Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 1

Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-

Limousin1



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La moelle osseuse est un tissu en renouvellement permanent situé dans les os.

Production de 1012 cellules par jour(mille milliards!)

Répartition :Crâne et mâchoire 13 %Membres supérieurs 8 %Sternum et côtes 10 %Vertèbres 28 %Bassin 34 %Membres inférieurs 4 %

La greffe de CSH Moelle Osseuse



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Qu’est-ce que la moelle osseuse

Un organe responsable de la production des éléments du sang .

Les « cellules souches » donneront :– Globules rouges– Leucocytes– Plaquettes



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Schéma de l’hématopoïèseCellules souches

Lignée myéloïde

Lignée lymphoïde

Mégacaryocyte/plaquettes

Monocyte

Érythrocyte

Éosinophile

Granulocyte

Cellules maturesPrécurseursProgéniteurs

Lymphocytes B et T



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Définition

• Une cellule souche est la « cellule mère » non différenciée et pluripotente dont proviennent toutes les cellules sanguines

• Elle est capable d’une différenciation et d’un auto-renouvellement illimités



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La greffe de moelle osseuseDeux grands types de pathologies :

1. production de cellules anormales :

• Leucémie aigue ou chronique

• Myélome

• Lymphomes

2. dysfonctionnement :

• Aplasie

• Déficits congénitaux



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La greffe de moelle osseuse

Particularités de la greffe de cellules de moelle osseuse

Différent de la greffe d’organe :

• pas d’opération chirurgicale

• injection par voie veineuse comme une transfusion

Mais problèmes immunologiques :

• rejet

• GVH (réaction du greffon contre l’Hôte)



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Importance de la compatibilité tissulaire

Typages HLA identiques du:

( Human Leucocyte Antigens)

• Donneur

•Receveur



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Les donneurs potentiels :

•la fratrie : 25% des cas

•les donneurs volontaires de moelle osseuse

•la banque de sang de cordon



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LE SYSTEME HLA



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Human Leucocyte Antigen

• Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset

• Complexe Majeur d ’histocompatibilité de l ’Homme

Polymorphe +++

• Réalisation du typage HLA par prise de sang

• « Carte d ’identité », exprimée à la surface de toutes nos cellules nucléées

Chaque sujet est unique

Le système HLA



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LA COMPATIBILITE

Une étude de compatibilité nécessite :

- La réalisation du TYPAGE HLA du patient et des donneurs

- La COMPARAISON des typages HLA du patient et des donneurs

- La RECHERCHE de l’identité tissulaire la plus proche, la plus parfaite.



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http://images.google.fr/imgres?imgurl=http://www.inbc2.org/hla/HLAMolecule.png&imgrefurl=http://www.inbc2.org/hla/histo101.htm&h=855&w=677&sz=448&hl=fr&start=503&tbnid=QLOHA_EdAFY1-M:&tbnh=145&tbnw=115&prev=/images%3Fq%3D%2Bhla%26start%3D500%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26hl%3Dfr%26lr%3D%26sa%3DN



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-Codominance: tous les gènes sont exprimés(2 Ag détectés par locus, hormis pour les homozygotes)

- Transmission en bloc sous forme d’haplotypes(peu de possibilité de crossing over)



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GENETIQUE DES POPULATIONS

Grande diversité du système HLA

Combinaisons préférentielles dans certaines populations

Information sur l’histoire génétique de chaque population

4 grands groupes de POPULATIONS :

CAUCASOÏDENEGROÏDEMONGOLOÏDEAUSTRALOÏDE



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Nomenclature des antigènes HLA



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FREQUENCES PHENOTYPIQUE ET GENOTYPIQUE(locus HLA-A)

CAUCASOIDES ORIENTAUX NEGROIDES

Allele frquencephnotypique

%

frquencegnique

%

frquencephnotypique

%

frquencegnique

%

frquencephnotypique

%

frquencegnique

%

A1A2A3

A11A23A24A25A26A28A29A30A31A32

Aw33Aw34Aw43Aw66

Ax

26.449.424.712.22.8

19.54.76.39.25.76.95.77.62.80.20.00.40.8

14.228.913.26.31.4

10.32.43.24.72.93.52.93.91.40.10.00.20.4

2.048.33.0

22.00.2

52.90.0

13.94.20.84.5

10.10.8

11.60.60.01.03.4

1.028.11.5

11.70.1

31.40.07.22.10.42.35.20.46.00.30.00.51.7

15.531.913.03.8

15.49.40.08.8

18.89.6

20.83.24.57.69.92.60.69.8

8.117.56.71.98.04.80.04.59.94.9

11.01.62.33.95.11.30.35.0

Nb 2163 976 311



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Méthodologie de l’étude du système HLA:

phénotypage: microlymphocytotoxicité (LCT)

génotypage:résolution générique (2 digits): basse résolutionrésolution allélique (4 voire 6 digits): haute résolution(résolution intermédiaire: moyenne résolution)

->2 manières d’exprimer les spécificités HLA,avec des correspondances entre elles



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Isolement des cellules mononucléées sur Ficoll

PRINCIPE et RESULTATS L'isolement sur Ficoll repose sur les densitésrespectives des cellules etdu Ficoll. Après centrifugation, les cellules mononucléées se rassemblent en un anneau opaque surnageant au dessus du Ficoll. Celui-ci est ensuite prélevé délicatement.



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LA BIOLOGIE MOLECULAIRE

appliquée au typage HLA



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Cellule Chromosomes ADN

La Biologie Moléculaire traite de la biologie des acides nucléiques



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Double héliceStructure de l’ADN



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Liaisonsphospho-diesters

(l. irréversibles, catalysées par des enzDNA pol. ou nucléases)

Liaisons hydrogène(réversibles sous l’effet de la chaleur

ou d’agents chimiques: dénaturation-hybridation)

A-T

G-C



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Taq polymerase,+ dNTP

Couple d’amorcesspécifiques

Matrice d’ADN

Permet d’amplifier une zone spécifique sur un gène

Principe de la PCR



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Révélation par BET fluorescentqui s’insère dans la double hélice (intercalant)

Identification en fonction du PM

Migration de l’ADN chargé négativement en gel d’agarose



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Polymorphisme du système HLA : sérologie versus DNA

HLA class II HLA class I

antigènes

DP DQ DRB1/B3/B4/B5

B C A

6 9 19 46 10 21

allèles (DNA)

(>1700)111 59 463 617 179 338

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