研究用試薬・機器・受託サービス

■ カスタム人工ヌクレアーゼ作製サービス

■ piggyBAC™トランスポゾンシステム

■ 遺伝子改変マウス/ラット作製サービス

■ リサーチモデルラット

　・カスタム CRISPR/Cas９ Nuclease 作製サービス　・カスタム XTN™ TAL Nuclease 作製サービス　・pre-made XTN™ TAL Nuclease

　・カスタム Gene Editing™vector 作製サービス　・カスタム Gene Editing kit 作製サービス　・Human Safe Harbor Gene Editing Kit-AAVS1

ゲノム編集特集。

アプロサイエンス情報誌2013 / September / vol.7アプロサイエンス情報誌2013 / September / vol.7

最先端の遺伝子改変技術をいち早く活用するために

■ 動物飼育・薬理薬効・薬物動態試験サービス

アプロサイエンス情報誌アプロサイエンス情報誌アプロサイエンス情報誌アプロサイエンス情報誌2013 / September / vol.72013 / September / vol.72013 / September / vol.72013 / September / vol.7

Science News Vol.7

CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Plidromic Repeats）ーァフ、るけおに菌細古や菌細、はムテスシ )detaicossA RPSIRC（saC/

ジやプラスミド等からのDNA侵入に対して働く防御システムを利用した、新しいゲノム編集ツールです。CRISPR/Cas9システムでは、標的配列と相補的な20塩基のガイドRNAに導かれ、Cas9ヌクレアーゼが標的配列を特異的に認識し、切断します。様々な生物や配列に対して設計することが可能で、ZFNやTALENに比べ標的配列設計の自由度が高いのが特長です。

カスタム CRISPR/Cas9 Nuclease 作製サービス カスタム XTN™ TAL Nuclease 作製サービス

CRISPR/Cas9 Nuclease とはXanthamonas 由来のTALEs (Transcription Activator-Like Effectors)が持つDNAに特異的に結合するドメインと、制限酵素FokⅠを連結させた人工ヌクレアーゼで、標的遺伝子を特異的に改変、破壊します。 CRISPR/Cas と同様、様々な生物種の配列に対して自由に設計することが可能であり、Zinc finger nuclease に比べ標的遺伝子に対する特異性が高いのが特徴です。

XTN™ TALENs とは

XTN™ TAL Nucleases による遺伝子改変のメカニズム

N G

G

C

CN

3’

5’

5’

3’

5’ガイドRNA配列

標的配列

Protospacer Adaptor Motif（PAM）

3’

Cas9CRISPR-Cas9 システムの概略図

【データ例】 XTN™ TALENs によるラットRag1遺伝子のノックアウト

Empty sgRNA AAVS-1 sgRNA

【データ例】 AAVS-1 Cas/CRISPR cleavage assay

カスタム人工ヌクレアーゼ作製サービス2

癌やエピジェネシスに関与しているヒト遺伝子に対するプリメイド XTNs をご提供します。ノックアウト、ノックインなど癌研究やゲノム編集にお役立てください。pre-made XTNs TAL Nuclease

遺伝子名一覧（対象生物種：human）

ABL1, AKT2, ALK, APC, ATM, AXIN2, BAX, BCL6, BMPR1A, BRCA1, BRCA2

CBX3, CBX8, CCND1, CDC73, CDK4, CHD4, CHD7, CTNNB1, CYLD, DDB2

ERCC2, EWSR1, EXT1, EXT2, EZH2

FANCA, FANCC, FANCF, FANCG, FES, FGFR1, FH, FLCN, FLT4, FOXO1, FOXO3, GLI1

MAP2K4, MDM2, MET, MLH1 , MSH2, MUTYH, MYCL1, MYC, MYCN, NBN, NCOR1, NCOR2

PDGFRA, PDGFRB, PHF8, PMS2, PTCH1, PTEN, RARA, RBBP5, RECQL4, RET, RUNX1

SDHB, SDHC, SDHD, SETDB1, SIRT6, SMAD2, SS18, SUZ12, TFE3, TP53, TSC2,

キャンペーン・関連製品の詳細はこちらをご覧ください。　→　 http://aproscience.com

標的配列

Fok I

・・・・・T　A　T　C　G　C　G・・・33-35aa 33-35aa 33-35aa 33-35aa 33-35aa

DNA結合ドメインが標的配列に結合することで Fok1 がダイマーを形成し、非常に特異的な”ゲノムを切断するハサミ”になります。

DNA結合ドメインDNA結合ドメインFok I

標的配列 TALE認識配列DNA結合ドメインDNA結合ドメイン Fok I

標的配列TALE認識配列

DNA結合ドメインDNA結合ドメイン

¥98,000

￥350,000上記価格はアカデミア価格となります。※1 自作用のベクターセットです。ガイドRNA用 empty vector (hU6 または T7 promoter), Cas9発現用vector の2プラスミドのセットです。※2 カスタムガイドRNA, Cas9の2プラスミド：各10μg を納品します。ガイドRNAのプロモーターは、hU6またはT7のどちらかを選択していただきます。※3 mRNA（ガイドRNA, Cas9：各1μg/μL以上、20μg）ならびにプラスミドを納品します。ガイドRNAのプロモーターは、T7 のみとなります。・ キット、カスタムサービスのいずれにおいても、Positive Control ベクターも併せて納品いたします。・ カスタム作製サービスは、標的配列のデザインから承ります。　・ 事前の切断活性測定は実施しておりません。もし、標的遺伝子に対して作用しなかった場合、1回限り無償で再作製いたします。・ 研究目的の場合、使用にあたり特に制限はありません。

カスタム CRISPR/Cas9 作製サービス（プラスミド）

項目名※1

カスタム CRISPR/Cas9 作製サービス（mRNA）

CRISPR/Cas9 Kit (hU6 promoter)

品番

CRISPR/Cas9 Kit (T7 promoter)

Cas-K6

Cas-K7 ※1

※2

※3 ¥460,000

¥350,000 ￥260,000¥98,000

価格（税別）

上記価格はアカデミア価格となります。すべてのプログラムにおいて、標的配列のデザインから承ります。※1 再作製の保証は含まれておりません。※2 XTNがトランスフェクションされたにもかかわらず標的配列に作用しなかった場合、1回に限り無償で再作製いたします。※3 より切断効率を上げるため、同一遺伝子に対し、２つのXTN TALsを作製するプログラムです。・ 研究目的の場合、使用にあたり特に制限はありません。・ ヒト、マウス、ラット、ゼブラフィッシュの場合、活性確認用のポジティブコントロールを付属いたします。

項目名 プログラム

サクセスプログラム

XTN TALs (Heterodimeric Fok1)

アクセレレイションプログラム

XTN TALs (Homodimeric Fok1)

スタンダードプログラム

サクセスプログラム

アクセレレイションプログラム

スタンダードプログラム

※1

※2

※3

※1

※2

※3

¥500,000 ￥390,000¥600,000 ￥490,000¥850,000 ￥650,000¥600,000 ￥430,000¥700,000 ￥540,000¥950,000 ￥750,000

価格（税別）

Repeats）

ビス キャンペーン実施中！

2013年12月末まで

項目名 仕様（納品物）

上記各遺伝子 1セット（2プラスミド：各10μg） ¥150,000 ￥100,000価格（税別）

ス

Effectors)が

キャンペーン実施中！

2013年12月末まで

NX1

￥100,000（税別）

キャンペーン実施中！

2013年12月末まで

VHL, XPA, XPC

piggyBAC™トランスポゾンシステム 3

カスタム piggyBac™ベクター作製サービス カスタム Gene Editing™vector 作製サービス

トランスポゾンとは、”mobile DNA：動く遺伝子”とも呼ばれ、DNA上のある位置から別の位置に自由に移動または複製する因子です。このシステムを利用し、ウイルスを使用せず、目的配列を高効率にゲノムに組み込むことが可能です。特に、piggyBac™トランスポゾンは、100kbを超える配列の組み込みも可能で、また、一旦組み込んだ配列を痕跡を残さずに（Footprint-free）取り除くことが可能なのが特長です。

トランスポゾンとはカスタム Gene Editing™vector 作製サービスとは、標的配列に対する TAL Nucleaseまたは CRISPR/Cas とゲノム編集用（ノックイン、ポイントミューテーション等）のHR（Homologous recombination） ドナーベクターをカスタムで作製するサービスです。ドナーベクターに piggyBac™トランスポゾンベクターを使うことで一旦組み込んだ配列を痕跡を残さずに（Footprint-free™）取り除くことも可能です。塩基置換、挿入したセレクションマーカーの除去に応用可能で、TAL Nuclease や CRISPR/Cas との組み合わせにより、高効率の変異導入が期待できます。

概要

ヒト19番染色体上に存在する AAVS1 領域（別名 PPP1R12C）は、インスレーターに挟まれたオープンクロマチン構造になっているため、挿入された遺伝子が発現抑制を受けにくい領域（Safe Harbor）であることが知られています。本キットは、AAVS1 領域を特異的に切断する XTN™TAL Nuclease または CRISPR/Cas9 を発現するベクターと、AAVS1 の切断箇所に目的遺伝子をノックインするためのドナーベクター、ポジティブコントロールベクターがセットになったキットです。他の遺伝子パスウェイに影響を与えず、導入遺伝子の安定発現が可能です。

Human Safe Harbor Gene Editing Kit-AAVS1

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piggyBac™ トランスポゾンベクターシステムの概要

１ 目的配列を組み込んだ piggyBac™ Transposon 　 ベクター とPiggyBac™ Transposase ベクターを　 コトランスフェクションする。

２　発現した piggyBac™ Transposase により、トランス　　ポゾンの両端にある、逆向き反復配列　　（Inverted Repeat Sequences）部分が切り出される。

３　切り出された配列は、ゲノム中のTTAA部位に　　組み込まれる。

４　piggyBac™ Transposase ベクターのみを改めて　　トランスフェクションすると、発現した PiggyBac 　　Transposase により、組み込まれた配列が切り　　出される。

+PiggyBac™ Transposase

PiggyBac™ Transposon

“cut”

“paste” +

“Re-excise” +

１ TAL Nuclease または CRISPR/Cas9 により　 標的配列を切断する。

２　標的配列と相補的な配列を持つ Homologous arm 上に、ノックイン　　したい配列を含む piggyBac™トランスポゾンベクターを作製し、　　1．の TALEN または CRISPR/Cas と一緒にトランスフェクションする。

３　TAL Nuclease または CRISPR/Cas9 　　にて切断された部位に、目的の配列が　　相同組換えによりノックインされる。

４　piggyBac™Transposase ベクターのみを　　改めてトランスフェクションすると、発現した 　　piggyBac™Transposase により、挿入された 　　piggyBac™が切り出される。

TAL Nuclease または CRISPR/Cas9 とpiggyBac™genome editing ベクターによる Footprint-free™なノックイン例

TAL Nuclease または CRISPR/Cas による標的配列の切断

PiggyBac™ Transposase

+

組み込み配列の除去例piggyBac™ベクターでRFPを組み込んだ後、0.5μg、2.5μgのpiggyBac™ Transposase 発現ベクターを添加した。組み込んだ配列が88%除去できたことを確認した。

piggyBac™ Transposaseを作用させることで、およそ5%の導入が見られた。

A:piggyBac™ベクターのみ B:piggyBac™ベクター + WT piggyBac™トランスポザーゼ

stem cellにおける使用例

項目名 仕様（納品物）

カスタムpiggyBac™ ベクター作製サービス

目的に応じ、カスタムでpiggyBac™ベクター作製を承ります。価格等詳細はお問い合わせください。

お問い合わせください。

※1 標的遺伝子に対する XTN™TAL Nuclease もしくは CRISPR/Cas と、ノックイン（ポイントミューテーションを含む）用のドナーベクターを　 　　カスタムで作製いたします。Gene Engineering™プログラムには、組み込み配列の除去（Footprint-free™）機能は含まれておりません。※2 標的遺伝子に対する XTN™TAL Nuclease もしくは CRISPR/Cas と、ノックイン（ポイントミューテーションを含む）用のドナーベクターを 　 カスタムで作製いたします。Footprint-free™可能な piggyBac™ベクターにて作製し、piggyBac™Transposase 発現ベクターも併せて納品　　　いたします。

項目名 価格（税別）

CRISPR/Cas Gene Engineering™ プログラム

XTN™ TALEN Gene Engineering™ プログラム※1

※1

※2

※2

XTN™ TALEN Footprint-Free™ Gene Editing プログラム

CRISPR/Cas Footprint-Free™ Gene Editing プログラム

¥950,000

¥750,000

¥1,350,000

¥1,100,000

Cel-1アッセイによる AAVS1の deletion 例（HEK293）

項目名 価格（税別）

XTN™ AAVS-Safe Harbor Gene Editing Kit

AAVS- CRISPR/Cas Safe Harbor Gene Editing Kit

¥298,000

¥298,000

★★

切り出し

組み込み

ノックイン用ドナーベクター

挿入したい変異のみを導入可能（Footprint-free™な編集が可能）

切断部位

各種 pre-made のpiggyBac™トランスポゾンベクターを取り揃えています。詳細はお問い合わせください。

pre-made piggyBac™ベクター

項目名 価格（税別）

PB007 シリーズ ： Custom production vectors

PB001 シリーズ ： Expression & reportes

¥71,000~

¥71,000~

¥71,000~

¥330,000

¥115,000

PB002 ： Expression & reporters

Multivector™ ： Gene Editing

pbGENIE ： Transgenic animals

Forward AAVS1 XTN™ binding site Reverse AAVS1 XTN™ binding site

株式会社 アプロサイエンス研究用試薬・機器・受託サービス

http://aproscience.com/info@aprosci.com

本社〒771-0360　徳島県鳴門市瀬戸町明神字板屋島124-4　TEL：088-683-7211 FAX：088-683-7212東京営業所〒101-0051　東京都千代田区神田神保町2-34-7　TEL：03-6272-9301 FAX：03-6272-9302

tel.088-683-7211お問合せ：

標的遺伝子に対し、自由に作製可能な人工ヌクレアーゼ（XTN™ TAL Nuclease、 CRISPR/Cas9）の登場により、マウス以外の様々な生物種で遺伝子改変動物の作製が可能になりました。ラットは様々な疾患、がん研究、毒性試験のモデルとして研究されており、また、マウスに比べサイズが大きく、手術や採血などの面でも大きな利点があります。 本サービスでは、目的の遺伝子改変ラットをカスタムで作製いたします。標的遺伝子、ラットの系統をご指定いただければ、標的配列のデザインから実施いたします。

4 遺伝子改変ラット作製サービス

人工ヌクレアーゼ（XTN™TAL Nuclease、 CRISPR/Cas）による遺伝子改変ラット/マウスの作製法

PNI法

SSCs法

人工ヌクレアーゼによる受精卵の遺伝子改変

擬似妊娠雌への受精卵の移植 WTとの掛け合わせ ヘテロ複合体

人工ヌクレアーゼによるSSCの遺伝子改変

無精子症雄へのSSCの注入 WTとの掛け合わせ ヘテロ複合体

遺伝子改変マウス作製サービス

遺伝子改変ラット作製と同様に、人工ヌクレアーゼ（XTN™TAL Nucle-ase、CRISPR/Cas9）による遺伝子改変マウス作製も承ります。詳しくはお問い合わせください。

カスタム遺伝子改変細胞作製サービス

各種細胞（CHO, HEK293, 3T3 等）に対し、人工ヌクレアーゼ（XTN™TAL Nuclease、CRISPR/Cas9）による遺伝子改変細胞の作製を承ります。ノックアウト、ノックイン、ポイントミューテーション等対応可能です。詳しくはお問い合わせください。

飼育管理サービス

トランスジェニック、ノックアウトマウス等の遺伝子改変動物やマウス、ラットの病態モデル動物等をお預かりし、維持・繁殖・供給、クリーン化(SPF化)、凍結胚の作製・保存・個体復元、遺伝子判定(PCR法)等の業務を行います。ご要望にフレキシブルにご対応します。詳しくはお問い合わせください。

薬理薬効試験サービス

健常動物や各種病態モデル動物を用いて、医薬品、機能性食品、化粧品等の薬効薬理試験を受託致します。経験の無い試験についてもモデルの立ち上げからお手伝い致します。

薬物動態試験サービス

薬物動態(PK/TK)試験では、動物に被験物質を投与後、経時的に採血を行います。基本的に、血漿あるいは血清を分離して凍結状態で納品致します (尿や糞の採取も可能です)。 分析・測定についてもご相談ください。

・ご希望のラット系統、必要な匹数等により、納期、価格が異なります。・別途送料が必要となります。

Disease Gene

AdaImmune System

SERT

Drug Metabolism Bcrp

Ghsr

Nrg1

OPRL1

Pde4d

Trpc4

Myo9a

Mc4r

Neuroscience-CNS

Metabolic Disease/Obesity

Cardiovascular

Cancer/Toxicology

Leptin

Sod3

P53

リサーチモデルラット

ノックアウトコオロギ作製サービス

再生の基本メカニズムは昆虫もヒトもほぼ同じなため、昆虫は再生メカニズムの研究に応用可能です。コオロギは安価でショウジョウバエ等に比べて体も大きく、注目される研究材料のひとつです。本サービスでは、人工ヌクレアーゼ（XTN™ TAL Nuclease、CRISPR/Cas9 ）によるノックアウトコオロギをカスタムで作製いたします。

コオロギにおけるCel1アッセイによる変異の確認

■ Cas9+ガイドRNA

■ ガイドRNAのみ

Cel1(-) Cel1(+)

■ Cas9のみ

Cel1(-) Cel1(+) コオロギの卵に各RNAを顕微注入後、Cel1アッセイで切断効率を確認した。コントロール（Cas9 mRNAのみ、ガイドRNAのみ）と比較して、 Cas9 mRNA＋ガイドRNAを共注入したサンプルでは、高確率でCel1による切断が確認された。

Cel1(-) Cel1(+) Cel1(-) Cel1(+) Cel1(-) Cel1(+) Cel1(-) Cel1(+)

※ 仕様・価格等、詳細はお問い合わせください。

ご希望のラット系統、配列の大きさ（ノックインの場合）によって難易度が大きく変わります。まずはご希望のプロジェクト（ノックアウト、ノックイン、コンディショナル等）、ならびに、ご希望のラット系統についてご連絡ください。

・トランスジェニックラット作製・ノックアウトラット作製・ノックインラット作製・コンディショナルノックアウトラット作製

＜受託サービス項目＞

1. ベクター構築2. Transfection、変異の Selection、Implantation3. germline transmission、ファウンダーの送付 ※各ステップ毎のご請求となります。

＜仕様＞ 作業は下記３ステップで進めます。

価格（税別）

お問い合わせください。