Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa

La bactérie ,

sa sensibilité aux antibiotiques ,

son antibiogramme.

INTRODUCTION

• Bactérie de l’environnement

• Pathogène opportuniste

• Infections graves

• Résistance aux antibiotiques

La bactérieLa bactérie

1882 Charles GESSARD

En latin : puons =pus cyaneus = bleu foncé

Espèce – type du genre PSEUDOMONAS

Bactérie ubiquitaire

Saprophyte environnement humide : eau et sol

Pathogène opportuniste chez les malades immunodéficients

Facteurs de pathogénicité+++ Résistance +++ (ATB et ATS)

Infections nosocomiales (8 à 10% selon ACAR) et communautaires

Habitat Réservoirs

EAUX : Rivière , eaux usées , boues activées , eau de piscine,

eaux minérales , eaux thermales, eaux de boisson .

VEGETAUX : Légumes , Salades , fruits , fleurs et aliments

ENVIRONNEMENT HOSPITALIER :

Matériel chirurgical ( humidificateur , barbotteur , KT , endoscopes…) ,

Solutions antiseptiques (Eosine aqueuse)

Solutions de nettoyage des lentilles de contact

Médicaments et produits cosmétiques

Lieux humides , lavabos , baignoires , cuvettes , éponges , porte-savon…

HOMME :

Expectorations, urines , pus ORL , pus articulaires , PV , liquide pleural , selles ,

zones humides (périné , creux axillaire ) : Colonisation

Pouvoir pathogène : Infections :• Infections oculaires: kératites, abcès de cornée, endophtalmies

• Infections cutanées bénignes ou graves : Ectyma Gangrenosum, infections de plaies chirurgicales, infections chez les brûlés

• Infections respiratoires (mucoviscidose)

• Otites– externes aiguës ou malignes– moyennes chroniques

Colonisation• Origine endogène ++– muqueuses pharyngées et intestinales colonisées• adhésion et multiplication• Transmission– croisée manuportée– solution aqueuse ou équipement contaminé

Mortalité des IN : Très élevée

– jusqu’à 50-70 % au cours des pneumopathies

– jusqu’à 30-50 % au cours des septicémies

P. aeruginosa : CARACTERES BACTERIOLOGIQUES

MORPHOLOGIE :

petit bacille fin

1.5-3µ x 0.5-0.8 µ

Gram – très mobile (vol de moucheron) en AEROBIOSE

asporulé ,

SLIME : Couche mucoïde donnant un aspect muqueux à la

culture et une plus grande virulence ( s’oppose à la phagocytose)

Caractères morphologiques

Caractères culturaux

Colonies ‘la ’

Colonies ‘M’

Colonies ‘sm’

Culture facile sur milieu nutritif simple

Bactérie aérobie stricte

Culture entre 8°C et 41°C

Production de pyocyanine et de Pyoverdine

Dégage une odeur arome de Jasmin par

production

d’orthoamino-acétophénone

Caractères biochimiques

Oxydase + , Catalase + , réduction des nitrates jusqu’au stade N2

Métabolisme respiratoire (MEVAG :Oxydatif)

TSI : Lactose - , Saccharose - , H2S –, Gaz- (pente gris métallisée)

Citrate +, ADH + , Acetamide +

Sa sensibilité aux Sa sensibilité aux antibiotiquesantibiotiques

Résistances Naturelles :

• Pénicillines G, A et M• C1G, C2G et certaines C3G• Cotrimoxazole• Macrolides, Cyclines• Chloramphénicol• Quinolones de première génération• Kanamycine• Rifampicine, glycopeptides, ac. fusidique

Molécules actives :• Carboxypenicillines : ticarcilline• Ureidopenicillines : Piperacilline• Ticarcilline+Acide clavulanique• piperacilline +Tazobactam• Monobactames : Aztreonam• Carbapénèmes : Imipénème , Méropénème• ceftazidime, cefsulodine, céfépime, cefpirome

• Aminosides : gentamicine, tobramycine, amikacine, nétilmicine,isépamicine

• Fluoroquinolones : Ciprofloxacine

• colimycine • fosfomycine

Résistance naturelle

1. imperméabilité2. Systèmes d’efflux actifs3. Hydrolyse enzymatique( ex:céphalosporinase chromosomique bas niveau)

Mécanismes de résistance de P. aeruginosa

Résistance acquise

1. Modification de la perméabilité2. Hyper expression efflux actif3. modification de la cible4. Hydrolyse enzymatique

ATB

++++

Inactivation enzymatique (naturelle ou acquise)

Efflux actifs (naturels)

hyper expression (acquise)

Imperméabilité

(naturelle ou acquise)

Modification de la cible (acquise)

Cellule bactérienne

Mécanismes de R. acquise Mécanismes de R. acquise aux aux β-Lactaminesβ-Lactamines

ENZYMATIQUES:

-Penicillinases transférables (PSE , OXA ,TEM)

-Cephalosporinases déreprimées

-BLSE (PER-1 , OXA , TEM, SHV)

-Imipénèmase (IMP-1)

NON ENZYMATIQUES :

- perte de la porine D2 (modification de la perméabilité)

- Hyper expression d’efflux actif

- modification structurale du LPS (modification de perméabilité)

- modification d’affinité des PLP (modification de cible)

Résistance aux AminosidesRésistance aux Aminosides

RESISTANCE

NATURELLE ACQUISE

Kanamycine - Non enzymatique

- Enzymatique

Résistance non enzymatique :

• Inhibition du transport actif (perméabilité) +

+

• Efflux (Mex XY-OprM) +++

• Mutation ribosomale (cible) +

Résistance enzymatique +++ (AAT , ANT , autres enzymes )

Associations fréquentes

Mécanismes de résistance acquise

• Diminution d’affinité de la cible

– DNA gyrase- topoisomérase II, sous-unités A (gyrA)

– topo-isomérase IV (parC)

• Imperméabilité

– porines (oprF) , LPS

• Hyper expression de divers systèmes d’efflux

• Associations fréquentes

Résistance aux FluoroquinolonesRésistance aux Fluoroquinolones

Son antibiogrammeSon antibiogramme

Technique : Méthode de diffusion en géloseFiche technique n°1 : Bactéries non exigeantes (fascicule: Standardisation

de l’antibiogramme en Médecine humaine à l’échelle nationale selon les recommandations de l’OMS 4ème édition 2005)

Inoculum : 0,5 MF

Ensemencement de 2 boîtes rondes (90mm ø) de milieu Mueller-Hinton

CIP

GM

AN

FOS

TOBCAZ

IMP

PIPTIC

ATM

TCC

24mm

Liste des antibiotiques à tester

Ticarcilline (TIC)

Ticarcilline + Acide Clavulanique (TCC)

Pipéracilline (PIP)

Ceftazidime (CAZ)

Aztreonam (AZM)

Imipeneme (IMP)

Gentamicine (GM)

Tobramycine (TOB)

Amikacine (AN)

Ciprofloxacine (CIP)

Fosfomycine (FOS)

Contrôle de qualité :

souche Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Lecture :

Mesurer avec précision à l’aide d’un pied à coulisse , les diamètres des zones d’inhibition , à l’extérieur de la boîte fermée.

Comparer ces diamètres aux valeurs critiques de la table de lecture n°10 page 100 du fascicule de Standardisation .

Classer la bactérie dans l’une des catégories S , I , R

Lecture interprétative : nécessite de connaître les mécanismes de résistances de Pseudomonas aeruginosa .

Lecture et interprétation

Molécules à tester

BêtalactaminesBêtalactamines

Phénotype

Sauvage

TIC S

PIP S

TCC S

CAZ S

ATM S

IPM S

Phénotype sauvage

Présence d’une céphalosporinase chromosomique inductible Amp C

(Antagonisme entre TIC : substrat

et l’inducteur IPM)antagonis

me

Phénotype sauvage :

Céphalosporinase chromosomique inductible :

Substrats : TIC , CAZ

Inducteur : IMP

Expression d’une pénicillinase

Haut niveau

Résistance à la TIC et à la PIP

Restauration par l’Acide Clavulanique de l’activité de la TIC

Pseudomonas aeruginosa PSE-1

Pseudomonas aeruginosa PSE-3

Expression d’une Pénicillinase bas niveau:

•Résistance à la TIC et sensibilité à la PIP

•Restauration de l’activité de la TIC par l’acide clavulanique

Pseudomonas aeruginosa OXA-4

Expression d’une autre Pénicillinase bas niveau:

•Résistance à la TIC et à la PIP

•Restauration faible de l’activité de la TIC par l’acide clavulanique

Phénotype : Céphalosporinase déréprimée

Phénotype Céphalosporinase déréprimée :

Hyperproduction de la Céphalosporinase chromosomique (mutation)

Phénotype BLSE

BLSE : Image de Synergie entre TCC (Ticarcilline+Acide Clavulanique) et Aztreonam (ou Ceftazidime)

Phénotype BLSE

Altération Porine D2

Altération Porine D2

Phénotype :

Carbapénèmase VIM-2

Phénotype hyper expression d’efflux actif

Autres moléculesAutres molécules

Phénotype

Sauvage

GM S

TOB S

AMK S

Antibiotiques 2005 (n=2228)

Ticarcilline 17%

Pipéracilline 17,2%

Ceftazidime 13,2%

Imipenem 10,7%

Gentamicine 20,3%

Tobramycine 17%

Amikacine 9,2%

Pefloxacine 31,7%

Ofloxacine 21,6%

Ciprofloxacine 15%

Données de résistance (R+I) aux antibiotiques de P.aeruginosa pour l’année 2005 -Réseau AARN

CONCLUSION

Bactérie saprophyte donc naturellement multi résistante

Nombreux mécanismes de résistance acquise avec fréquente

intrication de plusieurs mécanismes

Difficultés thérapeutiques car

Multi résistance+terrain