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1 DOMAINE DUTILISATION La glose TSN est principalement destine au dnombrement, 46C, des microorganismes sulfito-rducteurs dans certaines denres animales ou dorigine animale, suivant larrt du 21 dcembre 1979 (modifi). 2 HISTORIQUE La glose Tryptone-Sulfite-Nomycine (TSN) avait t recommande par Mossel et dveloppe par Marschall et al. en 1965 pour les isolement slectif et dnombrement de Clostridium perfringens dans les produits alimentaires et les autres prlvements, principalement lorsque ceux-ci taient contamins par une microflore secondaire importante. La mise en vidence de Clostridium perfringens tait fonde sur les 3 caractristiques suivantes : croissance optimale 46C, tolrance la Nomycine et la Polymyxine, forte capacit rduire le sulfite. 3 PRINCIPES La prsence simultane de Nomycine et de Polymyxine B rend le milieu inhibiteur vis--vis des

entrobactries. La Nomycine inhibe la croissance de la plupart des souches de Clostridium bifermentans. Les microorganismes sulfito-rducteurs rduisent le sulfite en sulfure provoquant, avec le citrate

ferrique, un prcipit noir de sulfure de fer autour des colonies. 4 PREPARATION

Mettre en suspension 40,0 g de milieu dshydrat (BK001) dans 1 litre deau distille ou dminralise.

Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et ly maintenir durant le temps ncessaire sa dissolution.

Rpartir en tubes, ou en flacons. Striliser lautoclave 121C pendant 15 minutes.

40 g/L 15 min 121C

FICHE TECHNIQUE

GELOSE TSN

Rf. BK001HA

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5 MODE DEMPLOI

Refroidir et maintenir le milieu 44-47C. Chauffer le produit analyser afin de dtruire les formes vgtatives

et dactiver les spores. Transfrer 1 mL de linoculum et de ses dilutions dcimales

successives dans les tubes, en vitant au maximum dincorporer de lair au milieu.

Homogniser parfaitement par retournement complet. Refroidir dans un bain deau glace. Incuber 46C 1C pendant 24 2 heures.

En profondeur (1 mL)

Incubation 24 h 46C

Utilisation en tubes Ne pas surchauffer le milieu. Le chauffage des tubes aprs ensemencement doit tre vit. Utilisation en boites coules Les botes inocules doivent tre incubes en jarre danarobiose en prsence dun mlange gazeux dhydrogne et de dioxyde de carbone. La lecture doit tre effectue aussitt aprs ouverture de la jarre, sinon les colonies risquent de plir par suite de loxydation du sulfure de fer. 6 LECTURES Dnombrer les colonies entoures dun halo noir. 7 FORMULE - TYPE (pouvant tre ajuste de faon obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu :

- Tryptone ........................................................................................ 15,0 g - Extrait autolytique de levure .......................................................... 10,0 g - Sulfite de sodium............................................................................. 1,0 g - Citrate ferrique ammoniacal ............................................................ 0,5 g - Sulfate de Nomycine ................................................................... 50 mg - Sulfate de Polymyxine B ............................................................... 20 mg - Agar agar bactriologique ............................................................. 13,5 g pH du milieu prt--lemploi 25C : 7,2 0,2. 8 CONTROLE QUALITE Milieu dshydrat : poudre beige, fluide et homogne. Milieu prpar : glose ambre.

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Rponse culturale typique aprs 24 heures dincubation en anarobiose 46C :

Microorganismes Croissance (Rapport de productivit : PR) Caractristiques

Clostridium perfringens WDCM 00007 Clostridium perfringens WDCM 00080 Bacillus cereus WDCM 00001 Escherichia coli WDCM 00013

PR 70% PR 70%

inhibe inhibe

colonies noires colonies noires

9 STOCKAGE - CONSERVATION Milieu dshydrat : 2-30C. La date de premption est mentionne sur ltiquette.

Milieu prpar ( titre indicatif) : Non recommand, utiliser immdiatement aprs prparation 10 PRESENTATION Milieu dshydrat : Flacon de 500 g BK001HA 11 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES MOSSEL, D.A.A.. 1959. Enumeration of sulphite-reducing clostridia occurring in foods. Journal of the Science of Food and Agriculture, 10 :662-669. ARBUCKLE, R. E.. 1960. The influence of temperature on the growth of Clostridium perfringens. M.A. Thesis, Indiana Univ., Bloomington. COLLEE, J.G., KNOWLDEN, J.A., and HOBBS, B.C.. 1961. Studies on the growth, sporulation and carriage of Clostridium welchii with special reference to food poisonning strains. J.ournal of Applied Bacteriology, 24 : 326-339. MARSCHALL, R.S., STEENBERGEN, J.F., and McCLUNG, L.S.. 1965. Rapide technique for the enumeration of Clostridium perfringens. Applied Microbiogy, 13(4) : 559-563. J.O du 19 janvier 1980. Critres microbiologiques auxquels doivent satisfaire certaines denres animales ou dorigine animale. Mthodes gnrales danalyse bactriologique. (arrt du 21 dcembre 1979 modifi). Dnombrement des anarobies sulfito-rducteurs ( 46C). RODIER, J.. 1984. Lanalyse de leau. Recherche et dnombrement des Clostridium perfringens. Dunod 7me Ed., 855-857.

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12 AUTRES INFORMATIONS Les mentions portes sur les tiquettes sont prdominantes sur les formules ou les instructions dcrites dans ce document. Elles sont susceptibles dtre modifies tout moment, sans pravis. Code document : BK001/F/2003-04 : 9 Date cration : 01/04/2003 Dernire mise jour : 27/10/2011

Motif de la rvision : Remaniement gnral Corrections 7 : rfrence WDCM des souches de contrle