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VOL. 17 (1955) SHORT COMMUNICATIONS, PRELIMINARY NOTES Z57 Groupes des acides nucl6iques intervenant dans la formation de complexes avec la streptomicine et sp6cificit6 de la r6action La formation de conlplexes insolubles entre les acides ilucldiques et la streptomycine, signalde par COHEN1, a ~t4 appliqude 5. diverses reprises en vue de la purification des nucldoprot6ides du liquide surnageant d'ultracentrifugation de diff6rents tissus. Ii faut cependant remarquer que la streptomycine est capable de former des complexes avec d'autres substances. Rappelons qu'en 1948 , LISON2 a montr6 que les esters sulfuriques de poly- saccharides sont prdcipit6s par la streptomycine. Nous avons pu nlettre en dvidence que cet antibiotique peut prdcipiter dgalement le polymdtaphosphate de sodium, deux phosphoprotdines: la casdine et la livdtine, ainsi que le polypeptide glutamique synth6tisd par Bacillus subtilis. Par contre, nous avons constatd que la streptomycine ne pr6cipite pas des protdines for- tement acides, telles que les antig6nes solubles associds aux virus SO4 = 82.5 de la mosaique jaune du navel aet de la mosaique du tabac 4,5 qui PO4H- 82.5 doivent vraisemblablement leur point iso61ectrique extr6mement AsO 4H = 8o bas (respectivement aux pH 3.8 et 3.4) 5. la prddominance des H C--COO- 63 acides aminds dicarboxyliques dans leur molecule. 11 Ainsi, la streptomycine semble capable de pr6cipiter les H--C--COO- polyphosphates, les polysulfates, mais certains aeides polycar- CO0 63 tloxyliques seulement. ] l,a seconde partie de ce travail semble pouvoir nous fournir COO- une donnde suppldmentaire sur les conditions de pr6eipitation COO- 6 3 des acides polycarboxyliques, ainsi que sur la nature des groupes I des acides nucl6iques qui interviennent dans la formation de CH2 conlplexes avec la streptomycine. ] On salt que la formation de complexes insolubles entre la COO- streptomycine et les acides ribonucldiques est inhibde par la COO- 55 prdsence de sels 6. L'efficacitd de l'inhibition varie fortement d'une ] substance 5. l'autre. Le Tableau I rend compte du pourcentage CH2 d'inhibition de la pr6cipitation d'acide ribonucl6ique (concentra- o o ~ / CH2 lion . -5 "o) par la streptomycine, en pr4sence de diff6rents ions en concentration 0.02 molaire; le rapport de masse acide ribonu- ] cldique/streptonlycine est de t/2o. COO Tableau I montre que les anions bivalents sont les plus H C---COO 54 inhibiteurs et d'autant plus que les deux charges ndgatives sont ][ plus rapprochdes l'une de l'autre. La n6cessit6 de la proximitd de -OOC--C H deux charges ndgatives fournit une explication du fail que la CI- 33 streptomycine le peptide polyglutamique et non les prot6ines CH3--COO zo acides testdes. Dans le dernier cas, les groupes COO sont cer- borate o tainement plus 6cart6s les uns des autres, du fait qu'entre les saccharose o r6sidus glutamyle sont intercalds d'autres acides amin6s et que la chaine polypeptidique est vraisemblablement spiralde. TABLEAU I Nature de l'inhibiteur O,o d'inhibition (en solution M,5o) La streptomycine ne prdcipite que des macroInol6cuies: les mononucl6otides, et mSme les poly- nucldotides 5` faible poids mol6culaire, ne sont pas prdcipitds. I1 en est de m~me de tous les anions inhibiteurs mentionnds ci-dessus. En rdsum6, la streptomycine peut doric prdcipiter routes les macromol6cules 5` groupes ionisables prdsentant deux charges n6gatives suffisamment rapproch6es, comme c'est le cas pour SO4 =, PO4H- et deux COO- contigus, l,'insolubilit6 du complexe est due, vraisemblablement, 5` la formation de rdseaux entre les deux types de moldcules polyvalentes en pr6sence, conform6ment 5` l'hypoth6se de COHEN 1 . M. DE DEKEN-GRENSON Laboratoire de PhysioIogie animale, Universitd de Bruxelles (Belgique) 1 S. S. COHEN', J. Biol. Chem., 168 (1947) 511. 1,. LIsoN, Compl. rend. soc. biol., 142 (1948) 1441. 3 R. MARKHAM, R. E. F. MATTHEWS ET K. M. SMITH, Nature, i62 (1948) 88. 4 R. JEENER ET P. LEMOINE, .4rch. intern, physiol., 60 (1952) 547. 5 R. JEENER ET P. LEMOINE, Nature, 171 (1953) 935. 6 F. GROS ET B. RYBAK, Helv. Chim. ,4cta, 31 (1948) 1855. Re~u le 28 mars 1955

Groupes des acides nucléiques intervenant dans la formation de complexes avec la streptomicine et spécificité de la réaction

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Page 1: Groupes des acides nucléiques intervenant dans la formation de complexes avec la streptomicine et spécificité de la réaction

VOL. 17 (1955) SHORT COMMUNICATIONS, PRELIMINARY NOTES Z57

Groupes des acides nucl6iques intervenant dans la formation de complexes avec la streptomicine et sp6cificit6 de la r6action

La formation de conlplexes insolubles entre les acides ilucldiques et la s t reptomycine, signalde par COHEN 1, a ~t4 appliqude 5. diverses reprises en vue de la purification des nucldoprot6ides du liquide surnageant d 'u l t racentr i fugat ion de diff6rents tissus.

Ii faut cependant r emarquer que la s t rep tomycine est capable de former des complexes avec d ' au t res substances. Rappelons qu 'en 1948 , LISON 2 a montr6 que les esters sulfuriques de poly- saccharides sont prdcipit6s par la s t reptomycine.

Nous avons pu nlettre en dvidence que cet ant ibiot ique peut prdcipiter dgalement le po lymdtaphospha te de sodium, deux phosphoprotdines: la casdine et la livdtine, ainsi que le polypept ide g lu tamique synth6tisd par Bacillus subtilis. Par contre, nous avons constatd que la s t reptomycine ne pr6cipite pas des protdines for- t ement acides, telles que les antig6nes solubles associds aux virus SO4 = 82.5 de la mosaique jaune du navel a e t de la mosaique du tabac 4,5 qui P O 4 H - 82.5 doivent vra isemblablement leur poin t iso61ectrique ex t r6mement AsO 4H = 8o bas (respectivement aux p H 3.8 et 3.4) 5. la prddominance des H C - - C O O - 63 acides aminds dicarboxyliques dans leur molecule. 11

Ainsi, la s t rep tomycine semble capable de pr6cipiter les H - - C - - C O O - polyphosphates , les polysulfates, mais certains aeides polycar- CO0 63 tloxyliques seulement. ]

l ,a seconde part ie de ce travail semble pouvoi r nous fournir COO- une donnde suppldmentaire sur les condit ions de pr6eipitation COO- 6 3 des acides polycarboxyliques, ainsi que sur la na ture des groupes I des acides nucl6iques qui in terviennent dans la formation de CH2 conlplexes avec la s t reptomycine. ]

On salt que la format ion de complexes insolubles entre la COO- s t reptomycine et les acides ribonucldiques est inhibde par la COO- 55 prdsence de sels 6. L'efficacitd de l ' inhibition varie for tement d 'une ] substance 5. l 'autre. Le Tableau I rend compte du pourcentage CH2 d ' inhibi t ion de la pr6cipitat ion d'acide ribonucl6ique (concentra-

o o ~ / CH2 lion . -5 "o) par la s t reptomycine, en pr4sence de diff6rents ions en concentrat ion 0.02 molaire; le r appor t de masse acide r ibonu- ] cldique/streptonlycine est de t/2o. COO

Tableau I mont re que les anions bivalents sont les plus H C---COO 54 inhibiteurs et d ' a u t a n t plus que les deux charges ndgatives sont ][ plus rapprochdes l 'une de l 'autre. La n6cessit6 de la proximitd de - O O C - - C H deux charges ndgatives fourni t une explication du fail que la CI- 33 s t reptomycine le peptide polyglutamique et non les prot6ines CH3- - COO zo acides testdes. Dans le dernier cas, les groupes COO sont cer- borate o t a inement plus 6cart6s les uns des autres, du fait qu 'en t re les saccharose o r6sidus glutamyle sont intercalds d 'au t res acides amin6s et que la chaine polypept idique est vra isemblablement spiralde.

T A B L E A U I

Nature de l'inhibiteur O,o d'inhibition (en solution M,5o)

La s t reptomycine ne prdcipite que des macroInol6cuies: les mononucl6otides, et mSme les poly- nucldotides 5̀ faible poids mol6culaire, ne sont pas prdcipitds. I1 en est de m~me de tous les anions inhibiteurs mentionnds ci-dessus.

En rdsum6, la s t rep tomycine peut doric prdcipiter routes les macromol6cules 5̀ groupes ionisables prdsentant deux charges n6gatives suff isamment rapproch6es, comme c 'est le cas pour SO4 =, PO4H- et deux COO- contigus, l , ' insolubilit6 du complexe est due, vraisemblablement , 5̀ la format ion de rdseaux entre les deux types de moldcules polyvalentes en pr6sence, conform6ment 5̀ l 'hypoth6se d e C O H E N 1 .

M. DE DEKEN-GRENSON Laboratoire de PhysioIogie animale, Universitd de Bruxelles (Belgique)

1 S. S. COHEN', J . Biol. Chem., 168 (1947) 511. 1,. LIsoN, Compl. rend. soc. biol., 142 (1948) 1441.

3 R. MARKHAM, R. E. F. MATTHEWS ET K. M. SMITH, Nature, i62 (1948) 88. 4 R. JEENER ET P. LEMOINE, .4rch. intern, physiol., 60 ( 1 9 5 2 ) 547. 5 R. JEENER ET P. LEMOINE, Nature, 171 (1953) 935. 6 F. GROS ET B. RYBAK, Helv. Chim. ,4cta, 31 (1948) 1855.

Re~u le 28 mars 1955