DEFINITIONLes anticorps anti-nuclaires (AAN) sont des auto-anticorps ragissant avec divers constituantsdu noyau cellulaire (ADN, histones, centromres, antignes nuclaires solubles.). On yassocie les anticorps dirigs contre des constituants prsents dans le cytoplasme maisprovenant du noyau. Plus de cinquante anticorps anti-nuclaires ont t dcrits, mais lasignification clinique dun grand nombre dentre eux nest pas tablie.Les Ac anti-centromres sont des AAN dfinis par leur aspect particulier en immunofluo-rescence indirecte (IFI).Synonymes : AAN, ANA, Ac anti-noyaux.

INDICATION DU DOSAGECes anticorps reprsentent le dpistage indispensable pour le diagnostic des maladiesauto-immunes non spcifiques dorgane (ou connectivites ou maladies auto-immunessystmiques) (Tableau 1). Ils sont recherchs devant des signes cliniques plus ou moinsspcifiques (arthralgies, scheresse de la bouche et des yeux, signes cutans, etc.). Toutrsultat dAAN positif dclenche la ralisation de tests complmentaires (anticorps anti-antignes nuclaires solubles et anti-ADN natif), visant prciser la spcificit dpisteen IFI, afin dobtenir une orientation diagnostique plus prcise (fig 1).

Tableau 1 : Association clinique des principaux AAN

En dehors des connectivites, les AAN peuvent tre retrouvs, parfois titre lev, dans denombreuses autres situations pathologiques ou physiologiques :

Maladies auto-immunes spcifiques dorganes (hpatites auto-immunes, thyrodites, etc.)Infections viralesCancers

Auto-anticorps Maladie associe (sensibilit %)Anti-ADN natif Lupus Erythmateux Dissmin= LED (80%)Anti-RNP Syndrome de SHARP (100%) LED (25%)Anti-Sm LED (10%)Anti-SSA Syndrome de Gougerot Sjogren (50%), LED (30%)Anti-SSB Syndrome de Gougerot Sjogren (80%), LED (5%)Anti-PCNA LED (3%) Anti-Scl70 Sclrodermie diffuseAnti-centromre Syndrome CREST (80%)Anti-Jo1 Poly-dermatomyositeAnti-Pm/Scl Sclrodermie, polymyosite

Anticorps anti-nuclaires

et anticorps anti-centromres

MMENTO BIOLOGISTE

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Affections diverses (vascularites, sarcodose, insuffisance rnale)Prise de mdicaments inducteurs (btabloquants, isoniazide, interfron, minocycline,chlorpromazine, procanamide etc)Age > 60 ans (prdominance fminine).

Linterprtation dun titre danticorps anti-nuclaires positif ncessite donc une confrontationclinico-biologique trs troite, tenant compte notamment des rsultats des tests complmentaires,des signes cliniques et de lge du patient.

METHODES DE RECHERCHELes anticorps anti-nuclaires sont recherchs par immunofluorescence indirecte (IFI) surcellules HEP-2 ou HEP-2000. Les rsultats sont rendus en inverse de dilution. Conformment la nomenclature (arrt paru au JO du 24/04/95), tout dpistage positif dAAN ( au 100e)est suivi dune recherche quantitative dAc anti-DNA natif ainsi que dun dpistage danti-antignes nuclaires solubles (ENA). Si cette seconde recherche est ngative, un titrage desAc anti-histones peut tre effectu. Les principaux aspects de fluorescence nuclaires sur HEp-2000 sont : homogne, mouchet,membranaire, centromre et nuclolaire. Ces diffrents aspects orientent sur la nature delauto-antigne cible (Tableau II), mais ils ne suffisent pas poser le diagnostic, plusieursanticorps anti-nuclaires de spcificits diffrentes pouvant co-exister dans le mme srum. Les aspects de fluorescence cytoplasmiques (suspicion danticorps anti-mitochondrie, actine,ribosomes, Jo1, synthtases), sont confirms sur triple substrat (foie, rein, estomac) ou parune technique immunoenzymatique adapte.

Tableau II : Principaux anticorps voqus en fonction de l'aspect sur cellules Hep2000.

Figure 1 : Dmarche diagnostique de recherche dAANDpistage des anticorps anti-nuclaires en IFI sur cellules Hep-2 / Hep-2000

Aspect de fluorescence Spcificit voqueHomogne Anti-ADN natif, anti-histone, anti-nuclosomeMouchet RNP, Sm, SSA, SSB, Scl70Nuclolaire Anti-Pm/Scl, Mouchet M2 de type centromre Centromre

Serum au 1/80

POSITIF

Titrage

Homogne Mouchet Centromre Nuclolaire Cytosquelette

Ribosomes

Mitochondries

CONFIRMATIONRecherche de la spcificit des AAN

Anticorps anti-ADN natifs

Anticorps anti-antignesnuclaires solubles

Fluorescence nuclaire Fluorescence cytoplasmique

Caractrisation de la fluorescence

NEGATIF

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- Frquence = 5 jours / 7- Dlai technique = 1 jour si rsultat ngatif

PRELEVEMENTSrum Quantit du prlvement : 1 mlConservation et transport : +4 C.

EXPERTISE BIOMNISVolumtrie quotidienne (AAN dont anti-centromres) : environ 620/jour (Paris : 308/j ; Lyon : 314/j).

Qualit des rsultats : - Recrutement important qui permet lobservation de tous les aspects des AAN y comprisles fluorescences complexes (htrognes, mixtes, rares).- Personnel qualifi et expriment pour la lecture des lames en immunofluorescence.- Equipement performant (microscope de dernire gnration, technologie Bioplex:technique de pointe permettant le titrage de tous les anticorps anti-antignes nuclairessolubles en une seule tape).- Techniques, lames choisies et valides au laboratoire.- Paramtres accrdits COFRAC Lyon, en cours daccrditation Ivry (Anticorps anti-nuclaires, anticorps anti-antignes nuclaires solubles, anticorps anti-ADN natif).

Rapidit des rsultats :- Ralisation quotidienne des dosages des anticorps anti-nuclaires qui sont donc rendus J1 si ngatifs et si positifs, le titrage est rendu J2.- Dclenchement automatique du dosage, sur le Bioplex, des anticorps anti-antignesnuclaires solubles et anticorps anti-ADN natif si les anticorps anti-nuclaires sontpositifs : donc assurance davoir un rsultat complet et cliniquement pertinent en 3 joursmaximum.

Expertise biologique et technique :- Assistance biologique et aide linterprtation des rsultats.- Conseil la prescription.- Veille scientifique, collaboration avec les fournisseurs de ractifs, les laboratoires hospitaliers,contacts privilgis avec les mdecins rfrents en auto-immunit au sein des CHU,participation aux congrs nationaux et internationaux en auto-immunit.- Membre de socit savante (Socit Franaise dImmunologie).

EXEMPLE DE COMPTE-RENDUS BIOMNISVoir feuillets ci-joints.

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