RAPPORT GLOBAL EVALUATION EXTERNE DE LA QUALITE … · FROTTIS H/6517: Leucémie monoblastique aiguë Le frottis H/6517 a été envoyé avec les renseignements cliniques et l’hémogramme

ISSN 0778-8371 ISP Rue J. Wytsman, 14 B-1050 BRUXELLES SERVICE PUBLIC FEDERAL, SANTE PUBLIQUE, SECURITE DE LA CHAÎNE

ALIMENTAIRE ET ENVIRONNEMENT COMMISSION DE BIOLOGIE CLINIQUE

SERVICE DES LABORATOIRES DE BIOLOGIE CLINIQUE COMITE DES EXPERTS

RAPPORT GLOBAL

EVALUATION EXTERNE DE LA QUALITE DES ANALYSES EN BIOLOGIE CLINIQUE

HEMATOLOGIE/IMMUNO-HEMATOLOGIE/HEMOSTASE

ENQUETE n° 03/2005 ISP/05/03/Hemato. 57 Ce rapport ne peut être reproduit, publié ou distribué sans l’accord de l’ISP.

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FROTTIS H/6517: Leucémie monoblastique aiguë

Le frottis H/6517 a été envoyé avec les renseignements cliniques et l’hémogramme suivants:

Ce patient de 67 ans a consulté il y a un an pour bronchopneumonie. On lui a découvert à cette occasion une spénomégalie à 5 cm sous le rebord costal. Actuellement, il se plaint de fatigue et on note une splénomégalie majorée (12 cm sous le rebord costal) ainsi qu’une hépatomégalie.

GR: 4.28 x 1012/lHGB: 133 g/lHCT: 0.391 l/lVCM: 91.3 flGB: 65.4 x 109/lThrombocytes: 36 x 109/lRéticulocytose: 2.5 % RBCRéticulocytose absolue: 107 x 109/l

Histoire clinique complémentaireEn novembre 2004, le diagnostic d’une leucémie myélomonocytaire chronique est posé chez ce patient. Il est ensuite suivi sans qu’aucun traitement ne soit instauré jusqu’ en août 2005. Au moment du prélèvement des frottis de l’EEQ, il se plaint d’une fatigue modérée accentuée depuis 2 à 3 semaines, accompagnée de transpirations abondantes et une gêne au niveau de l’hypochondre gauche et du flanc gauche. Par ailleurs, le patient est connu pour une hernie hiatale.Il présente une altération modérée de l’état général, une splénomégalie (12 cm sous le rebord costal) ainsi qu’une hépatomégalie (2 cm sous le rebord costal).Il est traité selon le protocole HOVON et la splénomégalie disparaît. L’évolution ultérieure montre le développement d’une pneumopathie bilatérale, des complications hémorragiques, une augmentation de la bilirubine directe et une insuffisance rénale multifactorielle. Il est traité par antibiotiques, hémodialyse et reçoit de multiples transfusions.

Frottis sanguinLe frottis thrombopénique se caractérise par la présence de nombreux grands blastes au cytoplasme ample, basophile, finement granulé, possédant parfois de larges vacuoles et au noyau parfois irrégulier pourvu d’une chromatine fine et d’un gros nucléole. Présence de quelques promyélocytes, myélocytes, métamyélocytes et érythroblastes.

Rapport global hématologie 2005/3. Date : 13/04/2006 1/80

Myélogramme/biopsie osseuseMoelle très riche envahie par des blastes de grande taille au rapport N/C faible, au cytoplasme plucheux, finement granulé et possédant parfois de larges vacuoles. Le noyau est souvent lobé, contourné. Ils ont une allure monocytoïde. Les mégacaryocytes sont présents et dysplasiques (hyperlobés – monolobés…). La lignée rouge est mégaloblastique.Il y a un excès de fer libre dans les macrophages. Les sidéroblastes sont présents de type I et II et très rares type III (sidéroblastes en couronne).Cytochimie : La peroxydase est positive à des degrés divers dans la majorité des blastes. L’α-naphtyl acétate estérase est positive dans la plupart des blastes et la chloroacétate estérase est positive dans la population granulocytaire résiduelle et dans quelques blastes.L’analyse par cytométrie en flux montre que les blastes expriment les CD45 (faible), HLADR, CD56, CD13 (faible), CD33, CD15, CD66 (faible), CD10 (faible), CDw65, CD71, CD38 et CD11a. La cMPO est positive.L’étude du contenu en ADN des cellules met en évidence une population aneuploïde d’index 1.11.

Cytogénétique/biologie moléculaireNormal

ConclusionLeucémie monoblastique aiguë

Résultats des participantsFormuleQuelques participants ont compté les monoblastes dans le groupe ‘autres cellules’ ; d’autres participants ont inclus les promonocytes dans le groupe ‘blastes’. Les 2 groupes ont par conséquent été rassemblés pour le traitement statistique.Le pourcentage médian de blastes et/ou autres cellules de tous les participants est de 39% (CV: 26.6%). Le pourcentage médian de blastes et/ou autres cellules des experts est de 29% (CV: 2.5%, n: 6). Onze participants (5.1%) ont mis moins que 18% de blastes et/ou autres cellules en évidence, ce qui est considéré comme inacceptable.


L’histogramme ci-dessous montre la distribution du pourcentage des blastes et/ou autres cellules :

0

10

20

30

40

50

60

70

Nom

bre

-10 0 10 20 30 40 50 60 70 80% blastes et/ou autres cellules

Diagnostics évoqués215 laboratoires ont participé à cette enquête et 214 participants ont proposé un diagnostic.199 participants (92.6%) proposent en premier lieu le diagnostic d’hémopathie maligne aiguë, 10 participants (4.7%) le diagnostic de syndrome myélodysplasique et 4 participants (1.9%) le diagnostic de syndrome myéloprolifératif chronique. Un participant propose en premier lieu le diagnostic de syndrome lymphoprolifératif chronique. 121 participants (56.3%) suggèrent le diagnostic de leucémie monoblastique (monocytaire) aiguë, 17 participants (7.9%) le diagnostic de leucémie myélomonocytaire, 6 participants (2.8%) le diagnostic de leucémie myélomonocytaire chronique et 6 participants (2.8%) le diagnostic de leucémie myélomonocytaire chronique en transformation.

Seul le diagnostic d’hémopathie maligne aiguë est considéré comme acceptable.

85.8% des laboratoires belges ont renvoyé les résultats au moyen de la base électronique (toolkit).


FROTTIS DIGITAUX H/6517 DIGIT et H/6597 DIGIT

H/6517 DIGIT: Leucémie monoblastique aiguëRésultats des participantsFormule sanguine190 participants (88.4%) ont fourni des résultats aussi bien pour le frottis digital que pour le frottis classique. Pour le frottis classique, le pourcentage de blastes et/ou autres cellules est légèrement plus bas (39% vs 46%, Wilcoxon : p < 0.0001). La dispersion de ce paramètre est moins grande pour le frottis digital (16.9% vs 23.8%). Le tableau suivant donne un aperçu des résultats:

H/6517 H/6517 DIGITMédian

eCV,% N Médian

eCV,% N p∗

Polynucléaires neutrophiles

24 32.4 186 18.2 32.7 188 <0.0001

Polynucléaires à noyau non segmenté

7 59.6 140 7.5 49.4 167 0.02

Polynucléaires neutrophiles + à noyau non segmenté

29 15.3 190 26 13.4 190 <0.0001

Polynucléaires éosinophiles

2 72.3 175 2 22.2 188 0.006

Polynucléaires basophiles

1 37.1 22 0.5 74.1 10 0.45

Lymphocytes 9 41.2 181 7 23.3 180 <0.0001Lymphocytes réactionnels

2 38.0 12 1 107.5 27 0.45

Total lymphocytes 9.2 39.3 190 7.7 14.4 189 <0.0001Monocytes 11 67.4 182 12 46.9 187 0.10Promyélocytes 1 148.3 75 1.4 119.1 80 0.61Myélocytes neutrophiles

3.8 71.7 168 2 111.2 157 <0.0001

Myélocytes éosinophiles

3 2 120.5 4

Métamyélocytes neutrophiles

4 74.1 168 3 61.2 174 <0.0001

Métamyélocytes éosinophiles

1 55.6 6 3

Blastes 35.5 34.0 172 43 25.5 171 <0.0001Autres cellules 16.1 116.3 60 24 120.1 67 <0.0001Blastes et/ouAutre cellules

39 23.8 190 46 16.9 190 <0.0001

*Test de Wilcoxon


Diagnostics proposésLa plupart des participants ont proposé le même diagnostic pour les deux frottis. Quatre laboratoires n’évoquent pas de diagnostic pour le frottis digital. Un participant propose le diagnostic de syndrome myéloprolifératif chronique pour le frottis classique et le diagnostic d’hémopathie maligne aiguë pour le frottis digital. Un autre participant propose le diagnostic d’hémopathie maligne aiguë pour le frottis classique et le diagnostic de syndrome myéloprolifératif chronique pour le frottis digital.

H/6597 DIGIT : Frottis dans les limites de la normaleRenseignements cliniques et hémogramme: Bilan sanguin chez une jeune dame de 26 ans dans le cadre d’une visite à la médecine du travail.

GR: 4.20 x 1012/lHGB: 136 g/lHCT: 0.394 l/lVCM : 93.8 flGB: 4.7 x 109/lThrombocytes: 205 x 109/l

Résultats des participantsFormule sanguineLe pourcentage médian de polynucléaires neutrophiles est de 45.0% avec un CV de 1.6%, le pourcentage médian de lymphocytes de 44.0% avec un CV de 3.4% et le pourcentage médian de monocytes de 8.0% avec un CV de 3.7%. Diagnostics proposés189 laboratoires (87.9%) ont participé à cette enquête et 181 participants ont proposé un diagnostic.176 participants (93.1%) considèrent ce frottis comme normal.Trois participants émettent en premier lieu le diagnostic de processus infectieux, inflammatoire ou toxique, un participant le diagnostic d’hémopathie maligne aiguë et un autre participant le diagnostic de syndrome lymphoprolifératif chronique.

Nous remercions le Dr. Chatelain (Cliniques universitaires UCL de Mont-Godinne) de nous avoir procuré le sang pour réaliser ce frottis et de nous avoir donné les renseignements cliniques nécessaires à l’enquête ainsi que pour le développement du CD-Rom avec le frottis virtuel.


H/6517

Mode de coloration May-Grünwald-Giemsa Wright Diff-Quick Autre 201 5 3 6

Formule sanguine Médiane DS CV, % Nb de labosPolynucléaires neutrophiles 24.0 7.8 32.4 210 Polynucléaires à noyau non segmenté 7.0 4.4 63.5 155 Polynucléaires neutrophiles + à noyau non segmenté 29.0 4.4 15.3 215

Polynucléaires éosinophiles 2.0 1.1 55.6 197 Polynucléaires basophiles 1.0 0.4 37.1 23 Lymphocytes 9.0 3.7 41.2 202 Lymphocytes réactionnels 2.0 0.7 37.1 14 Total lymphocytes 9.0 3.9 43.2 215 Monocytes 11.0 7.4 67.4 204 Promyélocytes 1.5 1.5 98.8 88 Myélocytes neutrophiles 4.0 3.0 74.1 191 Myélocytes éosinophiles 3 Métamyélocytes neutrophiles 4.0 2.6 64.9 190 Métamyélocytes éosinophiles 1.0 0.4 37.1 7 Blastes 35.5 12.8 36.2 196Autres cellules 15.0 19.3 128.5 67 Erythroblastes (/100 GB) 2.0 0.7 37.1 181


Anomalies morphologiques significatives des hématies Néant + ++ +++

Anomalies de taille Anisocytose 49 107 54 5Microcytose 208 6 1 Macrocytose 198 14 3 Anomalies de formePoikilocytose 91 85 37 2Echinocytes 186 25 3 1Acanthocytes 189 20 6 Annulocytes 204 9 2 Schizocytes ('fragmentocytes') 137 74 4 Dacryocytes ('teardrop-cells') 196 18 1 Drépanocytes ('sickle-cells') 214 1 Cellules-cibles ('target-cells') 196 19 Sphérocytes 205 10 Ovalocytes - elliptocytes 205 9 1 Stomatocytes 213 2 Anomalies de colorationHypochromie 189 22 4 Polychromatophilie 108 85 22 InclusionsCorps de Howell-Jolly 212 3 Ponctuations basophiles/Corps de Pappenheimer 120 87 8

Parasites intra-érythrocytaires 214 1 Anomalies de distributionPrésence de rouleaux 212 3 Présence d'agglutinats 214 1 Double population (taille) 213 2 Double population (coloration) 211 4


Présence d'anomalies significatives des leucocytes pour le diagnostic Néant + ++ +++

Hypersegmentation des neutrophiles 215 Granulations toxiques 211 2 2 Corps de Döhle 214 1 Hypogranulation des polynucléaires neutrophiles 168 30 12 5

Anomalies nucléaires des neutrophiles 197 13 4 1Présence de bâtonnets d'Auer 211 4 (pseudo)-Pelger-Huet 207 8 Masses de Gumprecht 207 6 1 1Lymphocytes à chromatine en mottes 215 Cellules (lympho-)plasmocytaires 215 Tricholeucocytes ('hairy cells') 215 Cellules de Sézary 215 Grands lymphocytes granuleux 215 Autres cellules lymphomateuses 214 1 Lymphocytes réactionnels 213 1 1 Autres leucocytes 191 1 6 17

Anomalies des thrombocytes Néant + ++ +++ Frottis thrombopénique 49 14 73 79Frottis thrombocytémique 212 1 2Aggrégats thrombocytaires 215 Macrothrombocytes 153 53 9 Dysplasie thrombocytaire(anomalie des granulations) 204 7 4

Autres anomalies Néant + ++ +++ Hyperprotéinémie plasmatique (coloration de fond) 215

Parasites extra-érythrocytaires 215


Orientation diagnostique Diagnostic (premier choix) Nb de labos Hémopathie maligne aiguë 199Syndrome myélodysplasique 10Syndrome myéloprolifératif chronique 4Syndrome lymphoprolifératif chronique 1Pas de réponse 1Diagnostic (deuxième choix) Nb de labos Pas de réponse 185Syndrome myélodysplasique 12Syndrome myéloprolifératif chronique 10Hémopathie maligne aiguë 7Monocytose 1Diagnostic (troisième choix) Nb de labos Pas de réponse 208Syndrome myéloprolifératif chronique 2Hémopathie maligne aiguë 2Syndrome myélodysplasique 2Pathologie de la lignée plaquettaire 1


H/6517 DIGIT

Formule sanguine Médiane DS CV, % Nb de labosPolynucléaires neutrophiles 18.1 5.9 32.9 188 Polynucléaires à noyau non segmenté 7.5 3.7 49.4 167 Polynucléaires neutrophiles + à noyau non segmenté 26.0 3.5 13.4 190

Polynucléaires éosinophiles 2.0 0.4 22.2 188 Polynucléaires basophiles 0.5 0.4 74.1 10 Lymphocytes 7.0 1.6 23.3 180 Lymphocytes réactionnels 1.0 1.1 107.5 27 Total lymphocytes 7.7 1.1 14.4 189 Monocytes 12.0 5.7 47.9 187 Promyélocytes 1.4 1.9 132.4 80 Myélocytes neutrophiles 2.0 2.2 111.2 156 Myélocytes éosinophiles 2.0 2.4 120.5 4 Métamyélocytes neutrophiles 3.0 1.9 61.8 174 Métamyélocytes éosinophiles 3 Blastes 43.0 11.0 25.5 171 Autres cellules 22.8 25.9 113.8 66 Erythroblastes (/100 GB) 1.0 0.4 37.1 150



Anomalies de taille Anisocytose 42 89 53 6Microcytose 181 7 2 Macrocytose 177 11 2 Anomalies de forme Poikilocytose 66 80 40 4Echinocytes 159 25 4 2Acanthocytes 162 21 7 Annulocytes 184 4 1 1Schizocytes ('fragmentocytes') 101 83 6 Dacryocytes ('teardrop-cells') 170 20 Drépanocytes ('sickle-cells') 188 2 Cellules-cibles ('target-cells') 168 21 1 Sphérocytes 185 5 Ovalocytes - elliptocytes 179 11 Stomatocytes 188 2 Anomalies de coloration Hypochromie 159 22 9 Polychromatophilie 107 64 19 Inclusions Corps de Howell-Jolly 188 2 Ponctuations basophiles/Corps de Pappenheimer 115 68 6 1

Parasites intra-érythrocytaires 190 Anomalies de distribution Présence de rouleaux 187 2 1 Présence d'agglutinats 190 Double population (taille) 189 1 Double population (coloration) 186 4



Hypersegmentation des neutrophiles 189 1 Granulations toxiques 187 3 Corps de Döhle 189 1 Hypogranulation des polynucléaires neutrophiles 172 11 6 1

Anomalies nucléaires des neutrophiles 173 14 3 Présence de bâtonnets d'Auer 186 4 (pseudo)-Pelger-Huet 188 2 Masses de Gumprecht 184 6 Lymphocytes à chromatine en mottes 190 Cellules (lympho-)plasmocytaires 190 Tricholeucocytes ('hairy cells') 190 Cellules de Sézary 190 Grands lymphocytes granuleux 189 1 Autres cellules lymphomateuses 188 1 1 Lymphocytes réactionnels 189 1 Autres leucocytes 171 4 15

Anomalies des thrombocytes Néant + ++ +++ Frottis thrombopénique 44 14 64 68Frottis thrombocytémique 190 Aggrégats thrombocytaires 190 Macrothrombocytes 152 33 5 Dysplasie thrombocytaire(anomalie des granulations) 181 8 1

Autres anomalies Néant + ++ +++ Hyperprotéinémie plasmatique (coloration de fond) 190



Orientation diagnostique Diagnostic (premier choix) Nb de labos Hémopathie maligne aiguë 175Pas de réponse 5Syndrome myélodysplasique 5Syndrome myéloprolifératif chronique 3Syndrome lymphoprolifératif chronique 2Diagnostic (deuxième choix) Nb de labos Pas de réponse 164Syndrome myéloprolifératif chronique 10Syndrome myélodysplasique 9Hémopathie maligne aiguë 5Monocytose 1Syndrome lymphoprolifératif chronique 1Diagnostic (troisième choix) Nb de labos Pas de réponse 184Syndrome myélodysplasique 2Hémopathie maligne aiguë 2Pathologie de la lignée plaquettaire 1Syndrome myéloprolifératif chronique 1


H/6597 DIGIT

Formule sanguine Médiane DS CV, % Nb de labosPolynucléaires neutrophiles 45.0 1.5 3.3 181 Polynucléaires à noyau non segmenté 3.0 2.0 66.7 90

Polynucléaires neutrophiles + à noyau non segmenté 45.0 0.7 1.6 189

Polynucléaires éosinophiles 2.0 0.0 0.0 187 Polynucléaires basophiles 1 Lymphocytes 44.0 1.5 3.4 177 Lymphocytes réactionnels 2.0 1.5 74.1 57 Total lymphocytes 45.0 0.7 1.6 189 Monocytes 8.0 0.3 3.7 188 Myélocytes neutrophiles 2 Métamyélocytes neutrophiles 1.0 0.7 66.7 5 Métamyélocytes éosinophiles 1 Blastes 1 Autres cellules 2 Erythroblastes (/100 GB) 3



Anomalies de taille Anisocytose 161 26 2 Microcytose 188 1 Macrocytose 188 1 Anomalies de forme Poikilocytose 185 4 Echinocytes 189 Acanthocytes 188 1 Annulocytes 188 1 Schizocytes ('fragmentocytes') 188 1 Dacryocytes ('teardrop-cells') 189 Drépanocytes ('sickle-cells') 189 Cellules-cibles ('target-cells') 187 2 Sphérocytes 188 1 Ovalocytes - elliptocytes 186 3 Stomatocytes 183 5 1 Anomalies de coloration Hypochromie 188 1 Polychromatophilie 187 2 Inclusions Corps de Howell-Jolly 189 Ponctuations basophiles/Corps de Pappenheimer 189

Parasites intra-érythrocytaires 189 Anomalies de distribution Présence de rouleaux 189 Présence d'agglutinats 189 Double population (taille) 189 Double population (coloration) 189



Hypersegmentation des neutrophiles 184 4 1 Granulations toxiques 186 3 Corps de Döhle 189 Hypogranulation des polynucléaires neutrophiles 188 1

Anomalies nucléaires des neutrophiles 188 1 Présence de bâtonnets d'Auer 189 (pseudo)-Pelger-Huet 188 1 Masses de Gumprecht 189 Lymphocytes à chromatine en mottes 187 2 Cellules (lympho-)plasmocytaires 188 1 Tricholeucocytes ('hairy cells') 189 Cellules de Sézary 189 Grands lymphocytes granuleux 179 10 Autres cellules lymphomateuses 189 Lymphocytes réactionnels 186 3 Autres leucocytes 189

Anomalies des thrombocytes néant + ++ +++ Frottis thrombopénique 188 1Frottis thrombocytémique 189 Aggrégats thrombocytaires 189 Macrothrombocytes 188 1 Dysplasie thrombocytaire(anomalie des granulations) 189

Autres anomalies néant + ++ +++ Hyperprotéinémie plasmatique (coloration de fond) 189



Orientation diagnostique Diagnostic (premier choix) Nb de labos Dans les limites de la normale, ne nécessitant pas d'investigations complémentaires 176

Pas de réponse 8Processus infectieux, inflammatoire ou toxique 3Hémopathie maligne aiguë 1Syndrome lymphoprolifératif chronique 1Diagnostic (deuxième choix) Nb de labos Pas de réponse 181Processus infectieux, inflammatoire ou toxique 5Dans les limites de la normale, ne nécessitant pas d'investigations complémentaires 3

Diagnostic (troisième choix) Nb de labos Pas de réponse 187Dans les limites de la normale, ne nécessitant pas d'investigations complémentaires 2


HEMATOLOGIE: NUMERATION

Chaque participant a reçu deux échantillons de sang frais (H/6550, H/6551) prélevés sur EDTA. La distribution des résultats obtenus pour le dosage de l’hémoglobine confirme l’homogénéité des deux échantillons (CV’s respectivement de 1.6% et 1.7%).

81.5% des participants ont effectué les analyses entre 24 et 36 heures après le prélèvement. 98.7% des laboratoires ont effectué les analyses dans les 3 jours. Le traitement statistique a uniquement été réalisé à partir des résultats obtenus sur les échantillons analysés les jours 1 et 2 (le jour 0 étant le jour de l’envoi). Tous les autres résultats ne sont pas pris en compte pour l’évaluation statistique.

86.1% des laboratoires belges ont renvoyé les résultats EEQ en hématologie au moyen de la base électronique (toolkit).

Les résultats sont satisfaisants. Pour les réticulocytes, le CV, toutes méthodes confondues, est de 18.8% pour l’échantillon H/6550 et de 21.2% pour l’échantillon H/6551. Les médianes globales sont respectivement de 1.3 et 0.7 % des GR.


DOSAGE DE L’HEMOGLOBINE SUR ANALYSEUR DE GAZ SANGUINS

Une enquête a été organisée afin d’évaluer le dosage de l’hémoglobine sur des analyseurs de gaz sanguins et de comparer les résultats avec ceux obtenus sur les automates d’hématologie classiques.A cet effet, chaque participant a reçu deux échantillons de sang frais (H/6550 Hb, H/6551 Hb) prélevés sur EDTA. Ces 2 échantillons étaient identiques à ceux utilisés pour le dosage de l’hémoglobine dans le contrôle externe classique. Nous avons demandé aux laboratoires de réaliser de préférence les analyses sur les appareils décentralisés les plus couramment utilisés afin de donner des résultats les plus proches possibles de la routine.

97 laboratoratoires ont participé à cette enquête. 51 participants (52.6%) ont effectué le dosage de l’hémoglobine sur 1 analyseur de gaz sanguins, 27 participants (27.8%) sur 2, 16 participants sur 3 (16.5%), 2 participants sur 4 et 1 participant sur 5 analyseurs de gaz sanguins. Par conséquent, 166 analyses ont été réalisées.

Le tableau ci-dessous donne un aperçu de la localisation des analyseurs de gaz sanguins sur lesquels les analyses ont été réalisées:

Localisation N %Laboratoire central 58 34.9Soins intensifs 74 44.6Quartier opératoire 11 6.6Maternité/Néonatologie 8 4.8Service d’urgences 6 3.6Autre ou pas mentionné 9 5.4


Le tableau suivant donne un aperçu des résultats:

Appareil H/6550 Hb H/6551 HbMédiane

g/lCV%

N Médianeg/l

CV%

N

Bayer Rapidlab 845, 855, 865 146 3.0 42 138 2.7 43Bayer Rapidlab 1245, 1265 Bayer Rapidpoint 405

145 1.8 19 138 2.4 19

IL GEM Premier 3000 130 2.9 13 127 5.3 13Radiometer ABL 510, 520, 625 148 4.1 14 135 4.1 14Radiometer ABL 710, 715, 720, 725, 815, 820, 825

143 1.6 35 134 1.7 35

Roche Omni C, Omni S5 145 0.5 7 136 2.5 7Roche Omni 3, 6, 9, S2, S4, S6 145 1.5 21 136 2.2 21Hématologie 142 1.6 217 133 1.7 217

Les mêmes données sont représentées ci-dessous sous forme de ‘boxplot’:

120125130

135140145150155

160165170

Hém

oglo

bin

e g/

l

Bay

er R

apid

lab

845,

855,

865

Bay

er R

apid

lab

1245

,126

5, R

apid

poin

t 40

5

IL G

EM

300

0

Rad

iom

eter

AB

L 51

0,52

0,62

5

Rad

iom

eter

AB

L 71

0,71

5,72

0,72

5,81

5,82

0,82

5

Roc

he

Om

ni

C,

S5

Roc

he

Om

ni

3,6,

9,S

2,S

4,S

6

Hem

atol

ogie

H/6550


120

125

130

135

140

145

150

155

Hém

oglo

bin

e g/

l

Bay

er R

apid

lab

845,

855,

865

Bay

er R

apid

lab

1245

,126

5, R

apid

poin

t 40

5

IL G

EM

300

0

Rad

iom

eter

AB

L 51

0,52

0,62

5

Rad

iom

eter

AB

L 71

0,71

5,72

0,72

5,81

5,82

0,82

5

Roc

he

Om

ni

C,

S5

Roc

he

Om

ni

3,6,

9,S

2,S

4,S

6

Hem

atol

ogie

H/6551

------: médiane globale obtenue avec les automates d’hématologie classiques

Certains participants ont soumis des résultats obtenus avec entre autres Rapidlab 860, Rapidpoint 400, ABL 800,… Cependant, sur ces appareils, l’hémoglobine n’est pas directement mesurée mais calculée. L’appareil IL GEM Premier 3000, quant à lui, calcule l’hémoglobine à partir de l’hématocrite et les résultats obtenus sont plus bas.


Le tableau ci-dessous représente la comparaison des résultats obtenus sur les appareils situés dans le laboratoire central et ceux obtenus sur les appareils délocalisés. Seuls les appareils avec un minimum de 4 utilisateurs dans les 2 sous-groupes ont été repris:

Appareil Laboratoire central DélocaliséMédiane

g/lCV%

N Médianeg/l

CV%

N

H/6550 HbBayer Rapidlab 845, 855, 865 148 3.6 16 146 2.0 23

Radiometer ABL 710, 715, 720, 725, 815, 820, 825

143 1.4 14 143 1.7 20

Roche Omni 3, 6, 9, S2, S4, S6 144 1.5 7 145 1.8 12H/6551 Hb

Bayer Rapidlab 845, 855, 865 138.5 2.8 16 138 2.7 24Radiometer ABL 710, 715, 720, 725, 815, 820, 825

134 1.5 14 134 2.2 20Roche Omni 3, 6, 9, S2, S4, S6 135 1.6 7 136.5 2.6 12

Les mêmes données sont représentées ci-dessous sous forme de ‘boxplot’:

138140142

144146148150152

154156158

Hém

oglo

bin

e g/

l

Bay

er R

apid

lab

845,

855,

865

Labo

Bay

er R

apid

lab

845,

855,

865

Rad

iom

eter

AB

L 71

0,71

5,72

0,72

5,81

5,82

0,82

5 La

bo

Rad

iom

eter

AB

L 71

0,71

5,72

0,72

5,81

5,82

0,82

5

Roc

he

Om

ni

3,6,

9,S

2,S

4,S

6 La

bo

Roc

he

Om

ni

3,6,

9,S

2,S

4,S

6

H/6550


128

130

132

134

136

138

140

142

144

146

Hém

oglo

bin

e g/

l

Bay

er R

apid

lab

845,

855,

865

Labo

Bay

er R

apid

lab

845,

855,

865

Rad

iom

eter

AB

L 71

0,71

5,72

0,72

5,81

5,82

0,82

5 La

bo

Rad

iom

eter

AB

L 71

0,71

5,72

0,72

5,81

5,82

0,82

5

Roc

he

Om

ni

3,6,

9,S

2,S

4,S

6 La

bo

Roc

he

Om

ni

3,6,

9,S

2,S

4,S

6

H/6551

Conclusion:Les résultats obtenus sur certains analyseurs de gaz sanguins présentent un léger biais par rapport à l’appareil d’hématologie classique. Les différences ne sont pas cliniquement significatives. De plus, le dosage classique de l’hémoglobine est réalisé sous héparine, alors que nos échantillons ont été prélevés sur EDTA, ce qui pourrait éventuellement expliquer le biais obtenu.Par contre, la dispersion des données est comparable en hématologie classique et sur les analyseurs de gaz sanguins qu’ils soient situés au laboratoire central ou soient délocalisés.


Globules rouges 1012/l H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N

053 Abbott Cell-Dyn 1200/1300/1600/1700 1055 Abbott Cell-Dyn 3200 4.51 0.10 2.1 12052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 4.47 0.07 1.7 15054 Abbott Cell-Dyn 4000 4.49 0.10 2.2 11040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 3012 ABX Micros 1015 ABX Pentra 4.47 0.04 0.8 4071 Bayer Advia 120 4.52 0.09 2.0 48072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 2110 Beckman Coulter ACT 1130 Beckman Coulter Gen-S 4.44 0.06 1.3 12190 Beckman Coulter JT,T 1150 Beckman Coulter LH 500/750/755 4.42 0.04 1.0 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 4.51 0.18 3.9 6180 Beckman Coulter STKS 2061 Sysmex K 1000 4.41 0.06 1.3 4063 Sysmex K 4500 2064 Sysmex KX 21 2065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 4.53 0.03 0.6 8066 Sysmex SF 3000 4.43 0.10 2.3 15067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 4.51 0.05 1.2 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 4.48 0.07 1.5 13Globalement (toutes méthodes confondues) 4.48 0.09 2.0 217


Globules rouges 1012/l H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N



Globules blancs 109/l H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N

053 Abbott Cell-Dyn 1200/1300/1600/1700 1055 Abbott Cell-Dyn 3200 4.05 0.33 8.2 12052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 4.20 0.32 7.5 15054 Abbott Cell-Dyn 4000 4.51 0.15 3.3 11040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 3012 ABX Micros 1015 ABX Pentra 4.30 0.00 5071 Bayer Advia 120 4.48 0.22 5.0 48072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 2110 Beckman Coulter ACT 1130 Beckman Coulter Gen-S 4.60 0.07 1.6 11190 Beckman Coulter JT,T 1150 Beckman Coulter LH 500/750/755 4.55 0.07 1.6 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 4.50 0.15 3.3 6180 Beckman Coulter STKS 3061 Sysmex K 1000 4.45 0.26 5.8 4063 Sysmex K 4500 2064 Sysmex KX 21 2065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 4.30 0.17 3.9 8066 Sysmex SF 3000 4.20 0.10 2.3 15067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 4.14 0.07 1.8 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 4.30 0.07 1.7 13Globalement (toutes méthodes confondues) 4.30 0.22 5.2 218


Globules blancs 109/l H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N



Hémoglobine g/l H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N

053 Abbott Cell-Dyn 1200/1300/1600/1700 1055 Abbott Cell-Dyn 3200 144 4 2.6 12052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 142 3 1.8 15054 Abbott Cell-Dyn 4000 143 2 1.6 11040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 3012 ABX Micros 1015 ABX Pentra 140 1 0.5 4071 Bayer Advia 120 144 2 1.5 48072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 2110 Beckman Coulter ACT 1130 Beckman Coulter Gen-S 141 1 1.1 11190 Beckman Coulter JT,T 1150 Beckman Coulter LH 500/750/755 141 1 1.1 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 140 5 3.7 6180 Beckman Coulter STKS 3061 Sysmex K 1000 140 3 2.1 4063 Sysmex K 4500 2064 Sysmex KX 21 2065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 141 1 0.5 8066 Sysmex SF 3000 142 2 1.3 15067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 142 2 1.6 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 143 1 0.5 13Globalement (toutes méthodes confondues) 142 2 1.6 217


Hémoglobine g/l H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N



Hématocrite l/l H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N



Hématocrite l/l H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N



VCM fl H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N

053 Abbott Cell-Dyn 1200/1300/1600/1700 1051 Abbott Cell-Dyn 3000 1055 Abbott Cell-Dyn 3200 91.1 1.3 1.4 11052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 91.8 2.0 2.2 15054 Abbott Cell-Dyn 4000 94.8 1.4 1.4 11040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 3012 ABX Micros 1015 ABX Pentra 94.0 1.9 2.0 4071 Bayer Advia 120 93.5 1.9 2.1 48072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 2110 Beckman Coulter ACT 1130 Beckman Coulter Gen-S 92.2 0.6 0.7 11190 Beckman Coulter JT,T 1150 Beckman Coulter LH 500/750/755 92.8 1.4 1.5 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 93.0 1.0 1.0 6180 Beckman Coulter STKS 3061 Sysmex K 1000 93.4 0.9 0.9 4063 Sysmex K 4500 2064 Sysmex KX 21 2065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 91.8 2.0 2.2 8066 Sysmex SF 3000 93.0 0.8 0.8 15067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 92.5 1.0 1.1 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 91.2 1.2 1.3 12Globalement (toutes méthodes confondues) 92.8 1.6 1.7 216


VCM fl H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N

053 Abbott Cell-Dyn 1200/1300/1600/1700 1051 Abbott Cell-Dyn 3000 1055 Abbott Cell-Dyn 3200 96.0 1.4 1.5 11052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 95.0 2.3 2.4 15054 Abbott Cell-Dyn 4000 99.1 1.0 1.0 11040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 3012 ABX Micros 1015 ABX Pentra 96.0 1.5 1.5 4071 Bayer Advia 120 98.3 1.8 1.8 48072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 2110 Beckman Coulter ACT 1130 Beckman Coulter Gen-S 96.0 0.6 0.6 11190 Beckman Coulter JT,T 1150 Beckman Coulter LH 500/750/755 97.0 1.4 1.5 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 96.2 0.2 0.2 6180 Beckman Coulter STKS 3061 Sysmex K 1000 98.9 1.3 1.3 4063 Sysmex K 4500 2064 Sysmex KX 21 2065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 97.6 1.0 1.0 8066 Sysmex SF 3000 98.3 0.9 0.9 15067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 98.1 1.6 1.6 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 97.8 1.1 1.1 12Globalement (toutes méthodes confondues) 97.6 1.9 1.9 216


Thrombocytes 109/l H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N



Thrombocytes 109/l H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N



Réticulocytes % GR H/6550 METHODE Médiane DS CV,% N

055 Abbott Cell-Dyn 3200 1.2 0.1 6.0 8052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 1.2 0.2 20.1 7054 Abbott Cell-Dyn 4000 1.6 0.1 5.3 12040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 2015 ABX Pentra 3071 Bayer Advia 120 1.3 0.2 17.1 45072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 1130 Beckman Coulter Gen-S 1.2 0.3 25.3 12150 Beckman Coulter LH 500/750/755 1.2 0.1 12.3 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 3180 Beckman Coulter STKS 1069 Sysmex R 500/R 1000 1.3 0.2 16.0 5065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 1.2 0.1 7.8 6067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 1.2 0.2 18.8 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 1.3 0.2 15.4 10Globalement (toutes méthodes confondues) 1.3 0.2 18.8 169


Réticulocytes % GR H/6551 METHODE Médiane DS CV,% N

055 Abbott Cell-Dyn 3200 0.7 0.3 36.8 8052 Abbott Cell-Dyn 3500/3700 0.9 0.1 15.6 7054 Abbott Cell-Dyn 4000 0.7 0.1 14.8 12040 Abbott Cell-Dyn Sapphire 2015 ABX Pentra 3071 Bayer Advia 120 0.8 0.1 18.5 45072 Bayer Advia 2120 3070 Bayer Technicon H1/H2/H3 1130 Beckman Coulter Gen-S 0.5 0.3 59.4 12150 Beckman Coulter LH 500/750/755 0.6 0.2 37.7 18140 Beckman Coulter MAXM,HMX 3180 Beckman Coulter STKS 1069 Sysmex R 500/R 1000 0.7 0.1 10.6 5065 Sysmex SE 9000 2068 Sysmex SE 9500/SE-alpha/HST410 0.7 0.1 8.5 7067 Sysmex XE 2100/XE-alpha/HST 430 0.7 0.1 11.3 31060 Sysmex XT 2000i/XT 1800i 0.7 0.1 10.4 10Globalement (toutes méthodes confondues) 0.7 0.1 21.2 170


COAGULATION

Trois échantillons lyophilisés ont été envoyés: un plasma hépariné (CO/6296, daltéparine (FragminR)), un plasma normal (CO/6590) et un plasma adsorbé (CO/6591). L’activité anti-Xa de l’échantillon CO/6296 est de 0.5 UI/ml.

Le tableau ci-dessous reprend la moyenne des résultats obtenus par trois experts pour les facteurs de coagulation exprimés en pourcentage d’activité sur ces 3 plasmas:

CO/6296 CO/6590 CO/6591II 84 88 25V 75 80 76

VII 85 104 7X 73 88 12

VIII 56 100 86IX 75 88 6XI 56 109 83XII 68 98 71

La valeur INR médiane de l’échantillon adsorbé CO/6591 est de 3.36 avec un CV de 13.5%. La valeur médiane des rapports aPTT de l’échantillon hépariné CO/6296 est de 2.0 avec un CV de 14.6%.

88.6% des laboratoires belges ont renvoyé les résultats EEQ en coagulation au moyen de la base électronique (toolkit).


PT(sec) sec CO/6296METHODE Médiane DS CV,% N

003 BioMérieux Simplastin Excel S 15.4 0.5 3.4 36011 Dade Behring Innovin 10.7 0.5 4.8 53012 Dade Behring Thromborel S 12.1 0.7 6.0 11008 Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen HS 12.9 0.4 2.7 8

009 Instrumentation Laboratory HemosILPT-Fibrinogen Recombinant 10.2 0.6 6.1 17

010 Instrumentation Laboratory HemosIL Recombiplastin 11.6 0.8 6.6 29

005 Roche STA Neoplastin CI 14.5 1.3 8.7 6006 Roche STA Neoplastin CI PLUS 14.3 0.6 4.4 71999 Autre 1Globalement (toutes méthodes confondues) 13.1 2.9 21.9 232



009 Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen Recombinant 11.0 0.4 3.2 17

010 Instrumentation Laboratory HemosILRecombiplastin 11.2 0.8 6.8 29








PT(%) % CO/6296METHODE Médiane DS CV,% N




006 Roche STA Neoplastin CI PLUS 86.0 4.6 5.3 71005 Roche STA NeoplastinCI 87.0 8.2 9.4 6999 Autre 1Globalement (toutes méthodes confondues) 89.0 8.2 9.2 231













PT(INR) CO/6296METHODE Médiane DS CV,% N

















aPTT(sec) sec CO/6296METHODE Médiane DS CV,% N

002 BioMérieux Automated aPTT 1004 BioMérieux MDA Platelin LS 73.0 10.0 13.7 5003 BioMérieux Platelin LS 64.6 8.9 13.8 52011 Dade Behring Actin 3012 Dade Behring Actin FS 53.6 4.9 9.2 32013 Dade Behring Actin FSL 51.9 3.2 6.1 17014 Dade Behring Pathromtin SL 69.5 1.8 2.6 7010 Instrumentation Laboratory HemosILSynthasIL 52.6 2.9 5.5 10

009 Instrumentation Laboratory IL TestAPTT-SP 72.7 3.6 5.0 32

006 Roche STA CK PREST 55.8 2.4 4.4 10008 Roche STA-Cephascreen 50.3 3.2 6.3 4005 Roche STA-PTT A 65.2 2.8 4.3 60999 Autre 1Globalement (toutes méthodes confondues) 63.7 10.1 15.8 234

aPTT(ratio) CO/6296METHODE Médiane DS CV,% N





Interprétation N Total %> limite supérieure + 20% 222 234 94.9

Entre les limites de référence 1 234 0.4

Néant 11 234 4.7

Méthode 3* 5* Néant TotalBioMérieux Automated aPTT 0 1 0 1

BioMérieux MDA Platelin LS 0 5 0 5

BioMérieux Platelin LS 0 50 2 52

Dade Behring Actin 1 2 0 3

Dade Behring Actin FS 0 31 1 32

Dade Behring Actin FSL 0 16 1 17

Dade Behring Pathromtin SL 0 7 0 7

Instrumentation Laboratory HemosIL SynthasIL 0 9 1 10

Instrumentation Laboratory IL Test APTT-SP 0 30 2 32

Roche STA CK PREST 0 9 1 10

Roche STA-Cephascreen 0 4 0 4

Roche STA-PTT A 0 57 3 60

Autre 0 1 0 1* 3. Entre les limites de référence

5. > limite supérieure + 20%








009 Instrumentation Laboratory IL Test APTT-SP 1.03 0.06 5.8 32006 Roche STA CK PREST 1.00 0.04 3.7 9008 Roche STA-Cephascreen 0.95 0.06 6.3 4005 Roche STA-PTT A 1.00 0.04 4.4 59999 Autre 1Globalement (toutes méthodes confondues) 1.00 0.06 5.9 232


Interprétation N Total %Entre les limites de référence 215 234 91.9

Entre limite supérieure et limite supérieure + 20% 4 234 1.7

Entre limite inférieure – 20% et limite inférieure 2 234 0.9

> limite supérieure + 20% 1 234 0.4

Néant 12 234 5.1

Méthode 2* 3* 4* 5* Néant TotalBioMérieux Automated aPTT 0 1 0 0 0 1

BioMérieux MDA Platelin LS 0 5 0 0 0 5

BioMérieux Platelin LS 1 46 1 1 3 52

Dade Behring Actin 0 3 0 0 0 3

Dade Behring Actin FS 0 31 0 0 1 32

Dade Behring Actin FSL 0 16 0 0 1 17

Dade Behring Pathromtin SL 0 7 0 0 0 7

Instrumentation Laboratory HemosIL SynthasIL 0 9 0 0 1 10

Instrumentation Laboratory IL Test APTT-SP 0 27 3 0 2 32

Roche STA CK PREST 0 9 0 0 1 10

Roche STA-Cephascreen 0 4 0 0 0 4

Roche STA-PTT A 1 56 0 0 3 60

Autre 0 1 0 0 0 1* 2. Entre limite inférieure – 20% et limite inférieure

3. Entre les limites de référence 4. Entre limite supérieure et limite supérieure + 20%5. > limite supérieure + 20%







002 BioMérieux Automated aPTT 1004 BioMérieux MDA Platelin LS 1.54 0.06 3.9 5003 BioMérieux Platelin LS 1.70 0.15 8.9 52011 Dade Behring Actin 3012 Dade Behring Actin FS 2.01 0.13 6.5 32013 Dade Behring Actin FSL 1.67 0.12 7.1 17014 Dade Behring Pathromtin SL 2.08 0.09 4.3 7010 Instrumentation Laboratory HemosIL SynthasIL 1.54 0.13 8.2 10




Interprétation N Total %> limite supérieure + 20% 208 234 88.9


Entre les limites de référence 2 234 0.9

Néant 13 234 5.6

Méthode 3* 4* 5* Néant TotalBioMérieux Automated aPTT 0 0 1 0 1

BioMérieux MDA Platelin LS 0 0 5 0 5

BioMérieux Platelin LS 1 3 44 4 52

Dade Behring Actin 0 0 3 0 3

Dade Behring Actin FS 0 0 31 1 32

Dade Behring Actin FSL 0 2 14 1 17

Dade Behring Pathromtin SL 0 0 7 0 7

Instrumentation Laboratory HemosIL SynthasIL 0 0 9 1 10

Instrumentation Laboratory IL Test APTT-SP 0 4 26 2 32

Roche STA CK PREST 0 0 9 1 10

Roche STA-Cephascreen 0 0 4 0 4

Roche STA-PTT A 1 2 54 3 60

Autre 0 0 1 0 1* 3. Entre les limites de référence

4. Entre limite supérieure et limite supérieure + 20%5. > limite supérieure + 20%


Fibrinogène g/l CO/6296METHODE Médiane DS CV,% N

999 Autre 1Clauss 2.80 0.27 9.8 195005 BioMérieux Fibriquik 2.65 0.24 9.1 39004 BioMérieux MDA Fibriquik 2014 Dade Behring Multifibren U 2.75 0.19 6.9 8015 Dade Behring Thrombin Reagent 2.56 0.24 9.2 36010 Instrumentation Laboratory HemosILFibrinogen C 2.80 0.24 8.7 13

011 Instrumentation Laboratory IL Test QFAThrombin 3

006 Roche STA Fibrinogen 2.94 0.16 5.5 94PT derived 2.71 0.32 11.8 33003 BioMérieux Simplastin Excel S 2012 Dade Behring Innovin 2.44 0.27 11.3 4007 Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen HS 2.96 0.16 5.5 6



Néphélométrie 1020 Dade Behring Antiserum to HumanFibrinogen 1

Globalement (toutes méthodes confondues) 2.80 0.27 9.8 230


Interprétation N Total % Entre les limites de référence 218 230 94.8



Néant 10 230 4.3

Méthode 2* 3* 5* Néant TotalAutre 0 1 0 0 1Clauss 1 185 1 8 195BioMérieux Fibriquik 0 37 1 1 39

BioMérieux MDA Fibriquik 0 2 0 0 2

Dade Behring Multifibren U 0 7 0 1 8

Dade Behring Thrombin Reagent 1 35 0 0 36

Instrumentation Laboratory HemosIL FibrinogenC 0 12 0 1 13

Instrumentation Laboratory IL Test QFA Thrombin 0 3 0 0 3

Roche STA Fibrinogen 0 89 0 5 94PT derived 0 31 0 2 33BioMérieux Simplastin Excel S 0 2 0 0 2

Dade Behring Innovin 0 3 0 1 4

Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen HS 0 6 0 0 6

Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen Recombinant 0 13 0 1 14

Instrumentation Laboratory HemosIL Recombiplastin 0 7 0 0 7

Néphélométrie 0 1 0 0 1Dade Behring Antiserum to Human Fibrinogen 0 1 0 0 1

* 2. Entre limite inférieure – 20% et limite inférieure 3. Entre les limites de référence 5. > limite supérieure + 20%













Néant 13 229 5.7

Méthode 2* 3* Néant TotalAutre 0 1 0 1Clauss 1 182 11 194BioMérieux Fibriquik 0 37 2 39

BioMérieux MDA Fibriquik 0 2 0 2

Dade Behring Multifibren U 0 7 1 8

Dade Behring Thrombin Reagent 1 34 1 36

Instrumentation Laboratory HemosIL Fibrinogen C 0 12 1 13

Instrumentation Laboratory IL Test QFA Thrombin 0 3 0 3

Roche STA Fibrinogen 0 87 6 93PT derived 0 31 2 33BioMérieux Simplastin Excel S 0 2 0 2

Dade Behring Innovin 0 3 1 4

Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen HS 0 6 0 6

Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen Recombinant 0 13 1 14

Instrumentation Laboratory HemosIL Recombiplastin 0 7 0 7Néphélométrie 0 1 0 1Dade Behring Antiserum to Human Fibrinogen 0 1 0 1

* 2. Entre limite inférieure – 20% et limite inférieure 3. Entre les limites de référence















Néant 12 229 5.2

Méthode 2* 3* 4* 5* Néant TotalAutre 0 1 0 0 0 1Clauss 2 179 4 0 9 194BioMérieux Fibriquik 0 37 1 0 1 39

BioMérieux MDA Fibriquik 0 2 0 0 0 2

Dade Behring Multifibren U 0 5 2 0 1 8

Dade Behring Thrombin Reagent 1 34 0 0 0 35

Instrumentation Laboratory HemosIL Fibrinogen C 0 11 1 0 1 13

Instrumentation Laboratory IL Test QFA Thrombin 0 3 0 0 0 3

Roche STA Fibrinogen 1 87 0 0 6 94PT derived 0 15 14 1 3 33BioMérieux Simplastin Excel S 0 2 0 0 0 2

Dade Behring Innovin 0 3 0 0 1 4

Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen HS 0 2 4 0 0 6

Instrumentation Laboratory HemosIL PT-Fibrinogen Recombinant 0 4 7 1 2 14

Instrumentation Laboratory HemosIL Recombiplastin 0 4 3 0 0 7

Néphélométrie 0 1 0 0 0 1Dade Behring Antiserum to Human Fibrinogen 0 1 0 0 0 1

* 2. Entre limite inférieure – 20% et limite inférieure 3. Entre les limites de référence 4. Entre limite supérieure et limite supérieure + 20%5. > limite supérieure + 20%


IMMUNO-HEMATOLOGIE

Participation29 laboratoires étrangers (Canada, Finlande, France (6), Lettonie, Luxembourg (15), Pays-Bas, Maroc, Norvège, Suède (2)) et 198 laboratoires belges ont participé à cette enquête. Vous trouverez ci-dessous les résultats des laboratoires belges.

Groupe sanguinLes globules rouges de l’échantillon 0510 étaient du groupe O Rh D positif de phénotype Ccee.Les globules rouges de l’échantillon 0512 étaient du groupe O Rh D positif de phénotype CCee.

Réaction de Coombs directe La réaction de Coombs directe était négative pour les deux échantillons.

Tests de compatibilitéL’échantillon de sérum 0513 ne contenait pas d’anticorps irréguliers. L’échantillon de sérum 0515 contenait un anticorps anti-Fya et était incompatible avec les globules rouges 0512.

Le tableau suivant reprend le titre de l’anticorps:

Anticorps Coombs en tube LISS-Coombs sur colonneAnti- Fya 1 2

Un laboratoire hospitalier et 2 laboratoires privés ont considéré l’échantillon 0515 erronément comme compatible avec les globules rouges 0512.

40.5% des participants ont fait l’identification des anticorps irréguliers. Un laboratoire hospitalier a mentionné la présence d’un anticorps anti-K. Tous les autres participants ont identifié correctement l’anticorps anti-Fya.

95.6% des laboratoires ont mentionné le degré d’agglutination retrouvé. Le tableau suivant reprend le pourcentage de participants pour chaque degré d’agglutination:

Sérum GR + ++ +++ ++++0515 0512 10.6% 59.6% 29.1% 0.7%


Le tableau suivant reprend, pour les différentes méthodes, le nombre de laboratoires, qui n’ont pas décelé l’incompatibilité entre les globules rouges 0512 et le sérum 0515 (N-), le nombre de laboratoires, qui ont mentionné le degré d’agglutination (N+) retrouvé et le pourcentage de participants pour chaque degré d’agglutination:

Méthode N- N+ + ++ +++ ++++Diamed

WaDiana/ID-Gelstation 0 17 23.5% 58.8% 17.7% 0%Diamed

Gel/Méthode manuelle 1 95 9.5% 64.2% 26.3% 0%Ortho-Clinical Diagnostics

Autovue 0 14 0% 57.1% 42.9% 0%Ortho-Clinical Diagnostics

Gel/Méthode manuelle 0 17 0% 47.1% 52.9% 0%Autre + non précisé 2 8 37.5% 37.5% 12.5% 12.5%

Anticorps irréguliersL’échantillon de sérum 0517 contenait un anticorps anti-Fya.

Le tableau suivant reprend le titre de l’anticorps:

Anticorps Coombs en tube LISS-Coombs sur colonneAnti-Fya 1 2

Deux laboratoires hospitaliers et 4 laboratoires privés n’ont pas décelé les anticorps irréguliers.

36.0% des participants ont fait l’identification des anticorps irréguliers. Un laboratoire hospitalier a mentionné la présence d’un anticorps anti-K. Tous les autres participants ont identifié correctement l’anticorps anti-Fya.

92.1% des laboratoires ont mentionné le degré d’agglutination retrouvé. Le tableau suivant reprend le pourcentage de participants pour chaque degré d’agglutination:

Sérum + ++ +++ ++++0517 11.5% 54.6% 32.8% 1.1%


Le tableau suivant reprend, pour les différentes méthodes, le nombre de laboratoires, qui n’ont pas décelé les anticorps irréguliers dans le sérum 0517 (N-), le nombre de laboratoires, qui ont mentionné le degré d’agglutination (N+) retrouvé et le pourcentage de participants pour chaque degré d’agglutination:

Méthode N- N+ + ++ +++ ++++Diamed

WaDiana/ID-Gelstation 0 21 23.8% 57.1% 19.1% 0%Diamed

Gel/Méthode manuelle 2 106 11.3% 53.8% 34.9% 0%Ortho-Clinical Diagnostics

Autovue 1 22 4.6% 63.6% 31.8% 0%Ortho-Clinical Diagnostics

Gel/Méthode manuelle 0 13 0% 53.8% 46.2% 0%Autre + non précisé 3 12 16.7% 41.6% 25.0% 16.7%

84.6% des laboratoires belges ont renvoyé les résultats EEQ en immuno-hématologie au moyen de la base électronique (toolkit).

Système ABO

L’échantillon I/0510 appartient au groupe sanguin O.

Réponses reçues: 198

Réponses Nbre de réponses % O 198 100

L’échantillon I/0512 appartient au groupe sanguin O.


Réponses Nbre de réponses % O 198 100


Système Rhésus (D)

L’échantillon I/0510 appartient au groupe sanguin Rh positif (D positif).


Réponses Nbre de réponses %Rh positif (D positif) 198 100

L’échantillon I/0512 appartient au groupe sanguin Rh positif (D positif).


Réponses Nbre de réponses %Rh positif (D positif) 198 100

Sous-groupes Rhésus (C,c,E,e)

L’échantillon I/0510 appartient au sous-groupe Ccee.


Réponses Nbre de réponses % Ccee 191 98.5

CCee 3 1.5

L’échantillon I/0512 appartient au sous-groupe CCee.


Réponses Nbre de réponses % CCee 192 99.0

Ccee 2 1.0


Réaction de Coombs directe

La réaction de Coombs directe est négative pour l’échantillon I/0510.


Réponses Nbre de réponses % Négatif 191 100

La réaction de Coombs directe est négative pour l’échantillon I/0512.


Réponses Nbre de réponses % Négatif 191 100

Compatibilités

L’échantillon de sérum I/0513 est compatible avec l’échantillon de globules rouges I/0510.


Réponses Nbre de réponses % Compatible 158 100








L’échantillon de sérum I/0515 (anti-Fya) est incompatible avec l’échantillon de globules rouges I/0512.


Réponses Nbre de réponses % Incompatible 155 98.1 Compatible 3 1.9

Recherche d’anticorps

Il y a présence d’anticorps antiérythrocytaires (anti-Fya) dans l’échantillon de sérum I/0517.


Réponses Nbre de réponses %Présence 183 96.8Absence 6 3.2


RECHERCHE ET IDENTIFICATION DES AAN

EchantillonUn sérum (S/4783) provenant d’un patient atteint d’un lupus érythémateux systémique.

Participation153 laboratoires ont participé à cette enquête.

RésultatsImmunofluorescence indirecte sur cellules HEp-2(000)Le tableau suivant reprend les aspects des anticorps obtenus en immunofluorescence sur cellules HEp-2(000):

Aspect NombreCorrectHomogène 127AcceptableHomogène + moucheté 6Homogène + image cytoplasmique 5Homogène + cytoplasme granulaire 2Homogène + nuclear dots 1Homogène + membrane nucléaire 1Inacceptable(Finement) moucheté 6Noyau positif 1Smooth 1

Un laboratoire a utilisé une technique ELISA (QUANTA Lite ANA Elisa, Inova) pour la recherche des AAN et a obtenu un résultat positif.

Huit laboratoires (5.3%) ont interprété faussement l’image par immunofluorescence et ceci pour différentes raisons, notamment une mauvaise terminologiea ou une description incomplèteb: mouchetéa, smootha, noyau positifb.

Aucun laboratoire n’a obtenu un résultat négatif.

L’image par immunofluorescence est donc interprétée de façon acceptable par 94.7% des participants.


Le tableau suivant reprend les aspects des anticorps obtenus avec les différentes cellules HEp-2(000):

Fabricant N Aspect NCellules HEp-2 Alphadia 22 Homogène 17

Homogène + moucheté 2(Finement) moucheté 2Homogène + image cytoplasmique 1

Euroimmun 27 Homogène 19Homogène + moucheté 3(Finement) moucheté 2Homogène + image cytoplasmique 2Noyau positif 1

Immunoconcepts 2 Homogène 2Inova 32 Homogène 31

Homogène + cytoplasme granulaire 1Kallestad 10 Homogène 10Medica 3 Homogène 3Zeus 3 Homogène 3Autre ou pas mentionné 4 Homogène 3

Homogène + membrane nucléaire 1Cellules HEp-2000 Immunoconcepts 47 Homogène 39

(Finement) moucheté 2Homogène + image cytoplasmique 2Homogène + moucheté 1Homogène + cytoplasme granulaire 1Homogène + nuclear dots 1Smooth 1


Le graphique ci-dessous montre la distribution globale du titre:

010

2030

4050

Titre

Nom

bre

80 160 320 640 1280 2560 5120 10240 20480

| | | | | | | | |

Total

Le tableau ci-dessous reprend les médianes obtenues avec les cellules HEp-2(000) pour lesquelles il y a au moins 4 utilisateurs qui ont mentionné le titre:

Cellules Fabricant Nombre MédianeCellules HEp-2 Alphadia 9 1280

Euroimmun 23 1280Inova 29 1280Kallestad 9 1280

Cellules HEp-2000 Immunoconcepts 45 1280


Les graphiques ci-dessous montrent la distribution du titre pour les cellules HEp-2(000) pour lesquelles il y a au moins 4 utilisateurs qui ont mentionné le titre:

02

46

8

Titre

Nom

bre

80 160 320 640 1280 2560 5120 10240 20480

| | | | | | | | |

Alphadia

02

46

8

Titre

Nom

bre

80 160 320 640 1280 2560 5120 10240 20480

| | | | | | | | |

Euroimmun


05

1015

Titre

Nom

bre

80 160 320 640 1280 2560 5120 10240 20480

| | | | | | | | |

Immunoconcepts0

510

15

Titre

Nom

bre

80 160 320 640 1280 2560 5120 10240 20480

| | | | | | | | |

Inova


01

23

4

Titre

Nom

bre

80 160 320 640 1280 2560 5120 10240 20480

| | | | | | | | |

Kallestad

S/4783: aspect homogène


Recherche des anticorps anti-ADN128 laboratoires (83.7%) ont fait la recherche des anticorps anti-ADN.

Le tableau suivant indique, pour chaque méthode, le nombre de réponses positives, négatives et douteuses:

Méthode Fabricant N + +/- -Crithidia Alphadia 6 2 4

Binding site 5 3 2Euroimmun 4 1 1 2Immunoconcepts 20 14 6Inova 7 6 1Kallestad 2 2Mardx 4 4Autre 3 3Total 51 33 2 16

64.7% 3.9% 31.4%Farr assay Amerlex 1 1dsDNA elisa Diasorin 5 4 1

Euroimmun 5 5Inova 23 22 1Kallestad 5 5Pharmacia Unicap 17 17Pharmacia Varelisa 7 7Autre 3 2 1Total 65 62 2 1

95.4% 3.1% 1.5%dsDNA dot BMD 7 7

Euroimmun 24 8 3 13Autre 2 1 1Total 33 16 3 14

48.5% 9.1% 42.4%Total 150 112 7 31

74.7% 4.7% 20.7%


39 participants (25.5%) ont fait la recherche des anticorps anti-nucléosomes.

Le tableau suivant donne un aperçu des résultats :

Méthode Fabricant N + +/- -Dot Alphadia 6 2 4

Euroimmun 22 22Autre 1 1

Elisa Inova 5 5Euroimmun 2 2Autre 3 1 2Total 39 33 2 4

84.6% 5.1% 10.3%

S/4783: anticorps anti-ADN (Crithidia lucilae)


Recherche des anticorps anti-ENA129 laboratoires (84.3%) ont fait la recherche des anticorps anti-ENA.

Le tableau suivant donne un aperçu des résultats :

Méthode N Fabricant N Résultat NID1 9 Immunoconcepts 8 Négatif 8

Home made 1 Négatif 1Dot 71 Alphadia 10 Négatif 8

RNP +/- 1RNP +/- + SSA +/- 1

BMD 22 Négatif 22Euroimmun 37 SSA 10

Négatif 9SSA + histones 7SSA + histones +/- 3SSA + RNP +/- 3SSA +/- 2SSA + RNP + histones 2SSA + RNP 1

Autre 2 Négatif 2LIA2 12 Innogenetics 12 SmB + RNP-A + histones 3

Histones 2SmB + histones 2SmB + RNP-A + Scl70 + histones 1SmB + RNP-A +/- + histones 1SmB +/- + RNP-A +/- + histones 1SmB +/- + histones 1SSA +/- 1

ELISA 44 Biorad 4 SSA 3Positif 1

Euroimmun 2 Positif 1Négatif 1

Inova 27 RNP 7RNP + SSA +/- 8Histones 4RNP + SSA 3SSA 1RNP +/- 1RNP +/- + histones 1RNP + histones +/- 1RNP + SSA +/- + histones 1


Pharmacia 8 Histones 3

Varelisa SSA + histones 1RNP 1SSA +/- + histones +/- 1SSA +/- + RNP +/- 1Histones +/- 1

Autre 3 SSA 1Douteux 1Négatif 1

FEIA3 17 Pharmacia 17 SSA 11Unicap SSA + RNP +/- 2

Positif 2SSA + RNP70 + RNP +/- 1RNP 1

1ID: Immunodiffusion ; 2LIA: Line immunoassay ; 3FEIA: Fluorescence enzyme immunoassay

Commentaire Le sérum S/4783 renferme des anticorps anti-ADN à des titres très élevés par la technique ELISA. La réaction sur Crithidia luciliae est fortement positive au niveau du kinétoplaste et moindre au niveau du noyau.

Le marquage du kinétoplaste est requise pour affirmer la présence d’anti-ADN. Il peut exister une difficulté à définir le kinétoplaste sur certaines cultures de Crithidia et les différencier du noyau et du corps basal. Nous utilisons depuis de nombreuses années une contre coloration qui permet de faire aisément la différence. Le liquide de montage est additionné de bromure d’éthidium, à la concentration finale de 1μg/ml. Lorsque le test est négatif, le kinétoplaste, le noyau et le corps basal sont colorés en rouge. Une fluorescence verte exclusive du kinétoplaste indique un test positif.

La recherche des anticorps anti-nucléosomes est effectuée par ELISA ou Immunodot.Diverses préparations sont utilisées par les fabricants des kits : un extrait natif provenant de thymus de veau, des cellules de souris, des cellules de HeLa obtenu par chromatographie.D’autres tests utilisent des extraits salins de noyaux de thymus de veau. Ces derniers extraits dénaturent partiellement le complexe des nucléohistones et sont moins sensibles que les tests utilisant des extraits natifs. Des réactions faussement positives ont cependant été observées avec ces extraits insuffisamment purifiés.

Exemples : EUROIMMUN, INOVA : complexe natif de cellules de thymus


ORGENTEC : complexe natif de cellules HeLaALPHA-DIA (DOT) : extrait de nucléohistones de thymus de veauINOVA : complexe natif de cellules de souris d’érythroleucémies

Le sérum S/4783 est également positif pour les anticorps anti-RNP. Il réagit faiblement avec le complexe U1snRNP (appelé Sm/RNP) ainsi qu’avec les protéines recombinantes RNP 68 kD et RNP A. Les différences observées par les participants relèvent de la nature des antigènes utilisés dans les tests.

L’identification des anticorps anti-RNP peut être réalisée de diverses façons. La méthode la plus ancienne est l’immunodiffusion et la précipitation en gel. Elle utilise comme préparation antigénique un extrait de noyau de cellules thymiques de lapin ou de veau. Cette méthode a l’avantage de tester la réaction des anticorps avec les antigènes RNP et Sm natif. Actuellement, on utilise plus généralement les techniques immunoenzymatiques, ELISA ou Immunodot. Les antigènes proviennent de différentes sources. Certains sont purifiés à partir d’organes d’animaux (thymus de veau) par des techniques chromatographiques et d’immunoaffinité, permettant théoriquement d’obtenir des antigènes sous forme native. Ainsi une préparation appelée « compexe RNP-Sm » correspondant à un mélange des principaux snRNPs a été obtenue par immunoaffinité à l’aide d’anticorps polyclonaux humains et, plus récemment, par immunoaffinité avec un anticorps monoclonal anti-m3GppA spécifique de la structure cap des U-RNAs. Comme leur nom l’indique, les complexes RNP-Sm ainsi isolés, réagissent aussi bien avec les anticorps anti-RNP et anti-Sm. Les protéines 68, A et C ont été clonées et exprimées, en système procaryote, puis en système eucaryote afin que la molécule subisse les modifications transcriptionnelles pour se rapprocher au maximum de la molécule native. Le profil des réactivités anti-RNP avec les protéines 68, A et C est très hétérogène.

Anti-Protéine 68 : 79 %Anti-Protéine A : 85 %Anti-Protéine C : 69 %Anti-Protéine 68 + A + C : 48 %

Réactivité des anticorps anti-RNP avec les protéines 68, A et C (étude de 62 sérums )

Dans de rares cas, les anticorps anti-RNP ne peuvent réagir avec les protéines 68, A ou C que si celles-ci sont associées au U1RNA, c’est-à-dire au sein du complexe U1RNP (Sm ou RNP).

Il convient donc que le biologiste porte une attention particulière aux méthodes utilisées dans son laboratoire pour la recherche et l’identification des anticorps anti-RNP. En particulier, il lui incombe de se renseigner sur la nature et la qualité des préparations antigéniques utilisées dans les diverses trousses commerciales.


La recherche des anticorps anti-SSA dans cet échantillon a montré quelques discordances manifestes. Les diverses techniques utilisées par les participants ne font pas appel à la même préparation antigénique. Pour certains tests ELISA ou DOT, les fabricants utilisent un extrait purifié du complexe SSA (protéines de 60 kD et YARN) obtenu de thymus de bovidés par immuno-affinité. D’autres fabricants utilisent la protéine recombinante SSA 60 kD. Enfin, plus récemment, a été introduit un complexe SSA60 + YARN recombinant.Des réactions faussement positives sont observées avec des antigènes natifs non suffisamment purifiés. L’autre problème réside dans l’utilisation de la protéine TRIM21, improprement appelée SSA/Ro52. Les anticorps dirigés contre cette protéine ne correspondent pas à des anticorps anti-SSA comme détaillé plus loin.

Exemples : EUROIMMUN, BMD (DOT) : complexe SSA natif immuno-purifié.ALPHA-DIA (DOT) : complexe recombinant complet (protéine de 60 kD + YARN)PHARMACIA (EIA) : Protéine SSA 60 + Protéine 52 recombinantes.INOVA (ELISA) : complexe SSA + Protéine 52 recombinante.

Prof. Humbel Laboratoire Luxembourgeois d’Immuno-Pathologie

Remarques générales concernant l’évaluation des titres obtenus pour les différents paramètres:Pour les AAN, il y a une large dispersion des titres indépendamment du fabricant. Le critère d’acceptabilité pour les AAN est la valeur cible (médiane) +/- 2 titres. (Clinical Diagnostic Immunology – Protocols in Quality Assurance and Standardization Edited by. RM Nakamura et al. Blackwell Science 1998; ISBN 0-86542-518-).Si, après comparaison des résultats avec la médiane utilisée comme valeur cible à savoir dans le cas de l’enquête : 1/1280 +/- 2 titres, le laboratoire constate qu’il ne satisfait pas aux exigences, nous lui conseillons d’en analyser l’origine (durée utilisation de la lampe, utilisation adéquate du conjugué, bon réglage du microscope - …).

Dr. Van Campenhout UZA, Anvers


ANTICORPS ANTI-SSA/Ro52DE QUOI S’AGIT-IL ET QUEL EST LEUR INTERET ?Les anticorps anti-SSA/Ro52 font partie des anticorps antinucléaires les plus fréquemment observés dans les connectivites. Ils sont rencontrés dans le lupus érythémateux disséminé, le lupus cutané subaigu, la maladie de Sjögren et dans d’autres maladies systémiques rhumatismales. Ils sont également associés au lupus néonatal, compliqué parfois d’un bloc auriculo-ventriculaire congénital lié au passage transplacentaire de ces anticorps.

L’ANTIGENE SSA/RoL’antigène SSA/Ro est un complexe de petites particules ribonucléoprotéiques (RNP). Chacune comprend un petit ARN (d’une centaine de nucléotides) riche en uridine transcrit par l’ARN-polymérase III et appelé hYARN (h pour humain et Y pour cytoplasmique). Chez l’homme, on connaît quatre types d’hYARN : hYARN1, hYARN3, hYARN4 et hYARN5, qui s’associent à des protéines pour former les particules SSA/Ro. La protéine la plus importante est un polypeptide de 60 kD appelé SSA/Ro60, formé de 538 acides aminés et qui comporte une séquence de reconnaissance de l’ARN (le motif RNP) par lequel elle se lie aux hYARN. Cette liaison se fait au niveau de la double hélice formée par l’appariement des bases de l’extrémité 3’ avec celles de l’extrémité 5’.

Une autre protéine, 50 fois plus abondante dans la cellule, la protéine SSB/La se fixe au niveau de la chaîne poly-uridine de l’extrémité 3’ des hYARN. Cette protéine SSB/La est un polypeptide de 48 kD formé de 408 acides aminés, hautement phosphorylé, et qui comporte également une séquence RNP de fixation aux ARN.


Structure de l’antigène SSA/Ro

Ro/SSA 52

COOH

NH2

ZnRo/SSA 60

La/SSB

hY1RNPLEUCINE-ZIPPER

Zinc Finger

(Référence : Anticorps Anti-SSA/Ro Méthodes de dépistage et valeur diagnostique;BMD Editions – 1996 ISBN: 2-9510600-0-9.)

ANTICORPS ANTI-SSA/RoLes épitopes immunodominants des particules SSA/Ro sont situés sur la région centrale de la protéine native de 60 kD. Mais il existe également des épitopes linéaires sur les régions 169-190 et 211-232. Certains anticorps anti-SSA/Ro reconnaissent aussi les hYARN, en particulier l’hYARN5. Il existerait également des anticorps exclusivement dirigés contre le complexe SSA/Ro60-hYARN, confirmant l’hétérogénéité des anti-SSA/Ro. Les anticorps anti-SSA/Ro s’observent dans le lupus systémique (30-40%), le lupus cutané subaigu (70-90%) et la maladie de Sjögren (80-90%). Diverses manifestations cliniques et biologiques sont associées à ces anticorps : la photosensibilité, le purpura, l’hypergammaglobulinémie et le lupus néonatal.

Dans la maladie de Sjögren, les anticorps reconnaisent également la protéine SSB/La associée au complexe. Les déterminants antigéniques sont répartis sur les domaines N- et C- terminaux.

ANTICORPS ANTI-SSA/Ro52En 1988, on découvre un nouveau constituant protéique qui serait associé au complexe SSA/Ro. En réalisant des Western-blot avec un extrait total brut de cellules HeLa, on montre que certains sérums anti-SSA/Ro réagissent également avec un polypeptide de 52 kD. La réaction est indépendante de la présence d’anti-SSA/Ro60. La protéine a été clonée puis utilisée comme


antigène en ELISA, immunodot et Westernblot pour la mise en évidence des anti-SSA/Ro. Deux phénomènes importants ont été constatés. Le premier, très important sur le plan immunologique, a révélé que les anticorps anti-SSA/Ro52 monospécifiques décelés avec la protéine recombinante ne se fixent pas sur les cellules HEp2 en immunofluorescence indirecte. D’autre part, ils ne reconnaissent pas le complexe SSA/Ro natif en immunoprécipitation et en ELISA. Des particules SSA/Ro natives inhibent, en Westernblot, la réaction avec la protéine de 60 kD mais pas celle avec la protéine de 52 kD. Sur le plan biochimique, il n’a jamais été possible de mettre en évidence la présence de la protéine de 52 kD dans des complexes natifs, soigneusement isolés et purifiés par HPLC. L’étude de la structure de la protéine de 52 kD a montré que celle-ci ne renferme pas de séquence de liaison aux ARN et ne peut donc pas se fixer sur les hYARN directement. On a tenté d’expliquer l’association avec le complexe SSA/Ro par une réaction protéine-protéine entre les protéines SSA/Ro de 52 et de 60 kD.

La protéine SSA/Ro de 52 kD fait partie d’une grande famille de protéines appelées TRIM (pour Tri-Motif) car elles sont formées de trois domaines successifs différents. Du côté de l’extrémité N-terminale (résidus 16 à 54) se situe le domaine ring-finger formé de boucles d’acides aminés et d’ions zinc d’où leur appellation de « doigt de zinc ». Le domaine suivant (résidus 91 à 123) est une boîte B (Bbox), un autre domaine supplémentaire de liaison d’ions zinc. Le troisième domaine (résidus 128 à 234) consiste en une hélice alpha (coiled-coil) avec une séquence leucine-zipper (résidus 211-232) contenant des leucines répétées régulièrement d’où son appellation de glissière ou fermeture éclair à leucine. La protéine p52 porte encore sur son extrémité terminale une séquence bien conservée d’acides aminés, le domaine B30.2 homologue des protéines RFP-like (ring-finger-like proteins). Ce domaine est aussi présent sur certaines protéines de la famille des TRIM, comme TRIM 21. Deux des hélices du domaine coiled-coil peuvent interagir entre elles de façon à permettre de l’homodimérisation de la protéine ou l’assemblage avec d’autres protéines. Cette dernière interaction a été suggérée pour expliquer l’association de la protéine p52 avec la protéine SSA/Ro60, ce qui n’a jamais pu être démontré.

Les anticorps anti-p52 décrits reconnaissent des régions épitopiques situées au niveau de la région leucine-zipper. Cette région n’est pas accessible aux anticorps au niveau des dimères, ce qui peut expliquer l’existence d’anticorps réagissant uniquement avec la protéine p52 en Westernblot. D’autres épitopes ont été localisés au niveau de la région N-terminale contenant les domaines zinc-fingers.

Le domaine B30.2 est également fortement impliqué dans des interactions protéine-protéine. C’est ainsi qu’une interaction directe, non de type anticorps-antigène, est observée avec le domaine B30.2 de la protéine p52 et la région charnière des immunoglobulines. Cette observation très importante


permet d’expliquer la fréquence des anticorps anti-p52 dans de nombreuses maladies, mais également chez les sujets normaux.

La fréquence des anticorps monospécifiques anti-SSA/Ro52 a été différemment rapportée. Avec un immunodot commercial (INNOGENETICS), ces anticorps ont été rapportés dans des situations cliniques très variables, sans relation avec une connectivite : hépatite C, cancers divers, leucémie, sclérose en plaque, fibrose pulmonaire, purpura thrombopénique, accident vasculaire cérébral, maladie de Churg-Strauss.

Dans les connectivites, les anti-SSA/Ro52 sont fréquemment associés aux anti-SSA/Ro60 mais cette fréquence est dépendante de la technique et de l’antigène utilisés. Une association significative des anti-SSA/Ro52 avec les anticorps anti-cytoplasmique caractéristiques des myosites peut être observée sans qu’aucune explication de ce phénomène n’ait encore été trouvée.

Prof. Humbel Laboratoire Luxembourgeois d’Immuno-Pathologie


RECHERCHE ET IDENTIFICATION DES ANCA(ANCA : antineutrophil cytoplasmic antibodies, anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires neutrophiles, ACPN)

EchantillonL’échantillon S/6596 provenait d’une patiente atteinte de la maladie de Wegener.

Nous remercions le Prof. Humbel (Laboratoire Luxembourgeois d’Immuno-Pathologie) qui nous a procuré l’échantillon et donné les renseignements cliniques nécessaires à l’enquête.

ParticipationTrois laboratoires luxembourgeois et 72 laboratoires belges ont participé à cette enquête.

RésultatsImmunofluorescence indirecte Le tableau suivant reprend les aspects des anticorps obtenus en immunofluorescence :

Aspect NombrecANCA 64cANCA + pANCA 2ANCA (uniquement dépistage) 2

Le pANCA est une fausse interprétation.Aucun laboratoire n’a obtenu un résultat négatif.

Le tableau ci-dessous donne les médianes des titres obtenus avec les granulocytes pour lesquels un minimum de 4 utilisateurs ont mentionné le titre:

Fabricant N MédianeBinding Site 9 320Euroimmun 12 160Inova 18 320


Les graphiques ci-dessous montrent la distribution du titre pour les granulocytes pour lesquels un minimum de 4 utilisateurs ont mentionné le titre:


Caractérisation des ANCALe tableau suivant reprend les résultats obtenus avec les techniques ELISA et immunodot :

Fabricant ELISA Dot Résultat NombreAlphadia 10 PR3 7

PR3 + MPO (faible) 2PR3 + MPO 1

BMD 14 PR3 14Euroimmun 5 PR3 5

4 PR3 4Pharmacia Varelisa 3 PR3 2

PR3 + MPO 1Pharmacia Unicap 6 PR3 5

MPO 1Inova 14 PR3 14Autre 5 PR3 5

S/6596: aspect cANCA


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RAPPORT GLOBAL EVALUATION EXTERNE DE LA QUALITE … · FROTTIS H/6517: Leucémie monoblastique aiguë Le frottis H/6517 a été envoyé avec les renseignements cliniques et l’hémogramme