensable h toute 6tude physiologique ou pathologique.

MATERIEL ET METHODES.

Des f ragments de tis.su adipeux sous-cutan6 abdo- minal sont pr61ev6s chez des hommes adultes jeunes, non ob6ses, h jeun depuis la veille, lors d ' interven-

61u6s d 'une colonne de 3 em de diam6tre garnie de 40 g d'acide silicique et 20 g de supercel par 1 000 ml de chloroforme et 500 ml de ch lo ro fo rme /mOhano l (49 /1 -v /v ) . L 'adsorbant sur lequel res tent fix6s les phospholipides est chass6 de la colonne par un courant d'azote et remis en suspension duns 250 ml de m6- thanol ; apr6s 20 minutes d 'agi ta t ion le m61ange est filtr6. L'op6ration est r6p6t6e deux fois. Les phospho- lipides sont ensuite fraetionn6s par chromatographies sur couches minces de gel de siliee. La migrat ion duns le milieu 61uant : ch lo ro forme/m6thano l / cau (65/25/4 v /v /v) permet d 'obtenir 5 f ract ions ; 1 : acides phosphat idiques + polyglyc6rophosphatides ; 2 : phos- phat idyl6thanolamines + phosphat idyls6r ines ; 3 : phosphat idyl inosi tols + phosphat idylchol ines ; 4 : sphingomyelines ; 5 : lysol6cithines. Apr6s r6cup6ra- tion par grattage et 61ution, les fract ions 1, 2 et 3 sont h nouveau chromatographi6es duns le milieu 61uant : ch lo ro fo rme /m6thano l / amon iaque 7 N, (65/25/4 v /v /v) .

TABLEAU I.

R d p a r t i t i o n (*) des p h o s p h o l i p i d e s du t i ssu a d i p e u x sous -cu tan~ a b d o m i n a l h u m a i n .

Phospholipides

Polyglyc6rophosphatides . . . . . . . . Aeides phosphatidiques . . . . . . . . . Phosphatidyl6thanolamines . . . . . . Phosphatidyls6rines . . . . . . . . . . . . Phosphatidyleholines . . . . . . . . . . . Phosph atidylinositols . . . . . . . . . . . Sphingomy61inee . . . . . . . . . . . . . . . Lysophosphatidyleholines . . . . . . .

Exp. '

9,4 2,8

30,0 2,8

35,2 2,6

12,1 5,1

Exp.

11, 3,

30, 2,

38, 2, 9, 2,

Exp. 3 1

9,4 2,6

26,7 4,0

40,1 2,7 9,9 4,6

Exp. 4 lExp. 5

6,4 8,3 2,1 1,7

31,5 25,7 2,7 4,2

36,4 43,9 1,9 1,9

13,3 9,7 5,7 4,6

ixp. 6

8,4 2,6

28,8 2,9

42,6 2,1 9,7 2,9

Moyenne

8 , 9 .O- 1,8 2,5 ~ 0,7

2 8 , 9 -4- 2,4 3,1 -4- 0,9

3 9 , 5 ~ 3,6 2,3 _____. 0,4

1 0 , 7 -+- 1,7 4,1 -+- 1,5

(*) Exprim6e en pourcentage par rapport aux phospholipides totaux.

t ions ehirurgicales pour appendicite. Le t issu adipeux est d6s son pr616vement lay6 duns du s6rum physiolo- gique h 4°C, s6eh6 entre deux feuilles de papier filtre puis pes6 ; il est imm6dia tement transf6r6 duns un flacon r6frig6r6 eontenant le m61ange eh lo ro fo rme- m6thanol (4:1 v/v) utilis6 pour le t ransport . Les lipides sont extrai ts par broyage duns un mort ier l 'aide de sable de Fonta inebleau et de ehloroforme- m6thanol (4/1 v/v), 20 ml par g de t issu frais. L'op6ra- t ion est r6p6t6e trois fois. L 'extrai t l ipidique obtenu apr6s fi l trat ion et 6vaporation des solvants, est s6eh6 par l '6thanol absolu h l 'aide du vide, et purifi6 par passage sur filtre amiante-sable , puis pes6.

La disproport ion entre les quanti t6s de lipides non phosphor6s et de phospholipides nous a conduit h m o d i f e r la technique habituel le de s~paration ehro- matographique [1] afin d 'obtenir l '6lution complete des phospholipides. Les lipides non phosphor6s sont

On obtient alors pour ehaque fraction, la s6paration des deux const i tuants [1, 2].

Les quantit6s des diff6rents const i tuants sont d6ter- min6es : par pes6e pour les l ipides non phosphor6s ; par dosage du phosphore pour les diff6rents phospho- lipides. L'analyse des acides gras const i tut i fs sous forme d'esters butyl iques est faite par chromatogra- phie gaz-liquide (appareil Packard 7401).

RESULTATS.

Six exp6riences ont 6t6 r6alis6es sur des 6chantil lons dont le poids frais 6tait compris entre 3 et 6 g. Nous avons obtenu par gramme de t issu frais 873 mg _ 30 en moyenne de lipides totaux, et 843 mg ± 22 de lipides non phosphor6s. Les phospholipides ne repr6- sentent que 0,2 p. cent des lipides totaux.

122 G. Giudicell i et G. Di Costanzo.

Nous avons fai t f igurer dans le t ab leau I la r6par- t i t ion des diff+rents phosphol ip ides . Phospha t idy lcho- l ines et p h o s p h a t i d y l + t h a n o l a m i n e s sont l a r g eme n t repr+sent6s (40 et 29 p. cent respect ivement) ; les au t r e s phosp,holip.ides sont en faibles quant i t+s l 'exeept ion des sphingomy+l ines (11 p. cent) et des polyglyc6rophosphat ides (9 p. cent).

La compos i t ion en acides gras des diff+rentes frac- t ions est rapport6e darts le t ab leau II.

L'acide pa lmi t ique est l 'acide gras le plus reprdsent6 dans tous les phosphol ip ides , qui con t i ennen t tous en outre nne for te propor t ion d 'acide ol+iqne tou jou r s sup~r ieure ~ celle de l 'aeide st~arique. Le pourcen- tage d 'acides gras insa tur~s est t ou jou r s inf+r ieur h 50 p. cent. Les p h o s p h a t i d y l + t h a n o l a m i n e s et les phos- pha t idy lchol ines out u n e composi t ion en acides gras, semblable .

t i s sus elle appa ra i t bien c o mme caractTrist ique du t i s su adipeux, en effet : les sph ingomy~l ines ne reprT- sen ten t qne 0,4 p. cent des phosphoHpides t o t aux dans le foie [6], 1 p. cent dans la m u q u e u s e in t e s t ina l e [1] et 1,5 p. cent darts le musc le squele t t ique [~] ; les polyglycTrophosphat ides sont en moins grande q u a n - tit+ darts le foie (2 p. cent) et darts le mu s c l e (5 p. c e n t ) ; les phospha t idy lcho l ines a t t e ignen t u n t a u x darts le foie de 58 p. cent et dans le musc le de 60 p. cent.

La compos i t ion en acides gras du t i s su ad ipenx h u m a i n est l+gTrement diff+rente de celle du t i s su de Rat : l 'acide ol~ique est p lus a b o n d a n t ehez l ' h o m m e ; l 'acide pa lmi t ique est darts les dcux cas le plus repr~sentC Les phosphol ip ides du Ra t sont encore plus satur+s ; seules p h o s p h a t i d y l + t h a n o l a m i n e s et phospha t idy lcho l ines out 40 p. cent d 'acides gras insatur~s . On re t rouve chez le Rat l 'Ttroite parent~

TABLEAU II.

Composi t ion en acides gras (*) des d i f f~rents phosphol ip ides du t issu adipeux h u m a i n (**).

Phospholipides

PolyglycTrophosphatides . . . . . . . . Acides phosphat idiques . . . . . . . . . Phosphat idyl~thanolamines . . . . . . Phosphatidyls~rines . . . . . . . . . . . . Phosphatidylcholines . . . . . . . . . . . Phosphatidylinositols . . . . . . . . . . . Sphi ngomyTl!nes . . . . . . . . . . . . . . . Lysophosphatidylcholines . . . . . . . .

1 4 : 0

7,7 9 ,3 9,5

12,6 9 ,7

11,5 8 ,7 8,3

1 6 : 0

30,5 36,6 38,9 37,0 34,5 34,6 25,4 37,5

t 6 : 1

6,5 6 ,0 8 ,2 8,8 7,1 8 ,0 8,8 6 ,7

11,5 I 27,1 18,1 I 18,2 15,7 20,7 18,3 22,7 17,1 22,5 14,1 24,1 16,5 20 15,5 25,7

t 8 : 2

4 ,5 1,9

[ 2,6 2 ,2 3 ,3 1,7 2 ,7 4,6

1 8 : 3 I r i sh_20 p.

6,1 I 5,6 / 7,5 I t r aces I 1,3 t races 2 ,2 t races 2,1 3 2 ,8 2 ,9 4 ,2 1 ,9 1 ,5 traces

cent Ins

49 33 34 36 38 39 37 37

(*) Expr im~e en pnurcen tage molaire . (**) Valeurs m o y e n n e s obtenues su r 6 prT16vements.

DISCUSSION.

Les t r a v a u x re la t i f s h la concent ra t ion des phospho- l ipides dans le t i s sn ad ipeux h u m a i n et h l eur compo- s i t ion en acides gras ~tant for t peu nombreux , nous nous borne rons h soul igner quelques fai ls essent iels .

Si l 'on se ~ f T r e aux t r a v a u x effectu~s chez l ' h o m m e on consta te que les quant i t~s de l ipides t o t aux pa r g r a m m e de t i s su f ra i s sont n o t a b l e m e n t sup~rieures h celles trouvTes pa r d ' au t res a u t e u r s [3] du fa i t qu ' i l s u t i l i s en t u n e t echn ique d ' ex t rac t ion diff~rente. Toute- fois la t e n e u r en phosphol ip ides est par t icu l iTrement faible, compar+e h celle des au t res t i s sus . La compo- s i t ion en acid es g ras des phosphol ip ides est re,mar- quable par son fa ib le degr+ d ' i n sa tu ra t ion , les l ipides non-phosphorTs 5tant au cont ra i re f o r t e m e n t insa- tur~s [3]. Ce con t ras te entre la s a tu ra t i on des phos- phol ipides et l ' i n s a t u r a t i o n des l ipides non-phosphor~s est retrouv+ chez l ' h o m m e d a n s la paroi aor t ique [4]-

Si l 'on se rTfTre aux t r a v a u x effectu~s cbez le Rat , on cons ta te que darts le t i s su ad ipeux 6pidydimai re de Ra t [5] : la propor t ion de phosphol ip ides est pen diff~rente (0,2- 0,3 p. cent) ; la r+par t i t ion des const i - t u a n t s est s imilaire , et on re t rouve en par t icul ier les for tes quant i t+s de polyglyc+rophosphat ides , de sph in - gomy~l ines e t l a pauvret~ relat ive en phospba t idy lcho- lines. Si on compare cette rTpar t i t ion h eelle d ' au t res

en t re la compos i t ion en aeide gras des p h o s p h a t i d y l - 6 thano lamines et celle des phospha t idy lcho l ines du t i s su adipeux. Con t r a i r emen t h ce que l 'on observe darts le foie et l ' in tes t in .

I1 semble doric que : la r ichesse en polyglycTrophos- pha t ides et en sph ingomy~l ines ; la pauvre t6 relat ive en acides gras insa tur+s e t l a s imi l i tude de composi - t ion en acides gras des p h o s p h a t i d y l T t h a n o l a mi n e s et des phospha t idy lcho l ines soient spTcifiques du t i s su adipeux, quel le que soit son or igine et l'espTce an imale .

BIBLIOGRAPHIE.

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BIOCHIMIE, 1972, 54, n ° 1.